2型糖尿病患者外周血内皮祖细胞与CD62P改变的临床意义

毛文文 田伟盟 陈国强 周 宁

1 昆明市第二人民医院老年科（650204）

2 昆明市延安医院内分泌科（650051）

陕西省第四人民医院呼吸内科（710043）

内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs）亦称内皮前体细胞，是指能分化增殖为成熟内皮细胞的一群祖细胞。目前，EPCs 介导的血管再生及损伤血管修复已经成为糖尿病、心血管疾病、肿瘤等疾病中的研究热点。2型糖尿病中微血管损伤及血小板活化机制的揭示正受到许多学者的关注。本研究观察2型糖尿病患者EPCs与CD62P改变，探讨其在糖尿病发生、发展中的作用。

1 材料与方法

1.1 标本来源

检测用的外周血标本采自30例糖尿病患者（DM）及10例糖耐量正常的健康对照者。30例糖尿病患者包括测定10例血糖控制良好（HbA1c＜7%）T2DM患者（A组）、10例血糖控制中等（HbA1c7%～11%）T2DM患者（B组）、10例血糖控制较差（HbA1c＞11%）T2DM患者（C组）。

1.2 EPCs的检测

1.2.1 细胞表面标志

采用CD45-Cy5，CD133-RPE等标记。内皮祖细胞（EPCs）：CD133+/CD45。

1.2.2 检测方法

采用荧光抗体标记，流式细胞仪检测。抽取外周血3mL抗凝，血标本用PBS液2倍稀释，Ficoll分离，1800r/min离心20min，PBS洗2次。将细胞加入96 孔板中，每孔5×105个细胞，加入抗体5µL，4℃孵育30～60min，用PBS液洗涤标本2次，100µL的1 %多聚甲醛固定，流式细胞仪检测。

1.3 CD62P的检测

试验组及对照组测定血小板及其参数均使用EDTA-K2抗凝管抽静脉血2mL送检，采血后均在2h内进行测定。使用仪器为日本Sysmex公司生产的XE22100型血细胞分析仪，所用检测试剂均为原装配套试剂。血液分析所用的EDTA-K2抗凝试管为美国BD公司提供的真空采血管，血小板CD62P测定采用美国BD公司FACS Calibur型流式细胞仪及配套试剂并严格按仪器要求操作。

1.4 统计学分析

所有资料使用SPSS10.0统计软件包进行处理，数据以均数±标准差表示，数据比较应用两组均数t检验，P＜0.05为差别具有统计学意义，以Spearman相关系数评价变量间相关性。

2 结 果

2.1 DM与对照组患者外周血EPCs、CD62P水平值变化

EPCs在初诊T2DM组显著低于健康对照组；血小板CD62P表达阳性程度在2型糖尿病患者中显著高于对照组（P＜0.01） ，见表1。

表1 糖尿病组患者外周血中EPCs 、CD62P水平变化（%）

2.2 不同病变程度DM患者外周血EPCs 、CD62P水平值变化

C组EPCs水平明显低于B组及A组，C组与B组有差异（P＜0.05）；C组与A组有差异（P＜0.01）；B组低于A组，但无统计学意义（P＞0.05）；C 组CD62P的水平显著高于B组及A组（P＜0.05，P＜0.01），B组与A组相比，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 不同病变程度DM患者（按糖化血红蛋白分组）外周血CD62P、EPCs水平变化（%）

2.3 T2DM患者外周血中CD62P、 EPCs相关性分析

相关性显示，EPCs与CD62P（r= -0.564，P＜0.01）呈负相关；EPCs与FPG（r= -0.341，P＜0.05）呈负相关；CD62P与FPG（r= 0.443，P＜0.01）呈正相关。鉴于资料有限未行多因素分析。

3 讨 论

糖尿病为一种慢性代谢性疾病，除葡萄糖、蛋白质及脂质代谢紊乱外尚有凝血纤溶系统功能的紊乱，可导致各种并发症尤其是血管并发症的出现[1-10]。有报道认为患者的高凝血活性与并发症的发生、发展相关，其凝血活性与患者病情的控制情况的好坏相关[8]。

CD62P又称血小板α颗粒膜蛋白140（granule membrane protein-140，GMP-140），是血小板内α颗粒的成分，当血小板被激活后可表达于血小板表面，是血小板活化的分子标志物。2型糖尿病患者由于在疾病过程中存在血管内皮细胞受损、脂质过氧化等原因可导致血小板激活，患者的高血糖状态本身也可导致血小板活化，血小板被激活后其凝血活性增高，表现在聚集功能增强、细胞表面α-颗粒膜蛋白表达量增多等[1-6]。目前有关内皮祖细胞与血小板活化因素研究较少[8-10]。

本研究中探讨内皮祖细胞及CD62P的变化，发现糖尿病患者内皮祖细胞数目减少而血小板CD62P的阳性表达程度增高，二者间存在一定的相关性。内皮祖细胞数目减少说明2型糖尿病患者体内存在血管损伤[9]。CD62P阳性表达程度增高可反映2型糖尿病患者体内存在着血小板的活化及消耗的情况，说明2型糖尿病患者处于高凝状态[7-10]。血管内皮损伤和血小板激活在糖尿病患者的病情发展、并发症的发生方面起一定的作用，对糖尿病患者进行抗血小板功能药物的治疗可能有助于糖尿病病情的控制并可预防其血栓性并发症的发生。但具体机制仍需进一步探讨。

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