FHIT在颊粘膜鳞癌组织中的表达及其临床意义

刘文书,徐雅娟

(1.吉林大学第一临床医院 口腔科,吉林 长春130021;2.吉林省肿瘤医院 口腔科)

颊粘膜癌是口腔颌面部恶性肿瘤之一,预后不佳。多数患者就诊时已开口受限或侵及范围广,饮食及睡眠均受影响,FHIT基因是就新发现的抑癌基因,大量的实验研究已经证实,它们的失活与人类多种肿瘤的发、发展及预后有关。FHIT基因在颊癌的发生、发展中起重要作用,对其蛋白的检测可作为判定颊癌发生及转移能力的一项客观指标,笔者应用免疫组织化学法进行检测,以探讨FHIT在颊鳞癌组织中的发生、发展、浸润及转移、预后中的重要作用。

1 资料与方法

1.1一般资料40例(男26例,女14例,年龄30-78岁)颊癌标本选自我院口腔颌面外科 2000至2008年经手术切除后病理证实的蜡块,术前均未行化疗、放疗,术后病理结果均证实为鳞状细胞癌。男性为26例,女性14例,年龄 30-78岁。其中 15例经术后病理证实有淋巴结转移。按组织学分类:高、中分化鳞状细胞癌24例,低分化鳞状细胞癌16例。临床分期Ⅰ期6例,Ⅱ期 11例,Ⅲ期 20例,Ⅳ期 3例。30例癌旁组织均取自相应颊癌癌旁组织0.5-1.0 cm处。10例正常颊粘膜组织取自良性肿瘤手术切除的颊粘膜组织。以上标本均经10%中性甲醛固定,石蜡包埋。

1.2免疫组织化学每例取原发癌组织、癌旁组织、切缘正常的粘膜组织及转移淋巴结,组织经固定、包埋,5 mm连续切片,分别进行HE染色和免疫组化SP法染色。兔抗人FHIT多克隆抗体(购自美国Santacruz公司)及SP试剂盒购自北京中山生物技术有限公司,免疫组化染色步骤按试剂盒说明进行。组织切片常规脱蜡、水化;3%H2O2去离子水孵育15 min以阻断内源性过氧化物酶,PBS缓冲液冲洗,将切片置于抗原修复液中,90℃-98℃水浴中10 min,室温中冷却20 min,滴加羊血清保护抗原,37℃、5%二氧化碳孵箱中15 min,滤纸吸干切片水分,滴加一抗置湿盒内4℃冰箱过夜,次日滴加生物素二抗、三抗,置湿盒内37℃、5%二氧化碳孵箱中60 min,每次PBS洗3次,每次5 min,应用DAB溶液显色;蒸馏水冲洗、复染、脱水、封片、镜检。同时用 PBS代替一抗作为染色的阴性对照,用已知的染色阳性切片作阳性对照。

1.3统计学处理采用SPSS10.0统计软件。计数资料的比较采用 χ2检验,检验水准α=0.052

2 结果

2.1FHIT在颊癌组织和癌旁组织、正常颊粘膜组织中的FHIT基因阳性表达率分别为45.0%、76.7%、90.0%,颊癌组织中FHIT的表达明显低于癌旁组织、正常颊粘膜组织中阳性表达,经统计学处理差异有显着性(P＜0.05),见表1。

表1 颊癌组织中FHIT的表达明显高于癌旁组织、正常颊粘膜组织中阳性表达不同类型的FHIT表达

2.2高、中分化组FHIT蛋白阳性表达率66.7%(16/24)明显高于低分化组31.25%(5/16)(P＜0.05);淋巴结转移组FHIT蛋白阳性表达率33.3%(5/15)显着低于无淋巴转移组60.0%(3/5)(P＜0.05),FHIT蛋白表达与颊癌临床病理参数的关系见表2。

