反相高效液相色谱法同时测定刺五加脑灵液中绿原酸和异秦皮啶含量

高云峰

(哈药集团中药二厂，黑龙江 哈尔滨 150078)

刺五加为五加科植物刺五加 Acanthopanax senticosus(Rupr.et Maxim.)Harms干燥根及根茎。刺五加脑灵液由刺五加浸膏和辅料制成，具有健脾补肾、宁心安神的功效[1]，主治心脾两虚、脾肾不足所致心神不宁、失眠多梦、健忘、倦怠乏力、食欲不振，绿原酸和异嗪皮啶是其主要活性成分[2－3]。笔者根据文献[4－5]建立了可同时测定刺五加脑灵液中绿原酸和异嗪皮啶含量的反相高效液相色谱(RP－HPLC)法，为有效控制产品质量提供了理论依据。

1 仪器与试药

Waters高效液相色谱仪(Waters公司)，包括 1525型泵，717plus型自动进样器，2996型二极管阵列检测器;DGW－99型台式高速微型离心机(宁波新芝生物科技股份有限公司);PB220型精密pH计(上海雷磁仪器厂)。乙腈、甲醇、磷酸(色谱纯)，水(二次重蒸水)，其他试剂及药品(国产，分析纯);绿原酸对照品(批号为110753－200413)、异嗪皮啶对照品(批号为110837－200304)均由中国药品生物制品检定所提供;刺五加脑灵液(哈药集团中药二厂)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈 －0.1%磷酸水溶液(17∶83，V/V);流速:1 mL/min;检测波长:335 nm;柱温:室温;进样量:10 μL。在此条件下，色谱图见图1。

2.2 溶液制备

分别精密称取绿原酸和异嗪皮啶对照品10 mg，用甲醇溶解并分别定容于10 mL量瓶中，摇匀，得质量浓度为1 mg/mL的绿原酸和异嗪皮啶对照品溶液。精密吸取刺五加脑灵液1 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，用0.45 μm滤膜过滤，作为供试品溶液。取处方中不含刺五加的阴性样品，同法制备阴性对照品溶液。

图1 高效液相色谱图

2.3 方法学考察

线性关系考察:将对照品溶液稀释为不同质量浓度后进行检测。以对照品溶液质量浓度对峰面积进行线性回归，绘制标准曲线。回归方程绿原酸为 Y=2 177 858.625 0 X+29 485.100 0(r=0.999 6)，异嗪皮啶为 Y=2 963 456.375 0 X －61 824.300 0(r=0.999 5)。结果表明，绿原酸和异嗪皮啶的质量浓度线性范围均为0.01 ～ 1 mg/mL。

精密度试验:取对照品溶液，重复测定6次。结果绿原酸和异嗪皮啶峰面积的 RSD分别为0.54%和0.49%(n=6)，表明仪器精密度良好。

重现性试验:取同一批样品6份，依法制备供试品溶液并测定。结果绿原酸和异嗪皮啶峰面积的 RSD分别为 0.81%和0.92%(n=6)，表明方法重现性良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，室温下放置，于 2，4，6，8，10，12 h时分别进样记录峰面积。结果绿原酸和异嗪皮啶的 RSD分别为1.26%和0.88%(n=6)，表明供试品溶液在室温条件下12 h内稳定。

加样回收试验:取样品6份，分别加入不同量的绿原酸和异嗪皮啶对照品溶液，依法测定峰面积，计算回收率。结果见表2。

表2 绿原酸和异嗪皮啶加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

按2.1项下色谱条件测定了6批样品的绿原酸和异嗪皮啶含量。结果见表3，可见绿原酸和异嗪皮啶的平均含量分别为7.65 mg/mL 和 0.65 mg/mL。

3 讨论

绿原酸和异嗪皮啶是刺五加的主要活性成分，本试验采用RP－HPLC法同时测定刺五加脑灵液的绿原酸和异嗪皮啶含量。在200～400 nm波长范围内对绿原酸和异嗪皮啶对照品的甲醇溶液进行紫外－可见扫描，绿原酸和异嗪皮啶分别在344 nm和327 nm波长处有最大吸收，因此选335 nm波长为测定波长。采用文中的流动相系统，绿原酸和异嗪皮啶与其他峰能够达到基线分离，分离效果良好。

表3 刺五加脑灵液中的含量

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:1 441.

[2]肖培根.新编中药志(第一卷)[M].北京:化学工业出版社，2002:568－569.

[3]Grazyna Z，Slawomi RK.Application of conventional UV，photodiode array(PDA)and fluorescence(FL)detection to analysis of phenolic acids in plant material and pharmaceutical preparations[J].J Pharm Biomedical Analy，2001(24):1 065 － 1 072.

[4]金佩芬.高效液相色谱法测定刺五加注射液中异秦皮啶含量[J].中国药业，2009，18(3):9.

[5]刘艳新，麻风华，王 力.高效液相色谱法测定刺五加脑灵液中异秦皮啶含量[J].中国药业，2005，4(10):42.