新生儿缺氧缺血性脑病与T辅助细胞亚群功能的相关性探讨

李敏遐 候燕明 林冬云

新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic ischemic encephalopathy，HIE)是围生期新生儿因缺氧、缺血引起的脑部疾病，主要由宫内窘迫、新生儿窒息缺氧引起，窒息愈严重，时间愈长，脑病愈严重，后遗症发生率也愈高[1-3]。一般来说，轻度患儿预后良好，病情严重者可导致早期死亡或造成智能低下、脑性瘫痪、癫痫及共济失调等不可逆性脑损害，是引起新生儿死亡和(或)儿童神经精神发育障碍的主要原因。严重影响患儿今后的生活。

近年来，免疫系统在新生儿HIE中的作用受到关注，有报道指出Th1、Th2亚群及其相互之间的平衡关系与新生儿HIE的发生、发展、预后及转归有密切关系[2]。为进一步探讨T辅助细胞亚群功能与新生儿HIE的相关性，本研究对在清远市人民医院收治的患有HIE的新生儿80例进行T辅助细胞亚群检测，并与正常新生儿对比，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2008年3月至2009年1月清远市人民医院收治的HIE患儿80例，其中男48例，女32例，胎龄38.0～41.2周，平均（38.8±2.1）周；出生时体质量2650～3850g；入院时间为出生后1.0～44.5h，平均（15.6±2.8）h；临床分度为轻度HIE 28例，中度HIE 36例，重度HIE 16例。所有患儿的诊断标准和临床分度符合1996年中华医学会儿科分会新生儿组杭州会议制定的《新生儿缺氧缺血性脑病诊断依据和临床分度标准》[2]，并经头颅CT扫描确诊。同时选取于清远市人民医院产科同期出生的正常儿40例，作为正常对照组，其中男22例，女18例，胎龄37.5～41.5周，平均（37.5±3.2）周，出生时体质量2680～4000g，出生时及生后均无窒息及缺氧史。两组新生儿在性别、胎龄和出生体质量等一般状况等方面比较，P＞0.05，差异无统计学意义。

1.2 方法

1.2.1 标本采集

HIE患儿于就诊当时抽取股静脉血5mL，对照组新生儿在出生时留取脐带血5mL。将采集得的外周血经肝素抗凝，外周血单个核细胞(PBMC)的分离应用密度梯度离心法进行，用Buffer缓冲液(含2%FCS的0.1mol/L PBS)悬浮细胞，调整细胞浓度为5×106/mL，置于4℃，备用。

1.2.2 检测方法

采用Dynal免疫磁珠法对Th细胞进行分离纯化。用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养上清液中的γ-干扰素（IFN-γ）、白细胞介素2（IL-2）、IL-4及IL-6的水平，操作具体步骤按照试剂盒说明进行。

1.3 统计学方法

采用SPSS12.5统计软件包对数据进行处理，计量资料以均数±标准差（±s）表示，两组间比较应用t检验，率比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组新生儿T辅助细胞亚群分泌细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-6的水平比较

结果见表1。

表1 两组新生儿T辅助细胞亚群分细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-6的水平(±s，pg/mL)

表1 两组新生儿T辅助细胞亚群分细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-6的水平(±s，pg/mL)

与正常新生儿组比较，*P＜0.05，差异有统计学意义

2.2 HIE组病情不同程度患儿间T辅助细胞亚群分细胞因子水平比较

结果见表2。

表2 HIE组病情不同程度T辅助细胞亚群分细胞因子水平(±s，pg/mL)

表2 HIE组病情不同程度T辅助细胞亚群分细胞因子水平(±s，pg/mL)

与轻度缺氧缺血性脑病患儿比较，△P＜0.05，差异有统计学意义

3 讨 论

新生儿HIE是由于患儿在围生期缺氧所导致的颅脑损伤性疾病[4]，是临床上导致新生儿死亡及婴幼儿神经系统功能发育障碍的主要因素。而神经系统和免疫系统均是重要调节系统，共同维持机体内环境处在相对稳定的状态。当机体受到刺激产生应激反应或感染后，这两个系统常产生相互作用。免疫系统通过细胞因子对神经系统发挥着特殊的调节作用，相当一部分神经递质和内分泌激素受体均可存在于免疫细胞上[5,6]。

T辅助细胞根据其分泌细胞因子的不同而分成Th1和Th2两个亚型，Th1主要分泌IFN –γ、IL-2和TNF-α，以介导细胞免疫功能为主；Th2 主要分泌IL- 4、IL- 6、IL-8及IL-10等参与体液免疫的因子。正常情况下，Th1 /Th2保持在动态平衡的状态，任何一方的增多或减少都可能打破原有的平衡，导致患儿机体免疫功能异常。本实验检测IFN –γ、IL-2的水平来反映Th1的功能；IL- 4、IL- 6的水平来反映Th2的功能[7,8]。

本实验结果表明，本组HIE患儿IFN –γ、IL-2水平明显低于正常新生儿组，且IFN –γ、IL-2水平与患儿病情的严重程度呈负相关，病情越重，IFN-γ、IL-2水平越低。Th2 细胞所分泌的IL-4、IL-6明显增多，高于正常新生儿组，IL-4、IL-6水平与患儿病情的严重程度呈显著正相关，病情越严重，IL-4、IL-6的水平越高。呈现Th2功能亢进，Th1功能下降，Th1/Th2 比例失衡，提示Th细胞的异常表达对新生儿HIE的发病有重要意义。有研究指出，IL-6直接参与HIE脑损伤，IFN–γ、IL-2则通过损害机体的免疫功能间接引起新生儿脑损伤，其水平可反映患儿缺氧缺血的严重程度。因此，对新生儿的T辅助细胞亚群功能的检测，可为疾病的早期诊断、病情轻重程度的评估和判断预后的重要指标。

[1]韩玉昆. 新生儿缺氧缺血性脑病诊断依据和临床分度[J].中华儿科杂志,1997,12(2):99.

[2]中华医学会儿科学分会新生儿学组.新生儿缺氧缺血性脑病诊断标准[J].中华儿科杂志,2005,43(8):584.

[3]钱雁萍.螺旋CT在新生儿缺氧缺血性脑病中的应用[J].江西医药,2009,44(12):1252-1253.

[4]祝兆莲,曹洪英.新生儿缺氧缺血性脑病病因分析[J].黑龙江医学,2001,25(11):879.

[5]张园园,王青青,王建莉,等.NK受体KIR生物学功能的研究进展[J].免疫学杂志,2005,21(3):262-264.

[6]陈庆华,安云庆.自然杀伤细胞活化信号的转导和效应[J].首都医科大学学报,2005,26(3):360-362.

[7]王莉佳,赵晓东,刘恩梅,等.新生儿缺氧缺血性脑病T细胞活化受抑的机制探讨[J].实用儿科临床杂志,2003,18(2):116-120.

[8]郭炯光,洪小杨,钱淑鸯,等.新生儿血清S-100蛋白水平与脑损伤的关系[J].中国现代医药,2006,8(8):38-39.