反相离子对高效液相色谱法同时测定非索伪麻缓释片中两组分含量

李 颖

（安徽省中医院，安徽 合肥 230031）

非索伪麻缓释片是盐酸非索非那定与盐酸伪麻黄碱的复方制剂。盐酸非索非那定是组胺H1受体拮抗剂，属无镇静作用的抗组胺药物，用于季节性过敏性鼻炎及慢性特发性荨麻疹，具有很好的临床治疗效果[1-2]。盐酸伪麻黄碱具有选择性收缩血管作用，可收缩鼻腔、鼻窦及上呼吸道黏膜血管，消除组织水肿和充血，使呼吸道畅通。二者合用，可有效治疗慢性特发性荨麻疹和季节性过敏性鼻炎。两者的复方缓释制剂国外已上市，笔者参考了相关文献[3]，建立了反相离子对高效液相色谱法，用于同时测定盐酸非索非那定和盐酸伪麻黄碱含量，现报道如下。

1 仪器与试药

Shimadzu LC-10AT高效液相色谱仪（日本岛津），Shimadzu SPD-10AVP检测器（日本岛津）。非索伪麻缓释片（研制时自制）；非索非那定对照品（批号为100852-200601）、盐酸伪麻黄碱对照品（批号为171237-200304）均由中国药品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Shim-pack VP-ODS 柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾-十二烷基硫酸钠（70∶30∶0.03，用磷酸调 pH 至 3.0）；检测波长：210 nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量：20 μL；灵敏度：0.100 0 AUFS。在此色谱条件下，各组分的分离效果良好，分离度大于10.0，理论塔板数以盐酸伪麻黄碱计不低于3 000，色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

精密称取盐酸非索非那定对照品30.0 mg，盐酸伪麻黄碱对照品60.0 mg，置50 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密称取样品细粉适量（约相当于盐酸伪麻黄碱120 mg、盐酸非索非那定60 mg），置乳钵中，加流动相适量，研磨，并用流动相分次转移至100 mL量瓶中，超声处理使盐酸伪麻黄碱与盐酸非索非那定溶解，放冷至室温，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL，置25 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为供试品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察：分别精密量取对照品贮备液0.1，0.2，0.5，1.0，2.0 mL置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得系列质量浓度的对照品溶液，精密量取20 μL，进样测定。以质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得非索非那定的回归方程Y=55 942.78 X+86 409.14，r=0.999 9（ n=5）；盐酸伪麻黄碱的线性方程 Y=34 848.78 X+187 045.70，r=0.999 9（n=5）。结果表明，盐酸非索非那定和盐酸伪麻黄碱质量浓度分别在6.01～120.20 mg/L和12.08～241.68 mg/L内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验：取对照品溶液，重复进样6次，记录峰面积。结果盐酸非索非那定和盐酸伪麻黄碱峰面积的 RSD分别为0.76%和0.52%（n=6）。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于 0，2，4，6，8 h 时进样测定，记录峰面积。结果盐酸非索非那定和盐酸伪麻黄碱的 RSD分别为0.89%和0.82%（n=5），表明供试品溶液在8 h内稳定。

重现性试验：取同一批样品，按含量测定项下方法配制供试品溶液，依法测定含量。结果非索非那定的平均标示含量为99.77%，RSD为0.50%（n=6）；盐酸伪麻黄碱的平均标示含量为99.99%，RSD 为 0.38%（n=6）。

加样回收试验：按照模拟处方比例分别精密加入对照品及辅料适量，按含量测定项下方法制成低、中、高浓度各3份共9份的溶液，取样测定含量并计算回收率[4]。结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n=9）

2.4 样品含量测定

取供试品溶液20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。另取经105℃干燥至恒重的盐酸伪麻黄碱与盐酸非索非那定对照品适量，同法测定，按外标法用峰面积计算供试品中盐酸非索非那定与盐酸伪麻黄碱的标示百分含量。结果批号为20060224，20060325，20060417的3批样品中，盐酸非索非那定的标示百分含量分别为100.34%，99.75%，100.32%，盐酸伪麻黄碱的标示百分含量分别为99.93%，99.77%，98.81%。

3 讨论

曾取非索非那定对照品与盐酸伪麻黄碱对照品适量，分别用流动相溶解，并制成每1 mL分别含非索非那定30 μg和盐酸伪麻黄碱15 μg的溶液，在200～400 nm波长范围内测定吸收光谱。结果显示盐酸伪麻黄碱紫外吸收较弱，仅在210 nm波长附近有最大吸收，而非索非那定的最大吸收波长在220 nm附近。为了能同时检测非索非那定与盐酸伪麻黄碱，故选用210 nm作为本品的检测波长。

考察0.05 mol/L磷酸二氢钾-甲醇（30∶70）作为流动相时，对比了加与不加离子对试剂十二烷基硫酸钠对色谱分离的影响，以选择最佳流动相条件。结果显示不加离子对试剂，非索非那定的出峰时间和溶剂峰接近，且两者不能有效分离，影响准确定量；加入十二烷基硫酸钠，则可增加非索非那定的保留性，使样品不至于过快洗脱，与溶剂峰达到有效分离。

本试验结果表明，反相离子对高效液相色谱法可以同时测定非索伪麻缓释片中盐酸非索非那定和盐酸伪麻黄碱的含量，且快速、简便、灵敏、准确。

[1]Bunnag C，Jareoncharsri P，Tunsuriyawong P，et al.A non-comparative trial of the efficacy and safety of fexofenadine for treatment of perennial allergic rhinitis[J].Asian Pac J Allergy Immunol，2000，18（3）：127-133.

[2]Nelson HS，Reynolds R，Mason J.Fexofenadine HCl is safe and effective for treatment of chronic idiopathic urticaris[J].Ann Allergy Astma Immunol，2000，84（5）：517-522.

[3]王 琳，张天虹，江荣高.HPLC法同时测定非索伪麻缓释双层片中盐酸非索非那定与盐酸伪麻黄碱的含量[J].沈阳药科大学学报，2003，20（4）：266-271.

[4]Maggio RM，Castellano PM，Vignaduzzo SE，et al.Alternative and improved method for the simultaneous determination of fexofenadine and pseudoephedrine in their combined tablet formulation[J].J Pharm Biomed Anal，2007，45（5）:804-810.