红花黄色素的提取与纯化工艺研究

2010-07-25牛丽红刘军凯

中成药 2010年7期

关键词：黄色素大孔红花

牛丽红，刘军凯，刘伟

(1.北京化工大学北方学院，河北三河065201;2.北京化工大学化工学院，北京100029)

中药红花中所含红花黄色素为查耳酮类化合物，属于水溶性的物质。本文在单因素实验的基础上，运用正交实验法优化水提取工艺条件，确定较适合的提取方案，并对提取液进行分离提纯，以期获得较纯的红花黄色素。

1 方法及原理

1.1 实验试剂与仪器

721分光光度计(上海第三分析仪器厂)，R-201旋转蒸发仪(上海申胜生物技术有限公司)，W20113恒温水浴锅(上海申胜生物技术有限公司)，红花(购于成都理工大学校医院)，羟基红花黄色素A(中国药品生物制品检定所)，大孔树脂(购于蓝光辰业生物制药有限公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 提取方法称取碾磨粉碎过的定量红花100 g，放入锥形瓶中，加一定体积的水，置水浴锅，恒温提取，过滤定容至100 mL。以黄色素溶出量作为评价指标，先采用单因素进行考察(分别考虑水的加入量、煎煮时间、煎煮温度的单因素条件)，再通过正交实验确定红花黄色素(简称SY)的较宜提取工艺条件。

1.2.2 除杂方法以红花黄色素的纯度为考察指标，先后采用醇沉法和大孔树脂吸附法纯化红花提取液，即将水浸取液经醇沉出的黄色沉淀，再用水溶解，除去不溶物，通过大孔树脂除杂，乙醇为洗脱剂，反复处理得到纯的黄色素粉末。

1.3 分析方法［1］

根据2005版《中国药典》规定，采用分光光度法测定提取液中红花黄色素的含量。

1.3.1 最佳波长的选择取一定量的红花提取液，采用分光光度法，选择波长360～490 nm进行测量，确定红花黄色素的最大吸收波长为390 nm。

1.3.2 标准曲线的绘制取红花黄色素标准品3 mg，溶于10 mL 的量瓶中。分别取0.25，0.5，0.75，1 mL 于 10 mL 量瓶中稀释，得到浓度为 0.0075，0.015，0.0225，0.03 mg/mL的红花黄色素标准溶液，在390 mn处测其吸光度。得到标准曲线:C=0.1455A-0.0028，r=0.9991。

2 结果和讨论

2.1 红花黄色素提取工艺研究

2.1.1 单一因素筛选通过单因素实验结果，如图1，2，3可见，浸泡温度超过60℃，浸提比较完全，浸提溶剂的用量应控制在15倍以上，浸提时间至少1h，浸提时间过长反而会使黄色素损失，这与红花黄色素的热不稳定性有关。

图1 溶液体积对红花黄色素浸出的影响

2.1.2 正交实验根据单因素实验得到的实验结果，设计正交实验 L49(即:水用量(倍)10，15，20，提取次数 1，2，3，浸泡时间0.5，1，2 h)，进一步探讨优化红花黄色素的水提工艺条件，并进行方差分析，结果可知，影响红花黄色素提取量的条件大小顺序为:提取次数＞水用量＞提取时间，以提取次数影响最大。由正交实验表分析得出水浸泡提取较优的工艺条件为:A2B3C2，即水提取3次，每次加15倍水，每次提取1 h。据此条件，验证3次，结果表明，该提取工艺条件基本稳定，所得提取液中红花黄色素的含量为101.16 mg/g红花。

图2 浸泡温度对红花黄色素浸出的影响

图3 浸泡时间对红花黄色素浸出的影响

2.2 红花黄色素纯化工艺研究

2.2.1 乙醇沉降除杂工艺研究见表1。

表1 乙醇沉降浓度影响结果

从表1可知，红花黄色素在醇沉除杂时纯度都有不同提高，唯在采用90%乙醇沉时，其提取液纯度最高(17.76%)，与原料相比，其纯度提高了7.91%，且收率也为所有工艺中较优的。

2.2.2 大孔树脂除杂工艺研究

2.2.2.1 大孔树脂的选择通过静态吸附，选择吸附效果比较好的树脂。(考察指标吸附速度、吸附容量)。

分别取1 g树脂，加入20 mL红花黄色素醇沉液(C=5.236 mg/mL)，每隔一定时间测量一次吸光度，直至其饱和为止，实验结果见图4，5。

结果表明，D605树脂与D160树脂吸附容量与吸附速率均为一般，D101树脂虽在吸附速率上略差于D140树脂，但在吸附容量上明显要优于其他种类的树脂。故选择D101树脂为宜。

2.2.2.2 动态吸附取已处理过的D101树脂5 mL，装柱，加入红花醇沉液，浓度为20.57 mg/mL。控制工作流速为2BV/h。据图5可知起先2 mL为湿树脂中的水被洗脱下来，从2 mL开始红花黄色素开始少量流出，直至4 mL左右以达到饱和，开始泄漏。可计算得到1 g D101树脂动态吸附红花黄色素约为11.8 mg。