HPLC法测定栀黄滴眼液中栀子苷的含量

郭 伟 赵惠萍

栀黄滴眼液为天津中医药大学第一附属医院眼科临床有效制剂。该药是由栀子、大黄等中药组成，具有清热泻火，解毒明目之功效，用于细菌性结膜炎、角膜炎、流行性角膜炎、结膜炎、沙眼、麦粒肿、霰粒肿等病症，多年临床应用，疗效显著。为有效控制产品质量，笔者采用高效液相色谱（HPLC）法对不同批号栀黄滴眼液中有效成分栀子苷进行了含量测定，结果方法简单、重现性好，可有效控制产品质量，现报道如下。

1 仪器与试药

岛津高效液相色谱仪（LC-10AT vp SPD-10A vp N2000数据工作站 浙江大学智能信息研究所）；色谱柱：Inertex C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；栀子苷对照品（中国药品生物制品检定所 批号：110749－200613）；栀黄滴眼液（天津中医药大学第一附属医院制剂室提供批号：071212，080520，0426-258-4）；乙腈、甲醇均为色谱纯；水为双蒸水。

2 色谱条件

色谱柱:Inertex C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈—水（13∶87）；流速：1.0 mL/min；柱温：室温；检测波长：238 nm；理论板数按栀子苷峰计算不低于3 000。

3 方法学考察

3.1 检测波长的确定 用贝克曼高效液相色谱仪，在190～600 nm进行波长扫描，栀子苷在238 nm处有最大吸收峰，根据《中国药典》2005年版一部栀子项下，确定238 nm为检测波长。

3.2 供试品溶液的制备 精密量取本品10 mL，置50 mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果见图1。

3.3 阴性样品溶液的制备 按处方比例及滴眼液制备工艺制备缺栀子的阴性样品，再按“3.2”供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液。结果见图1。

3.4 对照品溶液的制备 精密称取栀子苷对照品适量,用50%甲醇制成每1 mL含35 μg的溶液，作为对照品溶液。结果见图1。

图1 紫外线吸收光谱

3.5 线性关系考察 取栀子苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1 mL含0.172 mg的溶液，作为贮备液，再分别精密量取 5、10、15、20 mL，置 25 mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，分别精密吸取上述4种浓度的对照品溶液与贮备液各20 μL，注入液相色谱仪，按“2”色谱条件分析，测定各自峰面积，以对照品浓度（g/L）为纵坐标，峰面积值为横坐标，求得回归方程：Y=7.67E－008X。r=0.999 9。结果表明栀子苷在0.688～3.44 μg范围内线性良好。

3.6 重复性试验 取同一批号（080520）样品，取1份，精密量取10 mL，按照“3.2”供试品溶液制备操作，按“2”色谱条件分析，连续进样6次，测定样品中栀子苷峰面积，测得峰面积值的RSD为1.3%，符合要求。

3.7 稳定性实验 取同一批号（080520）样品，取1份，精密量取10 mL，按照“3.2”供试品溶液制备操作，按“2”色谱条件分析，分别在 0、1、2、3、4、5、6、7、8 h，测定样品中栀子苷峰面积，测得峰面积值的RSD为2.1%，符合要求。

3.8 重现性实验 取同一批号（080520）样品，共6份，精密量取10 mL，按照“3.2”供试品溶液制备操作，按“2”色谱条件分析，测定每份样品中栀子苷含量。结果样品中栀子苷平均含量为0.19g/L，相对均属标准±偏差值（RSD）为2.8%，符合要求。

3.9 加样回收率试验 取同一批号样品（批号080520，含量为0.19g/L），共6份，各精密量取5mL，分别加入栀子苷对照品溶液0.190g/L各5 mL，再按照“3.2”供试品溶液制备操作，制得供回收率试验用供试品溶液，按“2”色谱条件分析，计算回收率。结果见表1。

表1 回收率测定结果（n=3）

3.10 样品含量测定 取3个批号（071212，080520，0426－258－4）样品，按照“3.2”供试品溶液制备操作，按“2”色谱条件测定样品中栀子苷含量。按外标法计算栀子苷含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果

4 讨论

供试品溶液制备时曾对样品取样量及提取溶剂进行了考察,当取样量为10 mL时，用甲醇、50%甲醇提取栀子苷含量相近，由于甲醇提取的供试品溶液稍有沉淀，为避免污染色谱柱，所以选择50%甲醇为提取溶剂。对流动相进行筛选，结果乙腈—水（13：87）时，保留时间为 13 min，峰形较好，分离度、拖尾因子等均可。该方法经方法学考察，精密度、稳定性、重现性及回收率均较好，阴性实验无干扰，可作为栀黄滴眼剂质量控制的一个指标。