土牛膝提取物对正常及四氧嘧啶糖尿病模型小鼠血糖的影响

马文杰 魏得良 黄志芳 黄志红 胡吉林 刘大鹏

土牛膝，别名倒扣草，《中国药典汇编》对土牛膝有如下记载：药性：苦、凉。归肺、脾、肝、膀胱经。药效：败毒抗癌、逐淤除痹，消炎利尿。现代医学研究证明，土牛膝具有改善机体微循环，调整新陈代谢，改善免疫功能等作用，具有明显的抗炎抗菌作用、镇痛作用、抗衰老作用等[1-3]。近年来有研究表明牛膝含有的成分齐墩果酸、牛膝多糖具有治疗糖尿病的功效[4-6]，但土牛膝提取物在治疗糖尿病方面的研究尚无报道。本研究以本地野生土牛膝为原料，经过提取、分离、过滤、干燥得到土牛膝提取物齐墩果酸、牛膝多糖，观察土牛膝提取物对正常小鼠以及四氧嘧啶糖尿病模型小鼠血糖的影响，如果能确定土牛膝提取物齐墩果酸、牛膝多糖也具有降糖作用，将对糖尿病的治疗具有重要意义。

1 材料

1.1 土牛膝提取物齐墩果酸、牛膝多糖 取干燥土牛膝(湖南郴州郊外野生)150g，制成细块状药材，用冷水浸泡20min后取出，置煎锅中，加6倍量的水，大火加热水煮，经浓缩、过滤、干燥，得齐墩果酸精品[7]。另取一份同样药材，用75%乙醇回流提取，经过抽滤、洗涤、低温干燥得到牛膝多糖精品[8]。临用前用生理盐水配成所需浓度。

1.2 动物 昆明种小鼠，体重20～25g，雄性，湘南学院医学动物实验中心提供。

1.3 试剂和仪器 四氧嘧啶(Alloxan)北京恒业中远化工有限公司；生理盐水(自制)；肝素钠，天津药业焦作有限公司；降糖灵25mg/片，山东仁和堂药业有限公司，批号：080612；邻甲苯胺，海宁市通元化工厂；吐温-80，乐山科立鑫化工有限责任公司；其余试剂均为市售分析纯。电子天平,上海精密仪器仪表有限公司；离心机，江苏牡丹离心机制造有限公司；722型分光光度计，上海天翔光学仪器有限公司；小鼠用灌胃针头。

表1 齐墩果酸(OA)对高血糖小鼠的作用(n=10,±s，mmol·L-1)

表1 齐墩果酸(OA)对高血糖小鼠的作用(n=10,±s，mmol·L-1)

注：a.与模型小鼠对照组比较，P＜0.001。

组别 给药前平均血糖浓度 给药后平均血糖浓度空白对照组 5.36±0.40 5.55±0.38模型对照组 18.7±30.57 19.00±0.60 OA低剂量组 18.62±0.67 14.41±0.57a OA中剂量组 19.11±0.52 13.66±0.40a OA高剂量组 19.05±0.68 12.28±0.50a阳性对照组 18.33±0.36 14.34±0.42

2 方法与结果

2.1 有效剂量的换算 参考徐叔云教授主编的《药理实验方法学》[9]，通过人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值来进行换算，通过计算，每只小鼠的保守有效剂量是1.82g·kg-1。

2.2 土牛膝提取物齐墩果酸、牛膝多糖剂量组配制 精确称取齐墩果酸(OA)，加入2%的土温-80助溶；另精确称取牛膝多糖(ABPS)，用生理盐水稀释至100ml，配制成高、中、低剂量组；待用。

2.3 实验性糖尿病模型的制作 将四氧嘧啶用生理盐水配成浓度为0.7%的溶液。取昆明种小鼠，试验前禁食12h,腹腔注射四氧嘧啶0.12g·kg-1,第2天同样在禁食12h后腹腔注射四氧嘧啶0.1g·kg-1，72h后从小鼠眼眶或尾静脉取血，用邻甲苯胺法测血糖，选给药后血糖值＞13.8mmol·L-1者作为糖尿病小鼠。

