HST－302血细胞分析流水线有关复检规则的建立

杜 丹，胡成进，孔立新，王延群，孙子涵，孙 黎，林 静

随着自动血细胞分析技术的飞速发展，及全自动血细胞分析仪的广泛使用，传统的血涂片显微镜检查法，逐渐成为仪器检测结果的补充方法。但众所周知，血细胞分析仪白细胞分类计数功能仅体现在血细胞形态和比率大致正常的情况下，当存在形态异常的细胞时，仪器便很难准确识别分辨，此时必须进行涂片复检[1]。如何更好的将仪器法提供的参数与人工镜检相结合，为临床提供更加准确完善的检测报告，是目前各国血液学专家都在共同关注的课题[2-6]。国际血液学复检专家组历时3年通过对13 298份血液学标本进行分析后，于2005年提出了41条自动血细胞分析和分类复检规则（后简称“国际复检规则41条”）[6]，2008年丛玉隆教授带领的“XE－2100复检协作组”联合国内三家大型医院用1年的时间通过对3 594份临床血液标本的分析，制定了适合中国人群应用XE－2100血细胞分析仪的白细胞分类涂片复检规则23条（后简称“XE－2100复检规则23条”）[7]。但由于各实验室所使用血细胞分析仪的性能特点不同，医院规模及病种差异不同，即使是同一型号的仪器因实验室要求不同，筛选标准也可不同，因此各实验室应根据自身特点制定适应实验室应用的血细胞复检规则。为此，笔者结合所在实验室仪器特点及医院要求，在 “XE－2100复检规则23条”的基础上，结合“国际复检规则41条”，制定了适合所在实验室常规工作需求的自动血细胞计数与WBC分类的复检规则。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本来源 1 212份血常规标本，EDTA-K2抗凝，均来自济南军区总医院住院患者，其中初诊标本934份，复诊标本278份，所有标本均在采血后4 h内检测完毕并推片染色。

1.1.2 仪器与试剂 主要仪器为Sysmex HST－302全自动血细胞分析流水线，包括Sysmex XE－2100全自动血细胞分析仪2台，SP－1000i自动推片机1台，原装配套试剂、质控品均由日本Sysmex公司提供。Olympus双筒显微镜购自日本奥林巴斯光学株式会社。

1.2 方法

1.2.1 仪器的调试与校准 评估前，由Sysmex公司的工程师用Sysmex校准物对2台仪器进行校准，并将仪器的灵敏度调整到同一水平，然后用高中低三个水平的质控品对2台仪器进行比对，保证仪器间结果一致性。试验期间每日均用全血质控品进行严格的室内质量控制，以监测结果的准确性和稳定性。

1.2.2 检测方法 所有标本按临床标本的常规检测流程和方法进行全血细胞分析检测并推片瑞氏染色，由推片机自动编号打印日期，由长期从事细胞工作并具有中级以上职称的检验人员按照文献[2]方法进行镜检。每张血涂片由2人分别镜检，取平均值。内容包括：①WBC分类计数：每人计数100个WBC，取均值为人工WBC分类值，并进行形态学观察；②WBC和PLT数量评估；③RBC和PLT的大小、染色及形态学观察；④有无巨大血小板及血小板聚集；⑤NRBC、RBC冷凝集及寄生虫等。

1.2.3 初步复检规则的制定 按照国内 “XE－2100复检协作组”制定的“XE－2100复检规则23条”执行[7]。

1.2.4 血涂片阳性判断标准 按照全国血液学复检专家小组提出的12条血细胞自动计数复检标准执行[9]。①红细胞明显大小不等（指细胞大小相差1倍以上）；中空淡染 （指>1/2淡染区的红细胞＞30%）；②巨大血小板＞15%；③见到血小板聚集；④Dohle小体的粒细胞＞10%；⑤中毒颗粒中性粒细胞＞10%；⑥空泡变性粒细胞＞10%；⑦原始和幼稚细胞≥1%；⑧早幼粒细胞和中幼粒细胞≥1%；⑨晚幼粒细胞＞2%；⑩异型淋巴细胞＞5%；⑾NRBC≥1%；⑿浆细胞≥1%。

1.2.5 初检规则的评估方法 将“XE－2100复检规则23条”输入XE－2100血细胞分析仪的Laboman4.2程序，仪器结果触发任一条规则即为仪器阳性，以人工镜检的结果对初检规则进行评估，以镜检结果为金标准，评估初检规则对标本判断的真阳性、假阳性、真阴性、假阴性，并进行统计学分析。真阳性定义为触发规则且镜检结果为阳性；假阳性定义为触发规则但镜检结果为阴性；真阴性定义为不触发规则且镜检结果为阴性；假阴性定义为不触发规则但镜检结果为阳性。

1.3 统计学分析 试验数据采用XE－2100复检协作组与Sysmex公司联合开发专用的Laboman4.2软件及Microsoft Excel软件进行统计学分析。

2 结 果

2.1 初检规则的应用评估 通过对1 212份标本的仪器检测结果和人工镜检结果对比，对“XE－2100复检规则23条”进行评估，统计结果显示真阳性率47.5%（576/1 212），假阳性率 14.6%（177/1 212），真阴性率29.0%（351/1 212），假阴性率 8.9%（108/1 212），通过对23条规则详细对比分析显示，假阳性出现较多的规则是嗜碱性粒细胞绝对值、未成熟粒细胞、核左移、原始细胞和有核红细胞；假阴性出现最多的规则是未成熟粒细胞及核左移，其次是异型淋巴细胞、原始细胞和少量的有核红细胞，阅片过程中发现PLT聚集、巨大血小板2项出现假阴性频率较高。

