ICU机械通气性鲍曼氏不动杆菌感染的同源性分析

赵颜忠，周建党

（中南大学湘雅三医院，湖南 长沙410013）

机械通气技术是ICU病房常用的医疗技术，它在许多急危重患者的抢救中发挥了极其重要的作用。然而，由于人工气道的建立，严重影响了人体呼吸系统的正常菌群，破坏机体的防御功能，极易发生肺部感染。国内外相关文献报道，由机械通气所引起的呼吸道感染的发生率在50%以上，死亡率可达33%～71%[1-2]。鲍曼氏不动杆菌作为机械通气性肺炎主要病原菌之一，由于其产生多种β-内酰胺酶，对多种抗生素具有高耐药性，临床治疗疗效不佳[3]。为探讨鲍曼氏不动杆菌感染引起的机械通气性肺炎、流行状况，本研究对湘雅三医院32例ICU病房鲍曼氏不动杆菌引起的机械通气性肺炎进行了基因分型与聚类分析，现如下报告。

1 材料和方法

1.1 一般资料

本组病例为中南大学湘雅三医院2009年8月～2009年10月32例机械通气术后，鲍曼氏不动杆菌引起的下呼吸道感染患者。其中男性19例，女性13例，平均机械通气时间11.2＋4.6天。本组患者治愈14例（40.0%），好转8例（25.0%）。自动出院 3例（15.0%）、死亡 7例（20.0%）。

1.2 培养基 血平板、巧克力平板、中国兰平板购自英国OXOID。

1.3 引物的设计与合成

随机引物设计一条含10bp的引物，序列为5'-ACCGTGACTG-3',由上海Songon生物工程公司合成。

1.4 仪器

美国Biometra公司PC-Persnol Cycler，生物梅里埃VITEK-2全自动细菌鉴定仪。

1.5 DNA提取

分离株置普通琼脂糖培养基37℃过夜，挑2～3个单个菌落加入100μL裂解液中，煮沸10min，12000r/min离心5min,取2μL DNA提取液。

1.6 PCR反应

反 应 体 系 25μL， 包 括 10 x Buffer 2.5μL，25mmol/L MgCL 2.5μL，200mmol/L dNTP 0.5μL，Primer 0.5μL,2.5U/μl Taq 酶 0.2μL，DNA 2μL，双蒸水 16.8μL。 反应条件 94℃ 5min，36℃ 5min，72℃5min 循环 5 次，94℃ 1min，36℃1min，72℃2min 循环30次，72℃延伸10min。PCR反应产物在15%琼脂糖凝胶中，电流60V，电泳2h后EB染色紫外灯下观察结果，并照相分析。

2 结果

2.1 气管导管性肺炎鲍曼氏不动杆菌感染RAPD基因分型

32株鲍曼氏不动杆菌经RAPD扩增后得到DNA片段的条带32条，每条带清晰可辨，见图1。

图1 部分鲍曼氏不动杆菌RAPD电泳图

2.2 聚类分析

32株鲍曼氏不动杆菌产生的扩增条带数在4～8之间，形成指纹图谱。将RAPD-DNA指纹图按扩增带的有无以0、1进行排列,输入计算机,以应用算术平均数的非加权成组配对法进行聚类分析,相似系数大于75%归为一个基因型,共分为5个基因型，其中Ⅰ型 16 株,分别为 1、3、4、9、10、15、17、18、19、26、27、28、29、30、31、32 号，Ⅱ型 1 株,为 20号，Ⅲ型 2 株,为 23、24 号，Ⅳ型 4 株,为 2、6、16、22号，Ⅴ型 9 株，分别为 5、7、8、11、12、13、14、21、25号。

