金莲花醇提物体外抗甲型流感病毒作用研究

2010-06-01赵宏伟赵玉珍

中国药业 2010年1期

赵宏伟，赵玉珍

（1.陕西中医学院药学院，陕西咸阳 712046； 2.陕西省食品药品检验所，陕西西安 710061）

金莲花对革兰阳性球菌及阴性杆菌都有抑制作用，对绿脓杆菌的抗菌作用尤为明显，临床用于治疗扁桃体炎、咽炎，对泌尿系感染等亦有一定疗效。金莲花是难得的纯天然植物抑菌良药，抗菌谱广，无耐药性，高效安全，尤其适合于儿童用药[1]。本试验采用鸡胚培养流感病毒，并用鸡红血球凝集试验检测药物对病毒在鸡胚尿囊液中增殖的抑制作用[2-4]，研究了金莲花醇提物抗甲型流感病毒作用，报道如下。

1 材料

试验药物：受试药物金莲花醇提物（含生药0.4 g/mL）。阳性对照药物双黄连注射醇提物（哈尔滨药业集团中药二厂，600 mg/瓶，批号为02111220），棕色冻干粉剂，试验用药质量浓度为100 g/L；阳性对照药物病毒唑（华北秦皇岛制药有限公司），试验用药质量浓度为0.25 g/L。

病毒：流感病毒甲型PR8株购自中国预防医学科学院病毒所，由本实验室传代保存，病毒血凝滴度为1∶640，试验中使用流感病毒（PR8株）的浓度为80个血凝单位。

鸡胚：取9～10日龄鸡胚的胚蛋（西安华秦肉鸡公司），检查鸡胚生长良好。

鸡红细胞：采取健康的公鸡血，以生理盐水洗涤3次，配成0.5%鸡红细胞悬液，用于检测流感病毒滴度的血凝试验。

2 方法与结果

2.1 鸡胚生长发育影响试验

常规选择生长良好的鸡胚，将金莲花醇提物原液（含生药400 g/L）进行 2倍连续稀释到 1∶64（400～12.5 g/L），将不同质量浓度的药液分别接种到9日龄生长良好的鸡胚尿囊腔中，每胚0.2 mL，每一稀释度9个鸡胚，36.5℃孵育，逐日观察，以鸡胚生长发育良好、72 h鸡胚仍然存活的质量浓度为最大无毒浓度。逐日观察鸡胚接种后的活动、发育情况和鸡胚体有无充血，判断药物对鸡胚的毒性作用。同时设生理盐水对照、正常鸡胚对照。在接种金莲花醇提物药液后，24 h内鸡胚死亡为非特异性死亡。结果72 h后鸡胚发育正常，胚体无明显出血；除接种药物原液（含生药400 g/L时鸡胚发育较小外，接种试验药物原液和药物的各个稀释质量浓度时鸡胚均未见死亡，也未见明显毒性作用。结果表明金莲花醇提物药液对鸡胚的最大无毒浓度为200 g/L。

2.2 鸡胚流感病毒增殖抑制作用试验

试验采用流感病毒甲型PR8株（80个血凝单位），药物浓质量度为200～12.5 g/L（2倍连续稀释）。分为两个试验组，A组采用病毒与药物等量混合，室温下直接作用2小时后，再共同接种鸡胚；B组采用病毒和药物分别接种，先接种病毒4 h后，再接种不同质量浓度的药物。每个鸡胚的尿囊腔中接种0.2 mL病毒液，每一浓度接种9个鸡胚。同时设病毒对照、阳性药物对照和正常对照组。在35℃孵育72 h，收获鸡胚的尿囊液，测定病毒的血凝滴度，以“++”的血凝状态为血凝效价的终点，并计算其几何平均滴度（GMT），同时观察鸡胚发育情况。试验重复2次，对结果进行统计学分析。结果接种受试药物72 h后，病毒对照组胚体发育偏小、有片状出血；阳性药物对照组与正常对照组的鸡胚大小基本一致，无明显充血。试验结果见表1。可见A组中，将病毒与受试药物等量混合作用2 h后再感染鸡胚，金莲花醇提物质量浓度为25～200 g/L时对流感病毒甲型PR8株有直接杀灭作用（P＜0.05）；B组中，先接种病毒后加药物，金莲花醇提物质量浓度为25～400 g/L时对流感病毒甲型PR8株在鸡胚内的增殖有抑制作用（P ＜ 0.05）。