重度溶血对人血清生化项目检测干扰及消除干扰的研究

孟建博 张厚毅

1 山东省滕州市鲍沟中心卫生院（277500）

2 山东省滕州市中心人民医院（277500）

重度溶血的检查自从有生化指标检测以来就存在干扰现象。在全自动生化分析仪广泛使用的今天，干扰依然存在。国内外有大量关于消除干扰的文献报道，但并未见推广应用。文献报道[1,2]，溶血所致的血清中高浓度的Hb，对生化指标检测有干扰，消除干扰时使用高铁氰化钾法方法，虽能解决少部分问题，却未能系统地解决对其他项目的干扰。本研究将免疫学[3,4]方法引入到生化分析中。聚苯乙烯为载体的微球结合Hb抗体、在血清中与Hb发生特异性免疫反应，形成沉淀。离心分离上清液可将血清中干扰物质比较彻底地从血清中分离，旨在为医院实验室消除生化检测干扰探索新的途径。

1 材料与方法

1.1 研究对象

1.1.1 质控血清

RANDOX 2。

1.1.2 人血清来源

36例健康体检志愿者血清，无肉眼可见的脂血、溶血、黄疸。男17人，女19人，年龄18～62岁。

1.2 材料

1.2.1 血红蛋白抗体（已经聚苯乙烯微球结合）、生理盐水（0.9%）、小玻璃试管、加样器。

1.2.2 仪器

普通离心机、OLympus AU-2700生化分析仪。

1.3 方法

1.3.1 样品收集

所有体检者均于清晨抽取空腹静脉血4mL，分别向1个干燥小试管中注入2mL，1个肝素防凝管中2mL，37℃待检及处理。

1.3.2 高Hb血清制备

防凝血弃去血浆，红细胞用2倍体积的生理盐水洗3次，放入－40℃冰箱内（加等量生理盐水）、融化后离心、弃去沉淀物，上机测Hb浓度，调整终浓度为16g/L按比例加入到500μL血清中，配制系列浓度为0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0g/L的胆红素血清，补加适量生理盐水，使血清的稀释倍数为1倍。

1.3.3 高Hb血清的预处理

血清500μL加入高Hb溶液100μL，Hb抗体结合的免疫微球溶液适量，生理盐水补加到总容积1000μL，混匀，37℃水浴10min，离心分离，上清液待检。

1.3.4 检测

1.3.4.1 原始血清用在OLympus AU-2700上，严格按试剂盒说明书要求进行38项生化项目的检测。

1.3.4.2 高Hb血清在OLympus AU-2700上，严格按试剂盒说明书要求进行38项生化项目的检测。

1.3.4.3 经预处理的高Hb血清上清液在OLympus AU-2700上，严格按试剂盒说明书要求进行38项生化项目的检测。

1.4 统计学处理

2 结 果

2.1 质控血清的检结果

见表1。

表1 质控血清的检测结果

2.2 Hb对质控血清检测结果的干扰

Hb浓度增高，TP、ALB、TB、DB、TB、PA、Cr、GLU、CK、CK-MB、LDH、HBDH、Ca、P、Mg、CHO、TG、apoA1、apoB、检测结果也增高，UA、AMY、CO2CP、Lp（a）、IgM检测结果降低。Hb＞0.5g/L时ALT、AST结果无法测出（表2）。

2.3 36例血清、人工Hb血清及Hb单抗除Hb后的检测结果

表2 Hb对质控血清检测的干扰

人工Hb血清与对照血清比较TP、ALB、TBIL、DBIL、TBA、PA、Cr、UA、GLU、CK、CK-MB、LDH、HBDH、AMY、P、NCO2CP、apoB、Lp（a）、IgM显著升高，P＜0.01，人工Hb血清与对照血清比较Ca升高，P＜0.05。除Hb血清与人工Hb血清比较，TP、ALB、TBIL、DBIL、TBA、PA、Cr、UA、GLU、CK、CKMB、LDH、HBDH、AMY、P、NCO2CP、apoB、Lp（a）、IgM显著降低，P＜0.01，除Hb血清与人工Hb血清比较Ca降低，P＜0.05，而CK、CK-MB、LDH、P是另一种情况，即▲除Hb血清与人工Hb血清比较P＞0.05、与对照血清比较P＜0.01。#三组间任意两组比较P＜0.01。人工Hb血清与对照血清比较P＜0.01，除Hb血清与人工Hb血清比较P＜0.05，除Hb血清与对照血清比较P＜0.01。

