滤袋法快速测定饲料中粗脂肪和总脂肪

张丽英 隋连敏 杨文军

脂肪含量高低是衡量饲料质量和营养价值高低的重要指标之一，因此脂肪测定早已成为饲料常规分析项目。目前饲料中脂肪测定多依据《饲料中粗脂肪的测定》GB/T6433—2006，该标准等同采用了国际标准ISO 6492：1999《动物饲料中粗脂肪含量的测定》，并且与1994版的主要差异是增加了水解方法。多数植物性饲料中的油脂非常容易用石油醚等直接提取出来，但对于动物性饲料和经过膨化、制粒等热处理的饲料，有一部分脂肪呈结合态，因此要想获得准确的总脂肪含量，需要先进行酸水解预处理，然后再进行提取。对于这些样品，如果不经过水解，脂肪测定结果会大大低于实际含量。

由于现行国家标准GB/T6433—2006中增加了水解方法，如何准确有效操作成了大家所关心的问题。如果按照标准中所描述的步骤，非常繁琐且不容易准确掌握、操作，难以确保数据的准确性和重复性。目前不仅企业的化验员，即使是检测机构的专职检测人员也觉得不好把握。如何根据现行标准的原理，寻找一种简捷而可靠的测定方法是从事饲料分析人员在实际工作中迫切需要的。本文着重介绍一种目前在欧美广泛使用的滤袋法，来快速测定饲料中粗脂肪和总脂肪，并对测定结果与传统方法进行比较评价。

1 滤袋法测定饲料中的粗脂肪

1.1 适用范围

该方法适用于GB/T6433—2006《饲料中粗脂肪的测定》中定义的A类样品，即除B类样品以外的所有动物饲料。B类样品主要包括：纯动物性饲料，包括乳制品；脂肪不经水解不能提取的纯植物性饲料，如谷蛋白、酵母、大豆及马铃薯蛋白以及热处理的饲料（如制粒、膨化等）；含有一定数量加工产品的配合饲料、浓缩饲料，其20%脂肪来自加工产品。

1.2 方法提要

将试样在103℃条件下烘干，然后用石油醚等在一定温度条件下进行提取，提取前后试样质量减少部分占试样质量百分比即为试样中粗脂肪含量。

1.3 仪器设备

分析天平：精度0.1 mg。干燥箱：温度控制（103±2）℃。脂肪提取仪：ANKOM XT15，工作温度（90±2）℃。滤袋：ANKOM XT14，孔径 1 μm。封口机、干燥器，记号笔：耐酸和其他溶剂。

1.4 测定步骤

①将标记好的滤袋放在天平上，并回零；②称取0.75～1.0 g试样置于滤袋中，记录质量（m1）；③用封口机在离滤袋上沿约4 mm处完全热封，冷却2 s；④将滤袋置于103℃条件下干燥3 h，干燥结束，快速从干燥箱中取出来放入干燥器中，冷却至室温并记录质量（m2）；⑤将滤袋摆放在脂肪分析仪的样品架上，每批可以放15个（包括空白滤袋），然后将其放入脂肪分析仪的缸体内。按照脂肪分析仪屏幕指示操作，设定时间60 min，温度90℃；⑥测定结束，取出带滤袋的样品支架，并将滤袋置于103℃干燥箱中干燥1 h；⑦将滤袋放入干燥器中冷却至室温,并称重（m3）。

1.5 结果计算

试样中粗脂肪含量按照公式（1）计算。

式中：m1——试样质量，g；

m2——浸提前烘干后试样+滤袋质量，g；

C1——浸提前空白袋干燥后质量，g；

C2——脂肪提取后空白袋干燥后质量，g；

m3——浸提后样品+滤袋烘干后质量，g。

2 滤袋法饲料中总脂肪的测定

2.1 适用范围

本方法适用现行GB/T6433—2006《饲料中粗脂肪测定》中所规定的B类样品（见本文1.1部分）。

2.2 方法提要

首先将试样用盐酸溶液水解，释放结合态油脂，然后用石油醚等溶剂在一定温度条件下进行提取。提取前后试样质量减少部分占试样质量百分比即为试样中总脂肪含量。

2.3 仪器设备

盐酸水解系统：ANKOM HCI,温度控制（90±2）℃。

硅藻土：用6 mol/l盐酸溶液消煮30 min，然后用水冲洗至中性，并在130℃烘箱中干燥，备用。

其他同粗脂肪测定。

2.4 试剂与溶液

石油醚：沸点40～60℃。盐酸溶液：3 mol/l。

2.5 测定步骤

①将标记好的滤袋放在天平上，并回零；②当试样中脂肪含量超过20%，需要在滤袋中先称取0.5～1 g硅藻土，并回零；③称取0.75～1.0 g试样置滤袋中，记录质量（m1），每个袋中的硅藻土和试样干燥后的质量不能超过1.5 g；④用封口机在离滤袋上沿4 mm处完全热封，冷却2 s，然后摇动滤袋，使试样和硅藻土混合均匀；⑤将试样放入盐酸水解系统的样品架上，每批可以放15个（包括空白滤袋），然后将其放入水解系统的缸体内，加3 mol/l盐酸溶液500 ml，并按照仪器屏幕指示操作，设定时间60 min，水解温度90℃，水淋洗20 min；⑥当水解结束，将滤袋连同支架一起从水解系统中取出来，铺平滤袋，在两层吸水纸之间轻轻挤压，以除掉滤袋中残存的水；⑦将滤袋置于103℃条件下干燥箱中干燥3 h，干燥结束，快速从干燥箱中取出来放入干燥器中，冷却至室温并记录质量（m2）；⑧将滤袋摆放在脂肪分析仪的样品架上，每批可以放15个（包括空白滤袋），然后将其放入脂肪分析仪的缸体内，按照脂肪分析仪屏幕指示操作，设定时间60 min，温度90℃；⑨测定结束，将滤袋取出来，置于103℃干燥箱中干燥1 h；⑩干燥结束，将滤袋放在干燥器中冷却至室温，并称重（m3）。

2.6 结果计算

试样中总脂肪含量按照公式（2）计算。

式中：m1——试样质量，g；

m2——水解后试样+滤袋+硅藻土烘干后质量，g；

C1——水解后空白袋干燥后质量，g；

C2——脂肪提取后空白袋烘干后质量，g；

m3——浸提后样品+滤袋烘干后质量，g。

3 结果比较与评价

3.1 与传统方法比较

滤袋法与传统方法饲料中脂肪测定结果比较见表1。由表1可以看出，所比较的10种饲料原料或产品，其脂肪含量覆盖范围比较宽，最低不到0.5%，最高则超过40%，但无论脂肪含量高与低，滤袋法与传统方法测定结果相同或非常接近。

表1 滤袋法与传统方法饲料中脂肪结果比较（%）

3.2 联合实验结果

滤袋法已经获得美国油脂协会（AOCS）的批准（AOCS Approved Procedure Am 5-04）。表2为AOCS组织的联合实验结果。由表2可以看出，选用了7种典型饲料原料和产品作为比对样品，参加实验室数量为10～12个。采用滤袋法全体实验室结果平均值与有资质实验室采用AOCS Official Methods Ba 3-38,AOAC 920.39或其他公认方法测定结果平均值相同或非常接近，并且有比较好的重复性和再现性。

若干篇，刊略，需者可函索）