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丹七片质量标准研究

2010-07-29廖名爱

中国药业 2010年10期
关键词:酚酸丹参乙醇

廖名爱

(江西省吉安市妇幼保健院,江西 吉安 343000)

丹七片收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》(第1册),由丹参、三七组成,具有活血化瘀作用,临床用于血瘀气滞、心胸痹痛、眩晕头痛、经期腹痛等。丹参的化学成分包括脂溶性和水溶性两大部分,水溶性成分是主要活性成分,以丹酚酸B含量最高,是抗心肌缺血的主要成分[1-3]。原标准中无定性定量标准,为此笔者研究了方中三七的薄层色谱鉴别(TLC)法、丹参中丹参酚酸B含量的高效液相色谱(HPLC)法[4],报道如下。

1 仪器与试药

HP-1100型高效液相色谱仪(美国),包括1322A在线脱气机、G1311A四元梯度泵、G1315A二极管阵列检测器、HP化学工作站;PBQ-Ⅰ型薄层自动铺板器(重庆南岸实验电器厂);SPU-Ⅰ型自动喷雾显色仪(日本岛津);CQ-250型超声波清洗器(上海船舶电子设备研究所);定量毛细管(美国Drummond公司);SimplicityTM型超纯水系统(Millipore公司)。丹参酚酸B、人参皂苷Rg1对照品均购于中国药品生物制品检定所;丹七片(江西心正药业有限公司)。

2 方法与结果

2.1 TLC法鉴别三七

取样品4片,研细,加甲醇30 mL,超声处理45 min,滤过,滤液蒸干,残渣加水20 mL溶解,用稀盐酸调节pH约为2,用醋酸乙酯20 mL振摇提取,弃去醋酸乙酯液,水层以水饱和正丁醇萃取2次,每次30 mL,合并正丁醇液,再用氨试液40 mL洗涤,分取正丁醇液,以水40 mL洗涤2次,弃去水液,蒸干,残渣加甲醇1 mL使溶解,作为供试品溶液。按处方取不含三七的其他药材,照样品制备工艺及上述方法制成阴性对照品溶液。取人参皂苷Rg1对照品,加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液,作为对照品溶液。分别吸取对照品溶液5"L、供试品溶液、阴性对照品溶液2"L,点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上,以氯仿-醋酸乙酯 -甲醇 -水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置12 h的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,于105℃加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中,在与对照品溶液色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,阴性对照品溶液色谱则无此斑点(图 1)。

图1 三七的薄层色谱图

2.2 丹参酚酸B含量测定

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Agilent Hypersil C18柱(250 mm ×4.0 mm,5"m);流动相:甲醇 -0.15%甲酸(35 ∶65);流速:1 mL/min;检测波长:286 nm;进样量:10"L。在此条件下,对照品溶液、供试品溶液均在保留时间约7 min处有一色谱峰,见图2。

图2 高效液相色谱图

2.2.2 溶液制备

精密称取丹参酚酸B对照品适量,加50%乙醇制成每1 mL含568"g丹参酚酸B的对照品溶液。取样品10片,研细,取约0.3 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%乙醇25 mL,密塞,称定质量,超声提取30 min,放冷,再称定质量,加50%乙醇补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液,用微孔滤膜(0.45"m)滤过,取滤液,即得供试品溶液。取不含丹参的阴性样品,同法制备阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

线性关系考察:取对照品溶液适量,稀释成质量浓度分别为284.00,113.60,56.80,28.40,11.36"g/mL 的溶液,分别注入液相色谱仪测定峰面积,以进样量对峰面积进行线性回归,得回归方程 Y=16.5393075 X+44.1243,r=0.9999( n=6)。结果表明丹参酚酸B进样量在0.114~5.68"g范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验:精密吸取对照品溶液,重复进样6次。结果峰面积的 RSD为1.20%(n=6),表明仪器精密度良好。

稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液,每隔0.5 h或1 h,于8 h内依法测定。结果峰面积的 RSD为1.96%(n=6),表明供试品溶液在8 h内稳定。

重现性试验:取同一批样品,依法制成供试品溶液并测定。结果含量的 RSD为0.52%(n=6),表明方法重现性好。

加样回收试验:取样品适量,研细,取约0.15 g,精密称定,共6份,置具塞锥形瓶中,分别精密加入质量浓度为50.6"g/mL的丹参酚酸B对照品溶液15,20,25 mL各2份,按供试品溶液制备方法制备溶液并测定,计算回收率。结果见表1。

表1 丹参酚酸B加样回收试验结果(n=6)

2.2.4 样品含量测定

取不同批次的样品,依法制备供试品溶液并测定,以外标法计算含量。结果批号为 040201,040202,040203,040501,040502,040503,040304,050101,050102,050103 的样品中丹参酚酸 B 的含量分别为 2.699,2.578,2.631,2.596,2.641,2.386,2.961,3.448,3.295,3.087 mg/片。

3 讨论

本制剂中丹参是经水提取干燥后制成片剂,因此用超声提取方法进行含量测定操作简便,经与回流提取比较,提取效果无差别;提取溶剂选择了50%甲醇、甲醇、50%乙醇、75%甲醇进行比较,50%乙醇的提取效果较好;对溶剂用量和提取时间也分别进行了比较,确定用25 mL 50%乙醇超声提取30 min。

[1]范英昌,赵桂峰,张文治.丹酚酸B对大鼠心肌梗死过程中病理形态学的影响[J]. 天津中医学院学报,2004,23(1):12.

[2]刘 杰,高秀梅,王 怡.丹酚酸B对急性心肌缺血大鼠血流动力学的影响及作用分子机制研究[J]. 中草药,2006,37(3):409.

[3]武 骏,徐 立,许 立.丹酚酸B对兔离体心脏缺氧再复氧损伤的保护作用[J]. 中国药理学与毒理学杂志,2007,21(3):212.

[4]蒋万浪,袁祥慧.高效液相色谱法测定通脉颗粒中丹酚酸B含量[J].中国药业,2006,15(18):27.

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