3 讨 论

医院实验室日常工作中生化项目的检测，对于患者的诊治具有非常重要的作用。然而自从有关工作开展以来，到今天全自动分析仪广泛应用后，Hb对生化项目的干扰一直存在[5]，使用部分检测项目结果偏离甚至严重偏离真实值，这种血液比例虽少（约5%），患者病情却往往较重。本研究中也出现了日常工作中几乎每天都遇到的情况，即检测项目结果严重偏离真实值，甚至不显示检测项目结果。给临床医师诊断、治疗患者带来误导作用不容忽视。

表3 36例血清、人工Hb血清及Hb抗体除Hb后的检测结果（±s）

表3 36例血清、人工Hb血清及Hb抗体除Hb后的检测结果（±s）

注：**人工Hb血清与对照血清比较P＜0.01，*人工Hb血清与对照血清比较P＜0.05。△△除Hb血清与人工Hb血清比较P＜0.01，△除Hb血清与人工Hb血清比较P＜0.05。▲除Hb血清与人工Hb血清比较P＞0.05、与对照血清比较P＜0.01。#三组间任意两组比较P＜0.01。☆人工Hb血清与对照血清比较P＜0.01，除Hb血清与人工Hb血清比较P＜0.05，除Hb血清与对照血清比较P＜0.01

序号 项 目 对照血清 人工Hb血清 除Hb血清 单 位1 ALT 21.5±7.4 21.8±7.3 U/L 2 AST 22.6±8.9 22.2±8.6 U/L 3** TP 69.2±5.2 78.3±7.6 68.1±5.5△△ g/L 4** ALB 41.3 ±4.9 50.4±6.7 41.8±4.6△△ g/L 5** TBIL 15.5±6.2 38.3±10.2 15.9±6.3△△ μmoL/L 6* DBIL 4.2±1.8 8.7±3.5 4.3±1.6△△ μmoL/L 7** TBA 5.5 ±2.2 12.7±3.8 5.6±2.4△△ μmoL/L 8** PA 286.2 ±63.5326.5±78.4 278.4±64.7△△ mg/L 9 BUN 5.2 ±2.5 5.4±2.4 5.3±2.6 mmoL/L 10** Cr 70.6±21.7 127.8±45.6 68.7±22.3△△ μmoL/L 11** UA 302.4 ±95.8216.3±67.8 308.1±97.4△△ μmoL/L 12** GLU 5.0±1.2 3.9±1.6 4.9±1.1△△ mmoL/L 13** CK 63.1 ±23.8413.5±112.4 409.6±107.5▲ U/L 14** CK-MB 18.5 ±6.2 97.8±21.7 9.1±2.4# U/L 15** LDH 156.3±42.5895.6±217.9 876.7±220.6▲ U/L 16** HBDH 112.9±25.2679.5±174.7 114.9±23.9△△ U/L 17 AMY 125.7±59.8 56.7±25.6 132.5±53.6△△ U/L 18 CHE 7.8±2.5 7.9±3.6 7.6±2.8 kU/L 19 ALP 97.1±52.5 99.6±54.1 95.8±49.5 U/L 20 GGT 35.3±19.6 37.4±17.8 36.2±20.5 U/L 21* Ca 2.52±0.11 2.9±0.17 2.45±0.13△ mmoL/L 22** P 1.1±0.42 2.5±0.58 2.2±0.46△☆ mmoL/L 23** Mg 0.76±0.23 1.22±0.37 0.82±0.24 mmoL/L 24** CO2CP 25.3±3.2 12.4±2.3 24.6±3.1△△ mmoL/L 25 CHO 5.3±1.6 6.6±1.8 5.4±1.8△△ mmoL/L 26 TG 1.1±0.4 1.7±0.6 1.2±0.3△△ mmoL/L 27 HDL 1.2±0.25 1.3±0.26 1.3±0.23 mmoL/L 28 apoA1 1.3±0.3 1.8±0.5 1.2±0.2△△ g/L 29** apoB 0.8±0.2 3.2±1.1 0.9±0.1△△ g/L 30** Lp(a) 205.4±90.7 167.5±64.7 196.6±92.7△△ mg/L 31 IgA 1.6±0.8 1.7±0.9 1.7±0.9 g/L 32 IgG 12.3±4.9 12.6±4.3 12.6±4.5 g/L 33** IgM 1.4±0.6 0.8±0.4 1.3±0.5△△ g/L 34 C3 1.0±0.37 1.2±0.34 1.1±0.36 g/L 35 C4 0.25±0.13 0.26±0.12 0.24±0.12 g/L 36 ASO 126.7±90.9123.7±92.4 124.2±88.9 IU/mL 37 RF 6.3±4.5 6.3±4.6 6.5±4.2 IU/mL 38 CRP 5.9±3.6 6.2±3.3 6.2±3.4 mg/L

