高效液相色谱法测定结石康胶囊中延胡索乙素含量

2010-06-01石国明梁利香

中国药业 2010年10期

陈琼，石国明，孔泉，梁利香

（1.河南信阳农业高等专科学校，河南信阳 464000； 2.河南羚锐制药股份有限公司，河南信阳 464000）

结石康胶囊为河南羚锐制药股份有限公司生产的中药三类新药，由三叶青、广金钱草等14味药材精制而成，具有清热利湿、益气活血、利尿排石的功效，用于治疗肾、输尿管或膀胱的小结石等。其有效成分延胡索乙素原标准中含量测定方法为薄层扫描法，检测周期长，检测误差大。为此，笔者采用高效液相色谱（HPLC）法对结石康胶囊中延胡索乙素的含量测定方法进行了研究，报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司），包括VWD紫外检测器，Agilent化学工作站。延胡索乙素对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号为110726-200409）；乙腈为色谱纯，水为纯化水，磷酸为分析纯；结石康胶囊（河南羚锐制药股份有限公司，批号分别为070812、070813、070814，规格为0.38 g/粒）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[1]与系统适用性试验

色谱柱：XDB-C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm），用十八烷基键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.1%磷酸（用三乙胺调pH=6.0，35∶65）；检测波长：283nm；进样量：20 μL。理论塔板数按延胡索乙素峰计算应不低于3 000，色谱图见图1。

2.2 溶液制备

精密称取延胡索乙素对照品适量，加甲醇制成每1 mL含30 μg的溶液，即得对照品溶液。取样品内容物2 g，精密称定，加5%的氢氧化钠溶液40 mL，超声处理30 min，放冷，移入分液漏斗中，残渣用10 mL水分数次洗涤，移入分液漏斗中，然后用乙醚振摇提取4次，每次20 mL，合并乙醚液，挥去乙醚，残渣用甲醇分次溶解，加甲醇定容至5 mL，滤过，即得供试品溶液。按处方取不含延胡索的其他药物，按制备工艺制成阴性样品，同法制备阴性对照品溶液。

图1 高效液相色谱图

2.3 方法学考察

标准曲线建立[2]：取对照品溶液稀释至一定质量浓度，进样量分别为 0.087 2，0.261 6，0.436 0，0.872 0，1.046 4 μg。以对照品的进样量（μg）为横坐标、峰面积值为纵坐标作图。回归方程为 Y=1 066.748 9 X-11.562 3，r=0.999 8（n=5）。结果表明延胡索乙素进样量在0.058 5～0.585 0 μg之间与峰面积线性关系良好。

重现性试验：取同一批号样品，依法测定。结果含量的 RSD=0.66%（n=6），表明方法重现性良好。

精密度试验：取同一对照品溶液，连续进样测定。结果峰面积积分值的 RSD=0.26%（n=6），表明精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，每隔一定时间测定1次。结果峰面积积分值的 RSD=0.37%，表明供试品溶液在10 h内基本稳定。

加样回收试验：取已知含量的样品约2 g，精密称定，分别精密加入高、中、低3个水平的延胡索乙素对照品溶液各2份，按供试品溶液制备溶液并测定含量，计算回收率。结果见表1。