类风湿关节炎患者抗环瓜氨酸肽、角质蛋白抗体和类风湿因子相关性探讨

陈绩才 林秋强 陈韧 林玉英

类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis，RA)诊断标准以前主要依靠临床表现、Х线检查以及类风湿因子(Rheumatoid Factor RF)检测，当影像学出现改变时，骨质已出现破坏，而RF又缺乏特异性，以上诊断标准不利于RA早期诊断。近年来，研究较多的对RA的诊断有几种自身抗体的检测，如抗核周因子(Antiperinuclear factor，APF)、抗角质蛋白(Antikeratin antibody，AKA)及抗聚角蛋白微丝蛋白(Anti-filaggrin antibody，AFA)、抗 Sa抗体以及抗环瓜氨酸肽(Cyclic citrullinated peptid CCP)均有较高的特异性。目前对抗CCP和AKA的研究主要集中在对RA的诊断价值的研究，对抗CCP、AKA和RF三者之间的相关性并未进行深入的研究。为探讨抗CCP、AKA、RF三者之间的关系及对RA诊断的临床意义，本研究不仅对RA患者血清内抗CCP、AKA和RF进行检测，并对三者之间的相关性进行探讨。

1 资料与方法

1.1 RA患者组 共90例，为我院风湿科就珍的患者，诊断符合1987年ARA RA分类标准，其中女71例，男19例，年龄最大74岁，最小25岁，平均51岁。

1.2 方法

1.2.1 抗CCP(第二代)和AKA购自德国欧蒙实验诊断试剂有限公司，采用酶免疫法检测抗CCP抗体，间接免疫荧光法检测角质蛋白抗体，严格按照试剂说明书进行操作检测。

1.2.2 RF检测:试剂购自上海捷门生物试剂有限公司产品，严格按照说明书操作。

2 结果

2.1 抗CCP结果判定 抗CCP抗体浓度大于10RU/ml作为诊断标准，共有75例阳性，阳性率为83.3%(75/90)。5～10 RU/ml为可疑，追综观察。见表1。

2.2 AKA结果判定 血清作1∶10稀释，在角质层出现点片状或板层状绿色荧光判为阳性，共有40例阳性，阳性率为44.4%(40/90)。

2.3 RF结果判定 血清作1∶20稀释，出现肉眼可见颗粒凝集判为阳性，共有60例阳性，阳性率为66.7%(60/90)。

表1 抗CCP、AKA和RF的相关性比较

3 讨论

1979 young等人从wistar大鼠食管中1/3冰冻切片为底物，采用间接免疫荧光法(indirect immunofluosence，IIF)在RA患者血清中发现了一种能与鼠食管角质层反应的抗体，将其称为角质蛋白抗体，即为AKA，并认为它对RA的诊断具有较高的特异性［1］。其后许多学者进行了研究，因其抗原制备和保存方法不同，阳性结果判断标准不一致，使其抗本的敏感性和特异性差别很大。1989年vincent提出IIF检测AKA操作规范及以角质层线状或板层状荧光为阳性判断标准以来，文献报道IIF法检测AKA的特异性明显提高。用IIF检测RA患者AKA的敏感度和特异性分别为36%～59%和88%～99%［2］。本研究AKA检测采用标准试剂盒，对RA患者检测的灵敏度达到44.4%，与文献报道相符。进一步的临床研究发现，AKA阳性患者常表现为ESR增快，CRP增高，循环免疫复合物增多，所伴发的关节外表现较多，预后较AKA阴性者差，并认为AKA是判断RA预后的指标之一。在临床研究还发现，对AKA(40/90)阳性RA患者的随访研究发现，当病情活动时，AKA和CRP增高，当病情缓解时AKA和CRP随之下降;与RA的病情严重程度和疾病活动相关［3，4］。本研究还对AKA阳性而RF阴性的健康人进行追踪观察，最后有一部分人发展为典型的RA，与RF因子在RA患者血清出现之间无相关性。因此，AKA可能是RA早期诊断指标之一［4］。

