阿仑膦酸钠肠溶片的质量和稳定性研究

曹 雯 ，张 育 ，孙勇兵 ，刘 艳 ，孙 进 ，何仲贵 *

（1.沈阳药科大学药学院，辽宁沈阳 110016；2.石药集团欧意药业有限公司，河北石家庄 050051）

骨质疏松症是指单位体积内骨量减少，使骨结构改变，从而导致骨脆性增加甚至骨折[1]。阿仑膦酸钠（alendronate sodium）是一种新的预防和治疗骨质疏松症的双膦酸盐类药物，因其作用强度高，疗效确切，可广泛用于治疗骨质疏松症、变型性骨炎、糖皮质激素诱导的骨质疏松症等骨类疾病[2]。随着人口老龄化，骨质疏松症和伴随的骨折越来越受到社会的关注[3]。目前上市的剂型只有普通片剂一种，但阿仑膦酸钠本身呈酸性，其不良反应主要集中于上消化道，如呕吐、胃部不适、胃灼热、食管炎、胃炎或溃疡等[4]，尤其是普通片剂易黏附在消化道壁上造成局部刺激甚至溃疡。

阿仑膦酸钠为酸性药物，在胃酸中溶解度下降，导致一些白色胶状物质出现，不利于吸收。阿仑膦酸钠的吸收机制为细胞旁路吸收，主要吸收部位是小肠，且胃部酸性环境不利于吸收时，肠溶制剂可以最大程度地发挥其临床疗效；阿仑膦酸钠对消化道上部有较强的刺激性，开发肠溶制剂可减少胃部不良反应的发生。因此，非常有必要考虑将其研制成肠溶片剂以减少阿仑膦酸钠对食道及胃部的强烈刺激，使患者服用更加方便、安全有效。本研究对合作研制的阿仑膦酸钠肠溶片进行质量和稳定性研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器

WFZ800-D2型紫外-可见分光光度计（北京第二光学仪器厂），RC2-5A智能药物溶出仪（天津大学精密仪器厂）。

1.2 试药

阿仑膦酸钠原料药（批号：040102，石药集团华盛制药）；阿仑膦酸钠肠溶片（石药集团欧意药业有限公司）；微晶纤维素（MCC，常熟市药用辅料有限公司）；预胶化淀粉（湖州展望化学药业有限公司）；淀粉（廊坊市淀粉厂）；十二烷基硫酸钠（天津市博迪化工有限公司）；乳糖（天津市博迪化工有限公司）；交联PVP（上海德祥医药技术有限公司）；PVP（天津市博迪化工有限公司）；欧巴代03B28796、欧巴代OY-P（上海卡乐康包衣技术有限公司）。

2 方法与结果

2.1 检测波长的选择

经UV扫描，阿仑膦酸钠与钼酸铵形成的衍生物在710 nm处有较大且稳定的吸收，再对空白辅料进行UV扫描，结果显示其在710 nm处无干扰吸收，确定阿仑膦酸钠肠溶片含量测定的检测波长为710 nm。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取经150℃干燥至恒重的阿仑膦酸钠对照品适量，加水溶解并定容制成每毫升含阿仑膦酸钠相当于阿仑膦酸0.20 mg的溶液，即得为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取样品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于阿仑膦酸40 mg），置200 ml量瓶中，加水适量，充分振摇，使阿仑膦酸钠溶解，加水至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。

2.4 含量测定方法

精密量取对照品溶液和供试品溶液，各2 ml，分别置25 ml量瓶中，加过硫酸铵溶液（1→100）3 ml，水浴中加热15 min，冷至室温，加钼酸铵溶液（取钼酸铵5 g，加水100 ml溶解，加 5 mol/L硫酸溶液 100 ml，混匀）2 ml，于 25℃以上放置15 min，加对甲氨基酚硫酸盐溶液（取对甲氨基酚硫酸盐0.5 g，加15%亚硫酸氢钠溶液195 ml，加20%亚硫酸钠溶液 5 ml，摇匀）1 ml，于 25℃以上放置 15 min，加 34%醋酸钠溶液5 ml，加水至刻度，摇匀，滤过，照分光光度法（《中国药典》2000年版二部附录Ⅳ），在710 nm波长处测定吸收度，计算，即得。方法学实验得出，方法回收率的平均回收率为100.76%，系统精密度RSD为0.602%，溶液稳定性得出该溶液在实验4 h内稳定。

