视明合剂的制备及薄层色谱鉴别

王林丽，张 瑶，龙世林，姚云杉

（1.第三军医大学大坪医院药剂科，重庆 400038； 2.第三军医大学学员旅20队，重庆 400038）

视明合剂由柴胡、黄芩、女贞子、旱莲草、桑叶等中药制成，具有平肝宁络、通脉散瘀的功效，临床用于治疗眼底血管淤阻及眼底出血、渗血等症[1]。笔者对其制备工艺及方中黄芩等药材的薄层色谱鉴别进行了研究，报道如下。

1 仪器与试药

硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂分厂）；KQ-500E型医用超声波仪（昆山市超声仪器有限公司）；Sartorius电子天平（赛多利斯＜北京＞科学仪器有限公司）；玻璃点样毛细管（华西医科大学仪器厂）；CS-15R型低温离心机（美国Beckman公司）。黄芩苷对照品（批号为 110715-200212）、芍药苷对照品（批号为110736-200629）、三七皂苷 R1对照品（批号为110745-200415）、人参皂苷Rb1对照品（批号为 0704-9912）、人参皂苷 Rg1对照品（批号为0703-9611）、欧前胡素对照品（批号为110826-200712）均由中国药品生物制品检定所提供；视明合剂（自制，批号为090218）；水为蒸馏水，所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 样品制备

处方：柴胡 20 g，黄芩 10 g，女贞子 12 g，旱莲草 10 g，桑叶 5 g，夏枯草 20 g，桃仁 5 g，红花 3 g，白芍 12 g，三七 5 g，白芷 12 g，生甘草2 g，加水制成1 000 mL。

制备：以上12味药材中，柴胡用水蒸气蒸馏法提取芳香水；白芷、黄芩、白芍、三七用65%乙醇回流提取2次，每次1 h，合并乙醇液，滤过，减压回收乙醇，得药液；桃仁用沸水提取；将以上药渣与其余6味中药合并，加水煎煮3次，每次1 h，合并煎液，滤过。滤液浓缩至适量，加入上述芳香水和药液，混匀，加蒸馏水至规定量，搅匀，滤过，灌封，灭菌，即得。

2.2 质量控制

2.2.1 性状

本品为棕色液体，久置有少量沉淀。

2.2.2 薄层色谱鉴别

黄芩：取本品20 mL，加乙醚30 mL，超声处理10 min，滤过；取下层液挥去乙醚，加甲醇30 mL，超声30 min，滤过，取上层液蒸干，残渣加水15 mL使溶解；用HCl调pH至1～2，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20 mL，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇2 mL溶解，离心取上清液，即得供试品溶液。精密称取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1 mL含2 mg黄芩苷的溶液，作为对照品溶液。按处方比例取除黄芩外的其余药材一定量，照视明合剂制备方法制成一定体积的溶液，取该溶液20 mL，按供试品溶液制备方法制成2 mL缺黄芩的阴性对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中国药典（一部）》附录ⅥB]试验，吸取上述溶液各2～5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇溶液。结果供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，而阴性对照品溶液色谱中无此斑点（图1 A）。

白芷：取本品30 mL，分别用50，20，20 mL的乙醚提取3次，合并乙醚液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1 mL溶解，离心取上清液，即得供试品溶液。称取2 g白芷对照药材，加入95%的乙醇20 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，加入95%的乙醇1 mL溶解，作为对照药材溶液。精密称取欧前胡素对照品1 mg，加甲醇制成每1 mL含欧前胡素1 mg的溶液，作为对照品溶液。按处方比例取除白芷外的其余药材一定量，照视明合剂制备方法制成一定体积的溶液，取该溶液30 mL，按供试品溶液制备方法制成2 mL缺白芷的阴性对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中国药典（一部）》附录ⅥB]试验，吸取上述溶液各2～5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇（9∶1）为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸中，展开，取出，晾干，置紫外灯下检视。结果供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，而阴性对照品溶液色谱中无此斑点（图1 B）。

白芍：取本品10 mL及95%的乙醇40 mL于锥形瓶中，超声20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 mL使溶解，用乙醚提取2次，每次20 mL，分取水层，加水饱和的正丁醇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加乙醇1 mL溶解，离心取上清液，即得供试品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg芍药苷的溶液，作为对照品溶液。按处方比例取除白芍外的其余药材一定量，照视明合剂制备方法制成一定体积的溶液，取该溶液10 mL，按供试品溶液制备方法制成1 mL缺白芍的阴性对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中国药典（一部）》附录ⅥB]试验，吸取上述溶液各2～5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯 -甲醇 -浓氨试液（8∶1∶4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，置105℃烘箱中加热至斑点显色清晰。结果供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，而阴性对照品溶液色谱中无此斑点（图1 C）。

三七：取本品20 mL，加乙醚提取2次，每次20 mL，弃去乙醚层，药液层用水饱和的正丁醇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加1 mL甲醇溶解，离心取上清液，即得供试品溶液。取三七对照药材30 g，用65%的乙醇回流提取30 min，挥去乙醇，灭菌后按供试品溶液制备方法制得对照药材溶液。取三七皂苷R1、人参皂苷Rb1，人参皂苷Rg1各1 mg，加甲醇分别制成质量浓度为1 g/L的三七皂苷R1对照品溶液、人参皂苷Rb1对照品溶液和人参皂苷Rg1对照品溶液。按处方比例取除三七外的其余药材一定量，照视明合剂制备方法制成一定体积的溶液，取该溶液20 mL，按供试品溶液制备方法制成1 mL缺三七的阴性对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中国药典（一部）》版附录ⅥB]试验，吸取上述溶液各2～5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿 -甲醇 -水（13∶7∶2）于10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置105℃烘箱中加热至斑点显色清晰。结果供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，而阴性对照品溶液色谱中无此斑点（图 2）。

3 讨论

柴胡含有挥发性成分，故用水蒸气蒸馏法制备芳香水；三七、黄芩、白芍主要含皂苷类成分，分别用65%的乙醇为溶剂提取；桃仁主要含有苦杏仁苷，通过高温处理可使苦杏仁苷酶灭活，因此在提取开始时即加入沸水，以利于苦杏仁苷成分的保留。本研究结果表明，薄层色谱法鉴别视明合剂中的黄芩、白芷、白芍、三七，专属性强，灵敏度高，重现性好，检出斑点清楚，为视明合剂的质量控制提供了可靠的实验室依据。

[1]王林丽，孟德胜，陈 芸.视明口服液的制备及薄层色谱鉴别[J].中国药业，2005，14（11）:47-48.