抑肝散对记忆障碍模型小鼠学习记忆能力的影响

周劲光 杨霄鹏

1)河南大学淮河医院临床教学办 开封 475000 2)郑州大学第二附属医院神经内科 郑州 450014

本文采用小鼠跳台法,以东莨菪碱、亚硝酸钠、乙醇分别造成不同类型的小鼠记忆障碍模型,观察抑肝散对这些记忆障碍模型小鼠的作用,探讨增强学习记忆能力的作用机制。

1 实验材料

1.1药品与试剂抑肝散方中各药材均购于南京市白敬宇大药房:当归为 Angelica sinensis(Oliv.)Diels的根,钩藤Unearia rhynchophy lia(Miq.)Jacks的干燥带钩茎枝,川芎为Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎,白术为Atractylodes macrocephala Koidz的干燥根茎,茯苓为 Poria cocos(Schw.)Wolf的干燥菌核,柴胡为 B.scorzonerifolium Willd的干燥根,甘草为Glycyrrhiza uralensis Fisch的干燥根及根茎。实验时按原方比例称取药材,常规水煎煮,浓缩,干燥制成浸膏粉(得率为22%),用时加蒸馏水配成所需浓度。实验中所用剂量均按生药量计。

氢溴酸东莨菪碱(scopolamine hydro-bromide)注射液,上海禾丰制药有限公司产品,批号080201;亚硝酸钠(Sodium nitrite,NaNO2),南京化学试剂厂产品,批号080203;无水乙醇,南京化学试剂厂产品,批号080110046;尼莫地平(Nimodipine,Nim),天津市中央药业有限公司产品,批号081104。

1.2仪器XT-911型小鼠跳台条件反射测试仪,医科院药研所制造。

1.3动物ICR小鼠,18～22 g,雌雄兼用,由中国药科大学实验动物中心提供。动物分笼饲养,保持昼夜节律,室温(22±1)℃,食水自由。

2 实验方法

2.1抑肝散对东莨菪碱所致小鼠学习记忆获得障碍的影响[1]

2.1.1 分组及给药:小鼠随机分组,抑肝散水提液给药组剂量分别为3、6、12 g/kg(按生药量计,下同),空白对照组与模型组分别给予等容积蒸馏水,阳性对照组给予尼莫地平30 mg/kg,各鼠每天分别灌胃1次,连续给药7 d。

2.1.2 训练:将XT-911型小鼠跳台条件反射测试仪电压控制在36 V,于末次给药后1 h进行小鼠学习记忆训练。训练前10 min,模型组与给药组分别ip氢溴酸东莨菪碱0.5 mg/kg,空白对照组ip等容量生理盐水,每批分别有4只小鼠给药,平行操作,10 min后再给第2批小鼠注射,以此类推。训练时将每批4只小鼠分别放入跳台仪的4个格子中,先适应环境3 min,然后通电,小鼠受电击后,多数跳上跳台,逃避电击,跳下时以小鼠双足同时接触铜栅为触电,视为错误反应,训练5 min,24 h后测试。

2.1.3 测试:先将小鼠放在跳台上,同时开始计时,记录小鼠第一次跳下时间,此为触电潜伏期(即为错误潜伏期),并记录5 min内跳下次数(即为错误次数),作为观察指标。

2.2抑肝散对亚硝酸钠所致小鼠学习记忆巩固障碍的影响

2.2.1 分组及给药:小鼠分组及给药同实验2.1.1。

2.2.2 训练:训练方法同实验2.1.2。训练结束后除空白对照组SC等容量生理盐水,其余各组立即SC亚硝酸钠120 mg/kg,24 h后进行测试。

2.2.3 测试:方法同实验2.1.3。

2.3抑肝散对30%乙醇所致小鼠学习记忆再现障碍的影响

2.3.1 分组及给药:同实验2.1.1

2.3.2 训练:训练方法同实验2.1.2

2.3.3 测试:测试前30 min,模型组与给药组分别ig 30%乙醇10 mL/kg,空白对照组给予等容积蒸馏水,测试方法同实验2.1.3。

2.4统计方法实验数据以均值±标准差(s)表示,组间均值比较采用t检验。

3 结果

3.1抑肝散对东莨菪碱所致小鼠学习记忆获得障碍的影响结果表明,与空白对照组相比,模型组潜伏期显著缩短,5 min内错误次数显著增加,说明ip东莨菪碱已造成小鼠学习记忆获得障碍。抑肝散12 g/kg组及尼莫地平组与模型组相比,明显延长实验小鼠的潜伏期,减少5 min内的错误次数。实验结果见表1。

