地佐辛注射液无菌检查法考察

2010-07-30黄新兰赵爱华陈小燕姜明霞戴亚琴

中国医药指南 2010年18期

黄新兰赵爱华翟艳陈小燕姜明霞刘芳戴亚琴

地佐辛是一种强效阿片类镇痛药，能缓解术后疼痛，其镇痛强度、起效时间和作用持续时间与吗啡相当，成瘾性小[1]。本试验按《中国药典》2005年版无菌检查法建立地佐辛注射液无菌检查的方法。

1 环境与仪器材料

1.1 仪器与试药

HTY-2000A型智能集菌仪（泵速设为160r/min）、KSF330一次性全封闭集菌器、HTY-K型培养器专用振荡仪（杭州泰林生物技术设备有限公司）、LRH-250生化培养箱（上海索普仪器有限公司）；地佐辛注射液（规格：1mL：5mg，由扬子江药业集团有限公司生产，批号09122801、09122901）。

1.2 试验用菌株

金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]、铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]、枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]、白色念珠菌[CMCC（F）98001]、生孢梭菌[CMCC（B）64941]、黑曲霉[CMCC（F）98003]（均来源于中国药品生物制品检定所，前4株菌传种代数为第三代，后2株菌为第二代）。

1.3 培养基、冲洗剂、中和剂及稀释剂

硫乙醇酸盐流体培养基（批号：091223）、改良马丁培养基（批号：091225）、营养肉汤培养基（批号：091223）、改良马丁琼脂培养基（批号：091225）均为北京三药科技开发公司； 0.9%灭菌氯化钠溶液、pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液（均由扬子江药业集团有限公司输液车间配制）。

2 方法与结果[2]

2.1 菌液制备

分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，接种生孢梭菌至硫乙醇酸盐培养基中，30～35℃培养18～24h；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，23～28℃培养24～48h。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1mL含菌数＜100CFU的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中，23～28℃培养5～7d，加入5mL 0.9%无菌氯化钠溶液将孢子洗脱，然后，吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1mL含孢子数＜100CFU的菌悬液。菌种制备结果见表1。

表1 验证用菌液的稀释度及接种量

2.2 方法学验证

2.2.1 试验组

在无菌室中，取一次性全封闭集菌器（三联）两套，于振荡器上振荡冲洗（共6管），将本品30瓶按薄膜过滤法均匀滤至6管中，2管中泵入改良马丁培养基（100ml）并夹紧管口；泵入硫乙醇酸盐培养基（100mL）至另4管中夹紧；于前两管中分别接入＜100CFU的白色念珠菌、黑曲霉，后4管中分别接入＜100CFU的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌，作为试验组。按规定温度将上述集菌器培养3～5d。

2.2.2 阳性对照组

取一次性全封闭集菌器（三联）两套，照“2.2.1”项下，重复操作，作为阳性对照，并按规定温度将上述集菌器培养3～5d。

2.2.3 阴性对照组

在无菌室中，取一次性全封闭集菌器（三联）两套，向两管中分别泵入改良马丁培养基（100mL）并夹紧管口，向另4管中分别泵入硫乙醇酸盐培养基（100mL）并夹紧管口。作为阴性对照组。

试验组、阳性对照组、中和剂对照组、阴性对照组的观察情况见表2。