乙肝血清学标志物与HBV-DNA含量关系的分析

郭 卉，董瑶佳，刘晓峰，陈雪礼

(1、九江市第一人民医院检验科，江西 九江332000；2、九江市妇幼保健医院，江西 九江 332000)

乙型肝炎是一种严重危害人类健康的传染病，由乙型肝炎病毒感染引起。我国是乙型肝炎病毒感染高发地区，乙肝病毒携带者数量众多。本研究旨在探讨乙肝血清学标志物与HBV-DNA含量之间的关系，了解本地区乙肝感染情况，为乙肝病情的临床判别和疗效评估提供理论参考。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选择2009年1月至2009年12月在江西省九江市第一人民医院门诊及住院的患者，要求于一周内进行乙肝五项(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)及 HBVDNA检验，共选取1020例，年龄8～85岁，其中男652例，女368例。

1.2 观察指标 乙肝五项：HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HbcAb；HBV-DNA 含量。

1.3 检测仪器 科华ST-360酶标仪(上海科华试验科技有限公司)；DNX-9620洗板机(北京普朗新技术有限公司)；DA-7600 PCR扩增荧光定量检测仪(中山大学达安基因股份有限公司)。

1.4 检测试剂 乙肝标志物检测试剂由北京万泰生物有限公司提供；HBV-DNA检测试剂由广州中山大学达安基因股份有限公司提供。

1.5 检测方法

1.5.1 乙肝五项检测(ELISA法)

1.5.2 HBV-DNA含量检测(荧光定量PCR法)。DNA提取：吸取血清40μl至5ml离心管中，再加入40μl DNA提取液，充分混匀，沸水浴10min(误差不超过1min)，转至4℃静置6～8h，10000r/min离心5min；取上清液 5μl进行 PCR反应。 扩增：将点好样的PCR管置于PCR仪，93℃2min预变性，然后按 93℃ 45s→55℃60s，反应 10个循环，再按 93℃30s→55℃45s反应30个循环。每批PCR试验均做阴、阳性对照、临界阳性。检测灵敏度为≥0～500IU/ml，参考范围0～500IU/mL。

1.6 统计学方法 所有数据采用SPSS 13.0统计软件进行分析，多组数据之间的比较采用K-W检验，两组数据之间采用SNK检验，HBeAg阳性和HBV-DNA阳性的相关性采用Spearman等级相关。

2 结果

2.1 乙肝血清学标志物与HBV-DNA的关系

将乙肝五项检测结果分为六组。A：全阴；B：HBsAb(+)；C：HBsAg+HBeAg(+)；D：HBsAg+HBeAg+HBcAb(+)；E：HBsAg+HBeAb+HBcAb(+)；F：HBsAg+HBcAb(+)。

从表1中可以看出HBsAg+HBeAg(+)组和HBsAg+HBeAg+HBcAb(+)组的HBV-DNA阳性检出率和HBV-DNA平均含量均明显高于其他各组。经K-W检验对各组HBVDNA含量进行比较，得出HBsAg+HBeAg(+)组和HBsAg+HBeAg+HBcAb(+)组与其他各组相比差异具有统计学意义(P=0.001)。

表1 乙肝血清学标志物和HBV-DNA的关系

2.2 HBeAg阳性与HBV-DNA阳性的关系

采用Spearman等级相关计算HbeAg(+)与HBV-DNA检测率的相关性， 相关系数 γ 为 0.805，P＜0.05，Kappa值为0.408。说明HbeAg(+)和HBV-DNA(+)的相关性较强。

3 讨论

从本次调查分析结果可以看出，HBsAg+HBeAg(+)和HBsAg+HBeAg+HBcAb(+)两组的HBV-DNA阳性率明显高于其他各组，HBV-DNA平均含量也高于其他各组，并且这两组的HBV-DNA含量与其他各组之间的差异具有统计学意义(P＜0.001)，这说明 HBsAg+HBeAg(+)与 HBsAg+HBeAg+HB-cAb(+)患者HBV-DNA具有较高的复制水平，是具有传染性的重要标志。同时，通过分析HBeAg阳性和HBV-DNA阳性相关性，可以得出这两者有着很好的一致性(P＜0.001)。在本次分析过程中发现有4例HBV-DNA检测结果为阴性但HBeAg检测为阳性，这可能是由于患者体内的HBV-DNA含量已经很低，而之前表达的HBeAg尚未被完全降解，仍处于较高的水平；也有可能与HBeAg检测的试剂质量相关。

表2 HBeAg和HBV-DNA检测阳性检出率比较

HBsAg+HBeAb+HBcAb(+)组和 HBsAg+HBcAb(+)组的HBV-DNA阳性检出率分别为43.38﹪和59.62﹪，HBV-DNA的平均含量分别为5.75E+05和1.96E+06，这说明当患者HBsAg和HBcAb为阳性、HBeAg为阴性时，无论HBeAb是否为阳性仍有HBV-DNA阳性检出，说明仍有HBV存在或复制，因此HBeAg阴性并不能代表病毒停止复制或病情好转，可能是此种情况下病毒复制水平较低。

在乙肝五项全阴组中，有7例HBV-DNA阳性，阳性检出率为11.67﹪，出现这种情况可能的原因是：⑴HBV发生前C区基因突变或机体发生特异性免疫耐受[3]；⑵ELISA法敏感性较低，在患者感染初期HBV-DNA含量较低，而FQ-PCR法检测的灵敏度较高，因而应用ELISA法无法测出；⑶HB-sAg已清除，但HBV-DNA仍持续存在[4]。

在单独HBsAb阳性组中有4例HBV-DNA阳性检出，阳性率为7.25%，分析其原因可能为：⑴可能存在其他HBV变异型感染[5]；⑵长期多次反复小剂量接触HBV未见或少见发病，而出现HBsAb阳性，但体内仍可存在低拷贝的HBV颗粒。⑶与全阴组的情况相同，HBsAg已清除，但HBV-DNA仍持续存在。

从本文的分析可以看出，乙肝五项各模式分组中HB-sAg＋HBeAg(阳性)与 HBsAg＋HBeAg＋HBcAb(阳性)组患者的HBV-DNA检出率及HBV-DNA平均含量最高；HBeAg阳性和HBV-DNA阳性有较高的相关性。因此综合分析乙肝血清学标志物与HBV-DNA含量之间的关系有助于临床上更好地了解患者的病情及判断治疗效果。

[1]彭文伟.传染病学[M].第6版,北京:人民卫生出版社,2005:21-50.

[2]孙 华,张 剑,曹美芳.HBV-DNA荧光定量检测的临床意义[J].中国民康医学,2006,18(12):1006-1007,1009.

[3]朱传武.HBV前C/C基因变异与宿主T细胞免疫的关系[J].国外医学免疫学分册,2001,24(6):289-290.

[4]汤立新.血清HBVDNA荧光定量PCR检测与乙肝病毒标志物模式的相关性[J].职业卫生与病伤,2007,22(2):141-142.

[5]阎 震,张 军,韩晓静.荧光定量检测HBVDNA与ELISA检测乙肝标志物模式的比较分析[J].中国医药导报,2007,4(24):110-111.