已有的研究表明:AKA的靶抗原为丝集蛋白，而丝集蛋白与前丝集蛋白相比，丝集蛋白具有更多的瓜氨酸位点，且检测敏感性要高于前丝集蛋白。CCP正是依据AKA抗原位点的特性，在体外合成的一种人工抗原。由于该抗原具备了多个瓜氨酸位点，因此敏感度得到了明显提升而特异性保持不变。2000年Schellekens合成环瓜氨酸肽(CCP)，用环瓜氨酸肽为抗原基质，用ELISA法检测RA患者血清中的抗CCP，并证实抗CCP抗体对RA具有很高的敏感性和特异性。但抗CCP在RA患者中检测的灵敏度各家报道不一，本研究采用标准化抗CCP第二代试剂盒，在RA患者中检测的灵敏度为83.3%，与胡学芳报道相符［5］。本研究还发现，在RA患者抗CCP的动态观察研究中，没有发现RA患者抗CCP阳性转为阴性，也没有发现RA患者抗CCP阴性转为阳性，说明RA患者关节慢性侵蚀性损害与抗CCP长期存在有关。Bas等［6］也报道CCP抗体与RA骨侵蚀具有相关性。现有的研究表明，AKA针对的抗原是天然丝集蛋白，而丝集蛋白的确具有多个瓜氨酸位点，同时还具备多个精氨酸位点。AKA抗体所结合的抗原位点并不仅仅局限于瓜氨酸化的位点，而是整个分子所形成的位点。也就是说，瓜氨酸化位点只是抗体与抗原结合的其中一个要素。CCP是针对丝集蛋白在体内表达的特点，在体外人工合成的瓜氨酸多肽。抗CCP抗体同样并不是仅仅局限于与瓜氨酸位点相结合，而是与整个CCP分子所构成的抗原位点相结合。而且CCP是人工合成的抗原，而AKA抗原为天然抗原。所以，AKA与抗CCP的抗原位点不完全重叠，本研究也证实了这一点，资料经统计学分析，P＞0.05。因此，AKA与抗CCP在RA患者血清出现之间也无相关性。

而在分析抗CCP与RF时，两者之间一致率为65.6%(59/90)，资料经统计学分析，P＜0.05。因此，抗CCP与RF在RA患者血清出现之间有关性。

虽然人们先后发现了上述三种自身抗体，对三者之间主要集中在对RA的诊断价值研究，但对三者之间的相关性并未进行深入的研究。一般认为，AKA与疾病的严重程度及活动性相关，可用于对患者病情及预后的判断;而抗CCP与骨关节侵蚀密切相关，可用于对骨关节破坏严重程度的判断，并由于其检测灵敏度高，可作为对RA早期诊断;RF虽然不具有对RA诊断特异性，但其效价在判断预后上有重要作用。本研究表明，虽然RA患者血清中可出现上述三种自身抗体，但AKA与RF，AKA与抗CCP的出现无明显相关性，而抗CCP与RF之间的出现有相关性。在研究中我们还发现，在一个患者中可检测出一种、二种抗体，甚至可同时出现上述三种抗体，但也有一部分患者体内检测不出上述任何抗体，这一部分患者预后有待进一步的追踪研究。

［1］Youg B J J，M alya RK，leslie RDG，et al.Antrkeratin antibodies inrheum atoid arth ritis.BM J，1979，2:97-99.

［2］范列英.类风湿性关节炎血清早期诊断指标的研究进展.中华医学检验杂志，2003，26(10)632-634.

［3］Vincent C et al.Ann Rheum Dis，1989，48:712-722.

［4］Paimela L et al.Ann Rheum Dis，1992，51:743-746.

［5］胡学芳，魏华，朱爱萍，等.抗环瓜氨酸肽抗体检测在类风湿关节炎诊断中的临床意义.中华检验医学杂志，2003，26(8):489-487.

［6］Bas S，perneger TY.Diagnostic tests for rherum a to idarthritis:comparison of antibodies and IgM rheum a to id factors Rheum a to logy，2002，41(7):809.