表2 FHIT与40例颊癌临床病理特征的关系临床病理参数

3 讨论

3.1研究[1,2]表明FHIT基因过表达可以诱导肿瘤细胞凋亡,改变细胞周期,使得停滞在S期的细胞数量增多,细胞凋亡数量增多,从而使肿瘤的生长被抑制;FHIT基因容易在烟草及环境中其他化学致癌物作用下发生断裂、外显子缺失,导致FHIT蛋白表达缺失或减少。在和环境致癌因素关系密切的恶性肿瘤(肺癌、消化道肿瘤、头颈部肿瘤及乳腺癌等)中均存在FHIT基因异常转录和表达缺失。在肺癌形成过程中,FHIT可能是烟草某些成分(如尼古丁、亚硝基胺)作用的分子靶,在烟草及环境其他致癌物作用下发生断裂、外显子缺失,导致FHIT蛋白表达缺失或减少。

3.2许多研究发现口腔癌可能涉及一系列基因的改变,抑癌基因的失活是目前肿瘤研究的热点。在肿瘤组织中FHIT基因其表达的蛋白都有不同程度的减少甚至缺失,提示该基因是一个抑癌基因[3]。FHIT蛋白在颊癌组织中表达的降低,对正常组织细胞恶性转化的抑制能力降低,细胞发生癌变而导致肿瘤的发生,同时证明FHIT蛋白表达的减少在颊癌的发生机制中也起到了一定的作用,FHIT在人类许多肿瘤组织或细胞系中呈现高频率的异常[4],用活检结合免疫组化技术检测FHIT蛋白有助于颊癌的早期发现、早期诊断及早期治疗,生存率可得到更好的提高。

3.3由表2可见,FHIT蛋白表达与肿瘤组织分化程度密切相关,组织分化程度高、恶性程度低,其蛋白高表达;相反组织分化差,恶性程度高的癌组织,其蛋白不表达或表达弱。另外FHIT蛋白表达与淋巴结转移有关,淋巴结转移组FHIT蛋白不表达或表达弱,且FHIT蛋白阳性表达率显着低于无转移组[5],且FHIT低表达或者阴性表达的患者其存活时间明显短于FHIT高度表达的患者,也提示了FHIT与患者的预后相关[6]。由此可证明FHIT在肿瘤的发生、发展、浸润及肿瘤细胞的快速增殖、肿瘤细胞易发生转移转移过程中都起一定的作用[7]。FHIT蛋白表达下调的肿瘤细胞更具有恶性表型和恶性行为,且病程发展越到晚期,FHIT基因改变越显著。

3.4本组结果表明,FHIT在颊癌的发生、发展、浸润及转移及在诱导肿瘤分化过程中起重要作用。肿瘤组织血管形态及功能与正常组织间可能存在诸多差异,这就为传统细胞毒药物化疗构成了血流屏障,使得肿瘤细胞得以逃避[8]。总之,FHIT表达与颊癌的发生、发展有关,可有助于颊癌的早期诊断提供新的参考、也有助于预测颊癌的侵袭、转移及预后,便于颊癌的早期诊断、早期治疗。

[1]Arun B,Kilic G,YenC.Loss of FHIT expression in breastcancer is correlated with poorprognostic markers[J].CancerEpidemiol Biomarkers Prev,2005,14(7):1681.

[2]WANG Ping,ZHANG Qing,WANG Zuyi,et al.Expressionof FHIT and p16 in Non-small Cell Lung Cancers[J].Carcinogenesis,Teratogenesis and Mutagenesis,2007,19(3):242.

[3]尹晓敏,温春燕,韩玉玲,等.FHIT和MDM2在口腔黏膜下纤维性变及其癌变组织中的表达[J].中南大学学报(医学版),2010,35(6).

[4]Yuge T,Nibu K,Kondo K,et al.Loss of FHIT expression insquamous cell carcinoma and premalignant lesions of thelarynx[J].Ann Otol Rhinol Laryngol,2005,114(2):127.

[5]Lee JI,Soria JC,HassanK,et al.Lossof FHIT expressionis a predictorofpoor outcome in tongue cancer[J].CancerRes,2001,61(3):837.

[6]田中伟.皮肤鳞状细胞癌FHIT基因的异常改变及意义[J].肿瘤防治研究,2010,37(2).

[7]叶群立.胃癌组织中FHIT的表达及意义[J].医药论坛杂志,2010,31(14).

[8]殷德涛,卢秀波,董明敏,等.喉鳞癌组织中FHIT表达与细胞增殖、转移的关系[J].癌症,2004,23(11):1128.