2.5 线性关系考察

精密称取阿仑膦酸钠对照品适量，以水溶解并稀释至浓度约1 mg/ml（按阿仑膦酸计）的贮备液。精密量取贮备液适量，用水分别稀释至浓度（按阿仑膦酸计）为100、140、170、200、230、260 μg/ml，依法操作进行测定。记录吸收度，线性相关性见图1。结果表明阿仑膦酸钠在（按阿仑膦酸计）100～260 μg/ml范围内呈良好的线性相关性（r=0.9995）。

2.6 样品含量测定

按含量测定项下的方法对3批样品（批号：20040401、20040402、20040403）进行含量测定。并另外测定其含量均匀度，方法：取本品1片，置乳钵中，研细，加水适量，研磨，并用水分次转移至50 ml量瓶中，充分振摇使阿仑膦酸钠溶解，加水至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2 ml，置25 ml量瓶中，照含量测定项下的方法依法测定，结果见表1。

表1 样品含量测定结果（%，n=3）Tab.1 Content determination results of samples(%，n=3)

由表1可知，所测定的各个批次样品含量和含量均匀度均符合《中国药典》相关规定。

2.7 释放度检查

2.7.1 测定波长的确定 经UV扫描阿仑膦酸钠的醋酸钠缓冲液（pH=6.8），测得在710 nm处有较大且稳定（无干扰）的吸收，确定释放度测定的检测波长为710 nm。

2.7.2 测定方法 取本品2片，照释放度测定法（《中国药典》2000年版二部附录ⅩD第二法，仪器装置采用附录ⅩC第三法），以0.1 mol/L盐酸溶液700 ml为溶剂，转速为75 r/min，依法操作，经2 h，立即弃去酸液，随即加入醋酸钠缓冲液700 ml，继续依法操作，经45 min时，取溶液滤过，精密量取续滤液和对照品溶液各3 ml，分别置25 ml量瓶中，加1 mol/L 硫酸溶液 1.2 ml，加过硫酸铵溶液（1→100）6 ml，水浴中加热15 min，冷至室温，加钼酸铵溶液（取钼酸铵5 g，加水 100 ml溶解，加 5 mol/L 硫酸溶液 100 ml，混匀）4.5 ml，于25℃以上放置15 min，加对甲氨基酚硫酸盐溶液（取对甲氨基酚硫酸盐0.5 g，加15%亚硫酸氢钠溶液195 ml，加20%亚硫酸钠溶液 5 ml，摇匀）2 ml，于 25℃以上放置 15 min，加 34%醋酸钠溶液5 ml，加水至刻度，摇匀，滤过，照分光光度法（《中国药典》2000年版二部附录Ⅳ），在710 nm波长处测定吸收度，计算出每片的释放量，限度为标示量的80%，应符合规定。

2.7.3 释放度的测定 依据上述测定方法，测定肠溶制剂的释放行为，见图1。由图1可知，该制剂在模拟胃液中2 h内均未出现裂缝、崩解或溶胀的现象，在模拟肠液中45 min后的释放量大于标示量的80%，所制备阿仑膦酸钠肠溶片达到了肠溶的目的。

图1 释放度曲线Fig.1 The release curve

考察了同一批次内药物（批号：20040402）释放的均一性以及批次间的释放均一性。取同一批次内的6个样品进行释放度测定，结果见图2，结果表明所制备阿仑膦酸钠肠溶片（批号：20040402）批内均一性良好。另外取3个批次的样品进行释放试验，结果见图3，各批在模拟小肠液内的释放均一性良好。总之所制备的阿仑膦酸钠肠溶片不仅具有肠溶特性，还具有良好的批内和批间均一性。

图2 释放均一性试验（批号：20040402）Fig.2 The test of reproducibility of drug release(No.20040402)

2.8 稳定性研究

图3 不同批号释放均一性试验Fig.3 The test of reproducibility of drug release for different batch

将各批次样品进行高温、强光照和高湿度的影响因素试验，于第5、10天取样考察与当天数据比较。实验结果表明，样品分别在高温、强光照以及RH为75%条件下10 d均未见明显质量改变，在RH=92.3% 放置10 d，仍未见明显质量改变，但吸湿增重均大于5%，说明本品应采用防潮包装。加速试验则将两种剂量规格的上市包装样品各3批，留样6个月（40℃，RH=75%），并于第 1、2、3、6 个月取样考察，与 0 个月数据比较，结果见表2。室温留样实验表明，在为期6个月的观察内，样品均未见明显质量改变。