2.4 齐墩果酸(OA)对小鼠血糖的影响 将糖尿病模型鼠随机分为5组，每组10只，分别为模型对照组(生理盐水)，土牛膝提取物齐墩果酸3个剂量组(4、8、12g·kg-1)，阳性对照组(降糖灵10g·kg-1)；另设空白对照组(OA12g·kg-1)，均按20ml·kg-1·d-1体积灌胃给药，连续给药14d。在末次给药前12h禁食，给药1h后眼眶或尾静脉取血，用邻甲苯胺法测定血糖值，所得数据进行组间t检验。由表1可见，齐墩果酸灌胃的正常和生理盐水的小鼠,血糖无明显影响，与糖尿病模型对照组比较，高、中、低剂量组能显著降低四氧嘧啶模型小鼠的血糖(P＜0.001)，与对照组(降糖灵)有相似的降糖效果。

2.5 牛膝多糖(ABPS)对小鼠血糖的影响 将糖尿病模型鼠随机分为5组，每组10只，分别为模型对照组(生理盐水)，土牛膝提取物牛膝多糖3个剂量组(2、4、8g·kg-1)，阳性对照组(降糖灵0.1g·kg-1)；另设空白对照组(ABPS12g·kg-1)，同上方法给药，测定血糖值，所得数据进行组间t检验。由表2可见，灌胃的正常和生理盐水的小鼠，血糖无明显影响，与糖尿病模型对照组比较，高、中、低剂量组能显著降低四氧嘧啶模型小鼠的血糖(P＜0.001)，与对照组(降糖灵)具相似降糖效果。

表2 牛膝多糖(ABPS)对高血糖小鼠的作用(n=10,±s，mmol·L-1)

表2 牛膝多糖(ABPS)对高血糖小鼠的作用(n=10,±s，mmol·L-1)

注：a.与模型小鼠对照组比较，P＜0.001。

组别 给药前平均血糖浓度 给药后平均血糖浓度空白对照组 5.40±0.34 5.54±0.37模型对照组 18.83±0.74 19.01±0.74 ABPS低剂量组 18.90±0.76 16.73±0.6a ABPS中剂量组 18.72±0.75 15.15±0.65a ABPS高剂量组 19.03±0.70 14.28±0.85a阳性对照组 18.33±0.36 14.34±0.42

3 讨论

实验结果表明土牛膝提取物齐墩果酸、牛膝多糖能够降低四氧嘧啶糖尿病模型小鼠血糖水平，对糖尿病小鼠有较好的治疗作用，降血糖作用和剂量相关。另外，对正常动物血糖影响较小，有利于今后开发成为低毒的降糖中药制剂。但其降糖机理还有待于进一步的深入研究。

[1]史玉芬,郑延彬.牛膝抗炎、抗菌作用的研究[J].中药通报,1988,13(7):44-47.

[2]陆兔林,毛春芹,张丽.牛膝不同炮制品镇痛抗炎作用研究[J].中药材,1997,20(10):507-509.

[3]马爱莲,郭焕.怀牛膝抗衰老作用研究[J].中药材,1998,21(7):360-362.

[4]唐黎明,吕志钧,张小萍,等.牛膝多糖药效学研究[J].中成药,1996,18(5):31-33.

[5]郝志奇,王瑛.齐墩果酸对小鼠的降血糖作用[J].中国药科大学学报,1991,22(4):210.

[6]李海泉.牛膝多糖降糖作用实验研究[J].安徽医药,2004,8(5):326-327.

[7]欧艳,徐耀华.牛膝中齐墩果酸的提取工艺[J],2003,14(3):65-69.

[8]陈晓明，徐愿坚，田庚元,等.牛膝多糖的理化性质研究及结构确证[J].药学学报,2005,40(l):32-35.

[9]徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,2002:202-204.