2.2 笔者所在实验室XE－2100血细胞复检规则的制定 根据对“XE－2100复检规则23条”的评估结果，及初检规则触发情况的详细分析，结合“国际复检规则41条”，初步拟定了适合笔者所在实验室常规工作要求及仪器特点的血细胞分析复检规则（表1）。

2.3 验证试验 为了验证制定的复检规则的有效性，将其设置在XE－2100的Laboman4.2软件中，选择200份标本进行验证，并与人工镜检结果进行对比分析，结果显示该规则的复检率为26.5%（53/200）， 真阳性率为 44.5%（89/200）， 假阳性率为19.0%（38/200），真阴性率为 33.0%（66/200），假阴性率为3.5%（7/200）。假阳性主要由嗜碱性粒细胞绝对值、未成熟粒细胞、核左移和有核红细胞引起，假阴性主要由巨大血小板、血小板聚集、异形淋巴细胞和少量有核红细胞引起。

3 讨 论

“XE－2100复检规则23条”在笔者所在实验室Sysmex HST－302全自动血细胞分析流水线上应用后发现，1 212份标本中，假阳性出现较多的规则是嗜碱性粒细胞绝对值、未成熟粒细胞、核左移，还有少量原始细胞和有核红细胞，假阴性出现最多的规则是未成熟粒细胞及核左移，其次是异型淋巴细胞、PLT聚集、巨大血小板、原始细胞和少量的有核红细胞。由此可见出现假阳性和假阴性较多的规则集中在未成熟粒细胞、核左移，原始细胞和有核红细胞几项，经反复测试多方查找原因后发现：①笔者所在实验室所用2台XE－2100血细胞分析仪并未开通有核红通道，故对有核红细胞的阳性报警仅能作为参考信息，工作人员应在此基础上进行人工镜检，计数有核红细胞百分数，并计算校正后白细胞总数；② XE－2100五分类血细胞分析仪对未成熟粒细胞的检测方法为射频加阻抗法，对幼稚细胞的识别应该较为准确，复查核对中发现部分未成熟粒细胞出现假阴性且白细胞未分类的标本，在IPU里已有未成熟粒细胞报警信息提示，而且超出了阳性临界值，但Labomanr4.2却没有提示未成熟粒细胞阳性，其原因可能与未分类标本的相关设置有关，或者为IPU和Laboman4.2之间的传输问题，上述标本因未分类触发了DC规则，所以并未造成漏检，但该问题已与厂家工程师联系期待有效解决，避免在以后的工作中造成漏检；③嗜碱性粒细胞绝对值假性偏高是近期出现的问题，尤其是肺癌等肿瘤化疗患者其散点图出现明显拖尾现象，笔者抽取部分假阳性标本用其他实验室的同型号仪器进行检测，结果全部阴性，即无一例提示嗜碱性粒细胞绝对值偏高。该结果提示，笔者所在实验室使用的XE－2100血细胞分析仪在嗜碱性粒细胞计数方面敏感度偏高，应对仪器进行重新校正后使用。另一方面，笔者所在医院近期更换了部分2 ml肝素抗凝管，有可能这种型号的抗凝管储存的标本会对仪器的检测造成一定影响。另外，巨大PLT假阴性率较高，可能是由于仪器在分类时将部分巨大PLT误认为小淋巴细胞所致，故在复检规则里添加了MPV报警一项，以期进一步降低假阴性率。

表1 笔者所在实验室HST－302血细胞分析流水线复检规则25条

在本次评估中发现Sysmex XE－2100全自动血细胞分析仪在细胞计数方面的准确度比较高，其白细胞分类的绝对值和百分率与人工镜检分类的结果有较好的符合度，“XE－2100复检规则23条”中3－14条计数规则基本符合笔者所在实验室的工作需求，出现的假阳性和假阴性率都较低，因此在后续规则的制定中未做较多调整。但对部分异常细胞的判断仪器报警与人工镜检结果有一定偏差，如红细胞大小不等、中空淡染、异形淋巴细胞和巨大血小板等，这可能与仪器的灵敏度有关，也与阅片者的技术水平及涂片中细胞分布的差异有关。但在目前的研究中尚未有因红细胞形态异常造成假阳性或假阴性的情况出现。

在制定复检规则的过程中，根据评估结果并结合临床医师的建议，对“XE－2100复检规则23条”进行了部分调整。所遵循的原则是：①建立一份适合笔者所在实验室实际工作需求的复检规则；②在保证筛选质量的基础上尽量降低复检率；③假阴性率控制在5%以下，具有诊断意义的重要参数不能出现假阴性；④在较低假阴性的基础上降低假阳性率[1]。笔者针对导致假阴性和假阳性较高的规则做了相应调整，增加了PLT聚集和巨大PLT两项。验证结果表明，假阳性率（19.0%）有所提高但未超过血液学复检专家组认可的许可范围，假阴性率降至为3.7%，符合血液学复检专家组认可的<5%的许可范围，并且血液病标本无漏检。

临床实验室制定的涂片复审标准使用后，随着仪器使用时间延长应定期对复检规则进行评估校正，不断改进和完善以保证其与仪器的匹配度长期有效。

[1]丛玉隆.ISO15189认可现场评审引发的对细胞形态学检验问题的思考[J].中华检验医学杂志，2008，31:725-728.

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