表2 加速稳定性试验Tab.2 The test of accelerated stability

3 讨论

阿仑膦酸钠为双膦酸盐类药物，其既无紫外吸收又无荧光吸收，国内市售阿仑膦酸钠片的质量标准中均采用钼蓝比色法进行含量测定及溶出测定，此法准确可靠。应用钼蓝比色法测定阿仑膦酸钠的原理是将有机膦酸盐分解氧化成无机磷酸盐，在酸性溶液中与钼酸铵反应生成磷钼黄，再被还原剂还原成磷钼蓝，使溶液呈现深蓝色，710 nm波长处比色法测定吸收度。因此，《中国药典》2000版中采用的人工肠液（磷酸盐缓冲液pH=6.8）对钼蓝比色法有干扰。考虑到此药的特殊性，笔者通过试验并参考《中国药典》标准配制成醋酸钠缓冲液pH=6.8模拟人工肠液，试验结果证明，效果良好，溶出前后pH值基本没有改变；又因为钼蓝比色法对溶液酸度有一定要求，所以溶出样品测定前应先消除缓冲液的缓冲能力，通过试验笔者选择一定浓度的硫酸溶液中和醋酸钠缓冲液，并通过正交试验优化了试剂用量。

阿仑膦酸盐是一种有效地抑制破骨细胞吸收作用的二磷酸盐类化合物，能增加骨密度，预防椎骨、髋骨以及其他部位骨病变的发生，总得来说，它是安全的，能广泛地用于绝经期后妇女骨质疏松症的治疗[5-6]，但它也具有比较严重的上消化道毒副反应，包括食管和胃部的溃疡、恶心、腹痛等[7]。据国外文献报道，在一个随机、双盲为期3个月的临床试验中，受试者共75人，试验组分为A组阿仑膦酸钠片（10 mg/d）、B组阿仑膦酸钠片（70 mg/周）、C组阿仑膦酸钠肠溶片（70 mg/周）三组，结果显示，A、B、C三组疗效相当，而胃灼烧的发生率分别为 7例（28%）、3例（12%）、2例（8%）。由此可知，阿仑膦酸钠肠溶片的胃部不良反应明显降低[8]，将其制成肠溶片能够有效降低其不良反应，增加用药安全性，具有非常重要的临床意义。

市售的阿仑膦酸片有10 mg/d、70 mg/周两种规格，临床研究表明两种剂量疗效相等，安全性无明显差异，但是70 mg/周规格一方面增加了患者的顺应性，另一方面可以通过降低给药次数，使得上消化道的不良反应降低。虽然70 mg/周的给药方式在一定程度上降低了不良反应，但是它没有从根本上来消除上消化道刺激性。与之相反的是，肠溶片在原则上降低了消化道刺激性。当然推荐将上述两个优点合并，即70 mg/周的阿仑膦酸肠溶片。

对于一些具有食道和胃黏膜刺激性大的药物，包括红霉素、阿司匹林、双氯芬酸钠、吲哚美辛、呋喃妥因等，目前均已制成相应肠溶制剂，原因主要在于可以有效地降低食道和胃黏膜刺激性；同时小肠的刺激性也小。这主要是由于小肠的迅速蠕动（推进）和混合运动，使得药物与肠黏膜的接触时间较短，导致对小肠刺激性小；而胃部只有混合运动，使得药物与胃黏膜的接触时间较长；再加上小肠具有非常大的比表面积，因此阿仑膦酸钠肠溶片可以有效降低上消化道刺激性，同时对肠道刺激性也小。

据文献报道，阿仑膦酸钠肠溶胶囊及其制备方法，其专利产品在45 min时平均有93%释放出来，这与笔者研制产品相似（约95%）。阿仑膦酸钠肠溶胶囊与进口阿仑膦酸钠片（福善美）生物等效，且不良反应明显降低[9]。这说明与普通片相比，阿仑膦酸钠肠溶定位释放不会影响药物体内吸收行为，阿仑膦酸钠肠溶片会表现出与普通片相类似的药动学和药效学性质。

综上所述，阿仑膦酸钠肠溶片在模拟胃液中2 h不释放，在模拟肠液（pH=6.8）中45 min释放度大于标示量的80%，且批间和批内的释放度均一性良好，药物含量符合《中国药典》规定，稳定性试验表明，样品质量均未见明显改变。阿仑膦酸钠为水溶性良好的药物，其吸收方式为细胞旁路被动扩散，因而口服生物利用度较低，约为0.7%，且食物和矿物质等可显著减少其吸收，故可以进一步考虑增加其生物利用度，如制成生物黏附制剂、前体药物等方式。

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[8]刘红梅.阿仑膦酸钠片[J].中国新药杂志,1996,5(5):340-341.

[9]徐成,胡传良,秦勇,等.一种阿仑膦酸钠肠溶胶囊及其制备方法[P].CN101601662:2009,6-30.