实验室收到高Hb血清时，通常要求对患者重新取样送检，但有些患者做生化项目检测是因病情需要，造成溶血的原因很多，重新取样患者的家属接受程度较难。轻度Hb对生化项目检测的影响较小，试剂生产商通过改进配方，调整实验参数，基本可消除上述影响。而重度高Hb通过上述方式处理却不能消除干扰。我们做此研究的目的是将Hb从血清中分离出去绝大部分，血清中残留的少部分不再对血清中其他成分造成干扰。

Hb的干扰机制及消除：文献报道[2,6]，Hb浓度对Ca、Mg、CK、AST、LDH、HBDH、CK-MB均随Hb浓度的增加而增高。溶血样本Ca、Mg、TBII、DBIL偏高的原因主要是Hb本身的色泽所致，因这些项目均用化学试剂盒，反应极其快速，自动分析、手工分析时均无法设置样本空血管和扣除本底空白，AST、LDH、HBDH升高是因RBC内这些物质含量高于血清，溶血后释放人血浆以致使结果升高；虽然RBC内无CK-MB，但溶血样本中CK-MB明显升高10倍，有人认为[6]这可能是CK-MB试剂中的抗CK-MB抗体与Hb或分子中的珠蛋白发生了抗原抗体交叉反应产生浊度，使单位时间内吸光度假性升高，以致结果增高。apoA随Hb浓度升高而降低，apoB则相反，可能原因Hb与apoB具有类抗原，apoA与Hb无类抗原。测定apoA时Hb阻碍apoA与其抗血清的反应结果降低，测定apoB时Hb虽有阻碍作用，但Hb与抗apoB抗体发生的非特异性反应大于其阻碍作用，最终使得结果升高，Cre、BUN、UA结果均随Hb浓度升高，而降低是因Hb可抑制这些反应。

溶血使红细胞内的Hb释放到血清中，由于Hb在300～500nm有吸光度，对有些项目的检测产生干扰。国内外报道，也有消除Hb的方法。这些方法虽然能起到一定的作用，但并未能将多余的Hb从血清中分离出去。我们利用Hb特异性抗体与血清中的Hb发生特异性免疫反应，结合抗体的免疫微球增加反应的灵敏度，形成沉淀，可有效地离心分离掉绝大部分的Hb，消除了Hb的干扰。另外，溶血使RBC内容物释放到血清中，除Hb外，还有复杂的RBC内容物，本研究只对Hb干扰作用进行消除，至于TBC内容物产生的干扰则过于复杂，如何消除未加以探讨。

本研究中Hb抗体结合的微球，加入到血清中，随后就发生特异性免疫反应，并形成沉淀，离心后已将绝大部分的Hb除去，检测结果与正常对照比较无显著性差别P＞0.05。有些项目如CK、LDH、AST、P等，溶血造成的干扰用Hb抗体结合的微球也不能消除，可能是复杂的RBC内容物所致。目前，Hb抗体在检验大、小便潜血方面得到广泛应用[3]，用于清除血清中高浓度Hb的方面的研究，至今未见报道。本研究是利用了免疫反应的特异性和免疫微球技术的高灵敏度来实现Hb从血清中分离，从而消除溶血对有些项目的检测产生干扰。

[1] 丛玉隆,张海鹏.血液学检验分析前质量控制的重要因素[J].中华医学检验杂志,1998,21(1):53.

[2] 刘露.血红蛋白、胆红素、脂血对全自动生化分析仪干扰机制初探[J].山西临床医药,2000,9(9):718.

[3] 兰小鹏.免疫微球技术进展[J].国外医学临床生物化学与检验学分册,1994,15(4):146.

[4] 岳秀玲.单克隆抗人血红蛋白抗体法检测尿中血红蛋白[J]. 临床检验杂志,1997,15(5):319.

[5] 刘丁.免疫学粪便隐血检测的研究[J].国外医学临床生物化学与检验学分册,1993,14(3):10.

[6] 靳敏.溶血对临床生化检验影响的探讨[J].广西医学,2002,24(9):1363.