梅毒抗体检测方法的对比分析

王焕成

（河南省南阳市第一人民医院输血科，河南南阳 473000）

目前对梅毒血清学检测方法较多，为了探讨甲苯胺红不加热血清试验(toluidine red unheated serum test，TRUST)、酶联免疫吸附法(treponemapallidum-ELISA，TP-ELISA)、明胶颗粒凝集法(tre-ponemapallidum particle agglutination test，TPPA)3种梅毒血清学检测方法的应用，我们对此进行了对比分析，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选自2009年2月～2010年2月我院住院和门诊诊断和治疗的梅毒患者129例，其中男性99例，女30例，年龄18～75岁，平均35.9岁。本组病例中早期潜伏期梅毒21例，一期梅毒39例，二期梅毒58例，不明期梅毒11例。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 对129例梅毒患者，采取肘部无菌静脉血5 ml，3 000 r/min离心5 min，提取血清。

1.2.2 仪器及试剂 XK95I型多用振荡器由江苏江堰市新康仪器厂生产。START IVD ELISA全自动酶免仪；LD5-2A离心机，北京医用离心机厂。TRUST试剂由上海荣盛生物公司提供，TP-ELISA检测试剂为上海科华公司产品，TPPA试剂由日本富士瑞必欧株式社提供。

1.3 实验方法与原理

所有检测操作程序和结果判断均严格按照试剂盒说明书进行，并在试剂盒有效期内使用。TRUST法：采用活化心磷脂卵磷脂胆固醇配制VDRL抗原重悬于甲苯胺红特制溶液中与梅毒患者血清中的反应素发生粉红色凝集。分别取50 μl的待测血清和TRUST试剂置于纸卡中，混匀8 min后肉眼观察凝集情况，使阳性结果出现红色絮状凝集现象。TPELISA法：包被精制基因工程表达的梅毒螺旋体特异性抗原，与梅毒血清抗体发生特异结合，产生显色反应。TPPA法：用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒与血清中的梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，明胶颗粒为玫瑰红色。

2 结果

129例梅毒患者进行3种方法的检测，TRUST法检测阳性92例，阳性率为71.37%；TP-ELISA法检测阳性112例，阳性率为86.82%；TPPA法检测阳性129例，阳性率为100%；3种方法检测阳性率经统计学分析比较，P＜0.05有显著性差异。同时对3种检测方法的敏感度、特异性进行比较，具体见表1。

经统计学分析，TP-ELISA、TPPA两种检测方法比较，P＞0.05无显著性差异；TRUST检测方法与TP-ELISA、TPPA两种检测方法比较，P＜0.05有显著性差异。

表1 3种检测方法的灵敏度、特异性比较（%）Tab.1 Comparision of sensitivity,specificity of 3 kinds of detection methods(%)

3 讨论

梅毒是由苍白螺旋体引起的一种经典的性传播慢性感染性疾病，它可以引起全身性的感染及病变。其传播方式有经性接触传播、血液传播和母婴垂直传播3种[1]。近年来梅毒的发病率呈明显上升趋势，2008年国家卫生部公布27种法定报告的甲、乙类传染病中，梅毒发病由原来的第7位上升至第5位。梅毒的诊断依赖病史、症状、体征，暗视野显微镜检查和血清学检查。梅毒感染者血清中可产生非特异性反应素抗体和梅毒螺旋体的特异性抗体，血清学检测是实验室诊断梅毒的重要依据之一，它在梅毒的诊断、治疗及研究方面均有重要意义。

TRUST是采用活化心磷脂卵磷脂胆固醇配制VDRL抗原重悬于含甲苯胺红特制溶液中与梅毒患者血清中的反应素发生粉红色凝集，因而检测出梅毒。TRUST由于其廉价、快速、方便以及其所用的抗原是从牛心提取的心磷脂和从鸡蛋黄提取的卵磷脂及胆固醇，其测定效价比RPR、USR高一个滴度等特点，所以广泛用于临床住院和门诊患者的梅毒筛查；其敏感性及特异性较差，对早期梅毒、晚期梅毒及治疗后梅毒检测的敏感性低以及对神经梅毒的不敏感性，常出现假阴性而漏检，其可作为梅毒疗效观察或随访有否复发或再感染的指标[2]。

TP-ELISA是随着近年梅毒螺旋体基因工程的研制成功而发展起来的一种血清学检测方法，是利用重组梅毒螺旋体的特异性抗原包被酶标板孔，并采用双抗原夹心法检测血清标本中的梅毒特异性IgM和IgG抗体，极大地提高了试验的敏感性和特异性[3]，对早期和晚期梅毒都有较高的检出率。用ELISA法检测的TP抗体稳定，即使经抗梅毒治疗后，抗体仍继续存在，甚至终生存在，用仪器判读试验结果[4]。本实验中TP-ELISA的敏感性、特异性均很好，与TPPA的符合率高，无显著性差异(P＞0.05)，该方法重复性好，结果稳定可靠。

梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验(TPPA)是使用螺旋体毒株制成抗原，是全螺旋体纯化抗原，在抗原组成上比较全面，不易产生假阳性，特异性较高，灵敏度高。梅毒螺旋体感染后，此抗体在体内持续存在，可终身保留，检测结果不随病情发展和治疗而变化，故TPPA作为梅毒的确诊试验，对各期梅毒的检测结果都有较好的稳定性，不易出现假阳性反应。是目前公认的较好的梅毒确认方法，具有很高的敏感性和特异性[5]，但是试剂较贵，以肉眼判断结果，不宜大批量检测，一般作为TRUST和TP-ELISA等初筛阳性以及潜伏期梅毒和一些非螺旋体试验阴性又高度怀疑为梅毒患者的确认试验，也可用于排除用非特异性抗体检测所致的假阳性[4]。

由结果可知，临床上进行大量人员的高危人群梅毒筛查时宜采用TP-ELISA检测方法，由于其敏感性和特异性较高而且检测方法简便，假阳性率和假阴性率较低等特点易采用TP-ELISA检测方法[6]。对TRUST和TP-ELISA等初筛阳性以及潜伏期梅毒和一些非螺旋体试验阴性又高度怀疑为梅毒患者的确认试验采用TRUST检测方法[5]。在临床应用过程中积极掌握梅毒血清学检测方法的特点对梅毒的诊治可提供重要的参考依据，减少假阳性率和减少假阴性率，为梅毒及早发现、及早诊断提供明确诊断的依据。

[1]孙芸,黎保仝.11799例普通住院患者梅毒血清学试验结果分析[J].临床检验杂志,2005,23(3):171.

[2]程艳杰,王广杰,刘明,等.梅毒螺旋体特异性抗体检测方法的实验室评价[J].中华检验医学杂志,2006,29(3):272.

[3]邓晓琴,杨茂,向艳玲,等.ELISA法梅毒检测的钩状效应及其分析[J].中国输血杂志,2006,19(3):220.

[4]邹黎.梅毒血清学试验几种检测方法比较[J].实用医技杂志,2006,13(21):3788.

[5]李群,王福华.三种梅毒检测方法的比较[J].中华医学实践杂志,2006,5(3):78.

[6]韩国柱,邵长庚.我国梅毒瘤型和临床特点[J].中华皮肤科杂志,2005,38(5):322.