图2 32株鲍曼氏不动杆菌聚类分析图

3 讨论

鲍曼氏不动杆菌多处于潮湿或干燥表面,并可在正常人皮肤上定植，医院中蒸馏水容器、瓶装水、静脉营养液、湿化器吸引管、冲洗液人工通气装置等易受到该菌污染。该菌一般不致病，野生型鲍曼氏不动杆菌通常对抗生素敏感，但在抗生素的作用下，其极易诱导成多重耐药与高耐药性菌株。

机械通气是抢救急危重呼吸功能衰竭患者生命的重要措施，但机械通气患者也大大增加了患者的肺部感染及多器官损害的危险。鲍曼氏不动杆菌作为引起机械通气肺炎的一种主要病原菌，特别是近年来，在ICU、老年患者及免疫功能低下患者的呼吸道感染中占有重要的地位[4]。本组32例鲍曼氏不动杆菌引起机械通气患者肺部感染患者中，22例患者得以成功的救治或好转，这虽然为机械通气在抢救严重呼吸功能衰竭中的作用提供了佐证，但也不能不引起注意，7例患者未能抢救成功，与国内外有关文献报道相似，这些问题值得认真研究、探讨。

机械通气肺部感染为医院内获得性感染，分析、探讨其传播途径、病原菌的来源等因素，对于临床抗感染治疗，预防感染的发生及及时、有效的控制感染具有重要意义。RAPD采用随机选择的单一引物通过DNA扩增，获得细菌基因组指纹图谱，通过对指纹图谱的分析来研究细菌的基因分型、克隆、鉴定或分类等同源性相关情况[5-6]。本组32株鲍曼氏不动杆菌所得到的RAPD指纹图谱与聚类分析，可以将其为5个基因型，其中Ⅰ型16株，Ⅴ型9株，占本次研究标本的78.1%，说明这2型鲍曼氏不动杆菌是我院ICU病房的主要感染克隆传播株，应引起临床的高度重视，加强监控，防止爆发流行。

机械通气性肺炎是临床一个十分棘手的难题，鲍曼氏不动杆菌作为引起机械通气性肺炎的一种主要病原菌，其不仅耐药性高，还具有对多种抗生素耐药的特征，分子流行病学研究证实鲍曼氏不动杆菌在医院内均存在克隆传播,但主要是通过医院环境接触还是经人与人之间直接传播目前尚无定论[7-8]。因此，定期对重症监护病房机械通气性肺炎病原菌的监控与分子生物学分析，包括医院内环境、医护人员手等因素的流行病学调查，防止医院内大规模流行，值得进一步研究、探讨。

[1]熊怀民,吴承.重症监护病房下呼吸道获得性细菌感染的临床调查分析[J].中华医院感染学杂志,2005,15(3):269-271.

[2]林赛玲,肖艳辉,徐金花.ICU痰标本分离鲍曼氏不动杆菌的药敏分析[J].中国实用医药，2009,4(33):10-11.

[3]庞晓军,周宏伟,韦华.治疗临床多重耐药的鲍曼氏不动杆菌感染的临床探究[J].中国药学杂志,2009,44(5):397-398.

[4]李希涛,周秀丽,张静.临床感染鲍曼氏不动杆菌及多重耐药性分析[J].中国实验诊断学，2008,12(1):130-131.

[5]丁进亚,靳桂敏,曹军皓,等.老年病区铜绿假单胞菌遗传聚类分析[J].实用医学杂志,2006,22(2):216-217.

[6]叶明亮,吴海寰,侯晓琦,等.鲍曼氏不动杆菌随即扩增多态性DNA法基因分型[J].临床检验,2005,23(3):197-199.

[7]汪复.多重耐药铜绿假单胞菌与鲍曼氏不动杆菌严重感染的防治策略[J].中国感染与化疗杂志,2007,7(3):230-232.

[8]王鹏远,刘玉村,赵敏,等.外科监护室耐药鲍曼氏不动杆菌和肺炎克雷伯杆菌产超广谱β-内酰胺酶的基因研究[J].北京大学学报(医学版),2004,36(6):637-641.