胚胎发育对囊胚形成的影响*

鲁振宇 张云山 糜若然

常规体外受精（IVF）或卵胞浆内单精子注射（ICSI）发育形成的胚胎一般在体外培养2～3 d，于4～8个细胞期移植回子宫腔。然而，将胚胎培养至囊胚期移植更符合生理需要，是提高种植率、减少移植胚胎数目、避免多胎妊娠及减胎危险的有力措施。胚胎的发育潜能直接影响着囊胚的形成以及形成囊胚的质量。本研究主要应用第3天胚胎移植后无冻存价值的废弃胚胎进行体外培养，分析不同细胞数量和质量的胚胎对囊胚形成的影响，并且评价废弃胚胎的囊胚形成对妊娠结局是否有一定的预测意义，为临床实现囊胚期移植提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2006年12月—2009年5月在天津市中心妇产科医院生殖医学中心接受IVF-胚胎移植（ET）或ICSI-ET的196例不孕症患者移植后剩余无冻存价值的406个废弃胚胎，在患者签署知情同意书后用于本研究。主要试剂：G1.3、囊胚培养液（CCM）、矿物油、HSA（Vitrolife公司）。

1.2 方法 胚胎培养至第3天，将移植后无冻存价值的废弃的胚胎转移到囊胚培养液CCM中序贯培养至第5～7天，观察是否有囊胚形成，并对形成的囊胚按照Gardner[1]分级方法进行分级。移植后28 d B超检查发现妊娠囊视为临床妊娠。分析比较第3天胚胎细胞数与囊胚形成之间的关系；第3天不同质量胚胎的囊胚形成率、优质囊胚形成率有无差异；有囊胚形成的患者与无囊胚形成的患者妊娠率之间有无差异。

1.3 统计学处理 采用SPSS 12.0统计软件进行统计分析。计数资料用例（%）表示，行χ2检验，相关分析采用Pearson相关分析法，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 囊胚形成情况 196例共406个废弃胚胎中有64例共102个（25.12%）囊胚形成，其中优质囊胚28个，全部由Ⅱ+级以上胚胎形成。其中，细胞数＜4个的胚胎66个形成6个（9.09%）囊胚，细胞数4～5个的胚胎200个形成50个（25.00%）囊胚，细胞数6～11个的胚胎140个形成46个（32.86%）囊胚，第3天胚胎细胞数与囊胚形成率呈显著正相关关系（r=0.99，P ＜ 0.01），Ⅰ～Ⅱ+级胚胎与Ⅲ～Ⅳ级胚胎囊胚形成率、优质囊胚形成率比较差别有统计学意义（P＜0.01），见表1。

表1 第3天不同质量的胚胎对囊胚及优质囊胚形成的影响 例（%）

2.2 囊胚形成情况对妊娠情况的预测 64例有囊胚形成的患者有32例（50.00%）获临床妊娠，132例无囊胚形成的患者有38例（28.79%）获得临床妊娠，差异有统计学意义（χ2=10.43，P ＜ 0.05）。

3 讨论

将胚胎序贯培养到囊胚阶段进一步提高了对胚胎发育潜能的筛选。囊胚阶段移植，子宫内膜与胚胎发育同步，有助于妊娠率的提高[2]。并且可使移植的胚胎数目减少，从而降低了多胎妊娠发生的可能。本研究应用废弃的胚胎进行囊胚培养，培养方法简单、可靠。

胚胎的质量和囊胚的形成密切相关。Hardy等[3-4]研究表明，随着胚胎碎片的增多，囊胚形成率降低，囊胚的细胞数目尤其是滋养外胚层数目减少。当碎片>25%时，很少有胚胎能发育到囊胚阶段[3]。碎片<10%时不会影响囊胚的形成，但是碎片>15%,囊胚的形成率显著下降。碎片会影响细胞之间的连接，干扰细胞的融合、囊腔和囊胚的形成[4]；碎片释放的有毒物质会损伤其邻近的细胞，使其凋亡；碎片还会减少胞质的体积，耗竭胚胎发育所需要的细胞器[5]，造成卵裂球和（或）胞浆的损失。Neuber等[6]研究表明，第3天卵裂球数目≥7个的优质胚胎更容易发育成优质囊胚。囊胚形成率与卵裂速度成正比，卵裂速度较快的胚胎更容易形成优质囊胚[7]。本研究表明，第3天胚胎的细胞数与囊胚形成率呈正相关，第3天质量好、碎片少的胚胎更容易形成囊胚和优质囊胚，第3天胚胎的形态可作为囊胚培养的指标。虽然剩余质量差的胚胎仍有机会发育成具有正常染色体的囊胚，但是其非整倍体概率大大增加，且种植率和妊娠率较低，经患者签署知情同意书后选择丢弃或用于科学研究是正确可行的，特别是对来源非常有限的胚胎干细胞研究具有重要意义。

本研究发现，有囊胚形成的患者临床妊娠率高于无囊胚形成患者，说明剩余胚胎的囊胚形成情况可以间接预测妊娠与否。大量的研究也表明，剩余胚胎形成囊胚对于妊娠的预测有积极的作用[8-9]。

人胚胎4~8个细胞期刚刚开始出现基因表达，8个细胞期以前的胚胎存在发育阻滞的现象，多数发育潜能差、染色体异常的胚胎不能发育到囊胚阶段。因此，囊胚期胚胎具有更好的发育潜能。胚胎培养延长到囊胚期，使胚胎发育和子宫内膜的生理阶段同步化，宫颈黏液减少，利于移植操作，同时子宫壁收缩减弱，种植率提高。囊胚移植后着床率明显提高，减少了胚胎的移植数目，甚至可实行单胚胎移植，从而降低多胎妊娠的风险，提高了IVF的治疗效果。

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