七叶神安片质量标准研究

李玉英，曾雪花，谢雄瑞，吴俊贤

(1.广东省河源市药品检验所，广东 河源 517000; 2.广东省佛山市三水区人民医院，广东 佛山 528100)

七叶神安片为2005年版《中国药典(一部)》收载品种，原标准中只有人参皂苷Rb3的定量指标，没有人参皂苷Rb1的定量指标，且按药典标准检验时，从进样第2针开始人参皂苷Rb3和人参皂苷Rb1对照品色谱峰有时会消失。为使检验工作顺利进行并保证产品质量，笔者改进了人参皂苷Rb3的梯度洗脱方法[1]，并用高效液相色谱(HPLC)法测定人参皂苷Rb1含量[1－4]，效果满意。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪(美国Agilent公司);CP225D型电子天平(德国Sartorius公司);KQ－250D型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)。七叶神安片(昆明大观制药有限公司，批号为20080909;昆明兴中制药有限责任公司，批号为20080506;广东环球制药有限公司，批号为080903;广西北生药业股份有限公司，批号为090201);阴性对照样品(自制);人参皂苷Rb3对照品和人参皂苷Rb1对照品(中国药品生物制品检定所，批号分别为111686－200501和11704－200217);乙醇(分析纯，广州化学试剂厂)，乙腈(色谱纯，广州化学试剂厂)，磷酸(分析纯，广州化学试剂厂)，水(超纯水，自制)。

2 方法与结果

2.1 人参皂苷Rb3含量测定用梯度洗脱方法改进

色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相为乙腈(流动相A)，0.2%磷酸溶液(流动相B)，梯度洗脱按表1安排进行;流速1.0 mL/min;检测波长203 nm;柱温32℃;进样量10 μL。理论板数按人参皂苷Rb3峰计算应不低于6000。将药典中人参皂苷Rb3的梯度洗脱方法改进后，又做过8次试验，再也没有出现人参皂苷Rb3和人参皂苷Rb1对照品峰消失的现象。

表1 梯度洗脱条件

2.2 人参皂苷Rb1含量测定

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验

与2.1项相同。

2.2.2 溶液制备

精密称取人参皂苷Rb1对照品适量，加乙醇制成每1 mL含人参皂苷Rb10.25 mg的对照品溶液;取本品20片，除去包衣，研细，混匀，取约相当于2片质量，精密称定，置具锥形瓶中，精密加入乙醇20 mL，称定质量，超声(功率300 W，频率50 kHz)处理15 min，放冷，称定质量，用乙醇补足减失的质量，摇匀后滤过，得供试品溶液。

2.2.3 方法学考察

阴性干扰试验:取空白样品，按供试品溶液制备项下的方法提取并测定。结果阴性对照品溶液在人参皂苷Rb1对照品出峰位置无吸收，说明阴性无干扰(图1)。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:取人参皂苷Rb1对照品溶液，分别进样2.5，5.0，10，20，30，40 μL 测定。以人参皂苷 Rb1对照品进样量(μg)为横坐标(X)、峰面积积分值为纵坐标(Y)绘制标准曲线，回归方程为 Y=1.87684 X+8.40332，r=0.9999(n=6)。结果表明，人参皂苷Rb1进样量在0.625～10.00 μg范围内与峰面积线性关系良好。

重现性试验:取同一批(批号为20080909)样品，依法制备6份供试液并测定。结果人参皂苷Rb1的峰面积平均为562，RSD为0.2%(n=6)，表明方法重现好。

稳定性试验:取同一供试品(批号为20080909)溶液，分别于0，2，4，6，8，12，20，24 h 时依法测定。结果人参皂苷 Rb1峰面积平均值为566，RSD为0.3%(n=8)，表明供试品溶液在 24 h内稳定。

加样回收试验:取批号为20080909的样品约0.42 g，精密称定，置具锥形瓶中，平行取6份，分别精密加入人参皂苷Rb1对照品1.25 mg和乙醇20 mL，称定质量，超声(功率300 W，频率50 kHz)处理15 min，放冷，称定质量，用乙醇补足减失的质量，依法测定。结果见表2。

表2 人参皂苷Rb1加样回收试验结果(n=6)

2.2.4 样品含量测定

取4批样品，按供试品溶液制备方法制备溶液，分别精密吸取供试品溶液及对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定含量。结果样品的人参皂苷Rb1平均含量为0.29 mg/片。

3 讨论

按药典方法测定人参皂苷Rb3含量时，从进样第2针开始人参皂苷Rb3和人参皂苷Rb1对照品峰有时会消失。笔者认为药典中的梯度洗脱方法不合理，洗脱时流动相比例从50∶50转为30∶70只有6 min，时间太短，色谱柱中流动相比例不能有效达到规定，使对照品不能有效洗脱检测，色谱峰不会出现。改进药典中的梯度洗脱方法后，可以有效洗脱检测成分，因而再也没有出现对照品峰消失的现象。因此建议药典委员会改进人参皂苷Rb3高效液相含量测定用梯度洗脱方法。

2005年版《中国药典(一部)》收载品种七叶神安片的质量标准中没有人参皂苷Rb1的定量指标，参照2005年版《中国药典(一部)》，用HPLC法测定人参皂苷Rb1含量，结果人参皂苷Rb1与其他杂质峰分离度良好。HPLC法具有简便、准确、灵敏度高、回收率好等优点，能有效测定七叶神安片的人参皂苷Rb1含量。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:303－304.

[2]廖晓春，熊 毅，胡炜彦，等.高效液相色谱法测定七叶神安片中人参皂苷 Rb3的含量[J].药学分析杂志，2006，26(3):322 －324.

[3]高明菊，马 妮，曾 江，等.七叶神安滴丸质量标准标准研究[J].现代中药研究与实践，2003(S1):57－58.

[4]崔秀明，周家明，柯金虎，等.七叶神安滴丸对中枢神经系统的药效学研究[J].现代中药研究与实践，2003(S1):58－59.