表1 抑肝散对东莨菪碱所致小鼠学习记忆获得障碍的影响(s,n=14)

表1 抑肝散对东莨菪碱所致小鼠学习记忆获得障碍的影响(s,n=14)

与模型组比较,*P＜0.05,**P＜0.01

组 别 剂量(g/kg)错误次数 潜伏期(s)正常对照组 - 0.73±0.35** 249±77**模型组 - 3.3±1.2 71±43 Nim组 0.03 1.0±0.9** 203±84**YGS组 3 2.6±1.3 90±56 6 2.5±0.9 93±67 12 2.0±0.8* 114±48*

3.2抑肝散对亚硝酸钠所致小鼠学习记忆巩固障碍的影响结果表明,与空白对照组相比,模型组潜伏期显著缩短,5 min内错误次数显著增加,说明SC亚硝酸钠已造成小鼠学习记忆巩固障碍。抑肝散12 g/kg组及尼莫地平组与模型组相比,明显延长实验小鼠的潜伏期,减少5 min内的错误次数。实验结果见表2。

表2 抑肝散对亚硝酸钠所致小鼠学习记忆巩固障碍的影响(s,n=14)

表2 抑肝散对亚硝酸钠所致小鼠学习记忆巩固障碍的影响(s,n=14)

与模型组比较,*P＜0.05,**P＜0.01

组 别 剂量(g/kg)错误次数 潜伏期(s)正常对照组 - 2.1±0.9** 155±57*模型组 - 4.4±2.2 77±29 Nim组 0.03 2.2±0.9** 145±64*YGS组 3 4.3±1.6 93±43 6 3.5±1.6 93±39 12 2.6±1.3* 137±54*

3.3抑肝散对30%乙醇所致小鼠学习记忆再现障碍的影响结果表明,与空白对照组相比,模型组潜伏期显著缩短,5 min内错误次数显著增加,说明30%乙醇10 mL/kg灌胃已造成小鼠学习记忆再现障碍。与模型组相比,抑肝散6 g/kg、12 g/kg组及尼莫地平组潜伏期明显延长,5 min内的错误次数明显减少。结果见表3。

表3 抑肝散对30%乙醇所致小鼠学习记忆再现障碍的影响(s,n=14)

表3 抑肝散对30%乙醇所致小鼠学习记忆再现障碍的影响(s,n=14)

与模型组比较,*P＜0.05,**P＜0.01

组 别 剂量(g/kg)错误次数 潜伏期(s)正常对照组 - 1.08±0.44** 195±90**模型组 - 4.18±2.03 80±38 Nim组 0.03 2.30±0.93* 181±66*YGS组 3 3.00±1.64 114±60 6 1.82±0.94* 147±67*12 2.45±1.01* 143±68*

4 讨论

学习和记忆是一个极其复杂的生理生化过程,其基本过程大致可分为三个阶段:获得、巩固和再现。记忆障碍模型是评价药物对记忆过程影响的有效手段[2]。

东莨菪碱为M受体阻断剂,能阻断乙酰胆碱对M受体的激动作用,可模拟乙酰胆碱分泌不足而致学习记忆功能障碍[3-5]。亚硝酸钠可使血红蛋白变性,使脑组织缺血缺氧,损害学习和记忆过程[6]。乙醇抑制大脑皮质的神经功能活动,抑制动物的条件反射过程,使脑内蛋白质和RNA合成受阻,胆碱能和多巴胺等系统发生改变[7],破坏学习记忆功能造成学习记忆再现障碍。

本实验以东莨菪碱、亚硝酸钠、乙醇分别造成小鼠记忆获得、巩固和再现障碍模型,研究了抑肝散对不同记忆障碍模型小鼠学习记忆能力的影响。结果显示抑肝散明显对抗东莨菪碱、亚硝酸钠和30%乙醇等化学物质诱导的小鼠学习记忆障碍,对学习记忆的三个基本神经活动过程均有明显改善作用,说明抑肝散确有促智作用,且其促智作用是多层次、多环节的。

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