结核蛋白芯片对肺结核球及肺门淋巴结结核与其他肺部占位病变的诊断价值

孙逊 蒋超英

(河北省白求恩国际和平医院 石家庄 050082)

结核蛋白芯片对肺结核球及肺门淋巴结结核与其他肺部占位病变的诊断价值

孙逊 蒋超英

(河北省白求恩国际和平医院 石家庄 050082)

肺部占位性病变依其部位可采取CT引导下肺穿、支气管镜下钳取或穿刺针吸活检等采集标本,若出现胸液或有痰可抽取胸液或痰涂片检查来确诊,但仍有相当部分患者由于病变部位、年龄、身体状况、并发症等限制不能取得标本,尤其肺癌不能和肺结核球及肺门淋巴结结核鉴别,以至于治疗失去了方向。蛋白芯片技术采用基因工程表达的结核杆菌重组蛋白抗原16 kD、38 kD和脂阿拉伯甘露聚糖LAM 3种结核分枝杆菌特异性抗原为标的来检测血清中的抗体,具有简便快速的特点,结合其他指标对肺癌与结核做出初步鉴别是本研究的目的。

1 材料与方法

1.1 一般资料 选取我院2006年4月—2009年6月肺部CT检查显示占位性病变患者58例,所有患者依其部位分别行CT引导下肺穿刺活检、纤维支气管镜下钳取或针吸活检,痰涂片或胸液镜检,结合其他临床资料,确诊肺结核球及肺门淋巴结结核患者21例,均为病理切片抗酸染色阳性或痰中找到结核杆菌。肺癌18例,炎性假瘤、肺脓肿、肺部其他瘤样病变等19例,均为病理确诊。将上述患者分为结核组21例及非结核组37例。所有患者均抽取空腹静脉血5 ml,行结核分枝杆菌多种抗原IgG抗体蛋白芯片检测。

1.2 检测方法和步骤 分离血清,采用南京大渊生物技术工程有限责任公司提供的蛋白芯片试剂盒(批号：PBT TBO1A20080302)和芯片阅读仪,按芯片说明书进行操作,结果根据厂家设置参数自动判别。LAM、38 kD与16 kD中任意一项指标阳性判为结核杆菌感染阳性。采用盲法检测,检验人员不知道检测标本的来源。

1.3 检测原理 本研究所用的结核分枝杆菌IgG抗体检测试剂盒以微孔滤膜为载体,利用微阵列技术将纯化的LAM、基因工程重组并纯化的16 kD和38kD 3种抗原固相于同一膜片上,在加入待检血清后利用微孔滤膜的浓缩、凝集和渗滤作用,使抗原抗体反应在固相膜上快速进行,再以免疫金作为显色剂直接在膜上显色以检测血清中是否有相应抗体,反应后的反应板放入芯片识别仪,在专门软件的支持下对不同点阵的灰度值进行分析,得出结果。

1.4 统计学分析 采用SPSS10.0软件进行统计学处理。2组患者的阳性率比较采用χ2检验,P＜0.05差异有统计学意义。

2 结果

LAM、38 kD与16 kD中任意一项指标阳性总体判为阳性。3项指标均为阴性判断为阴性。整体检测结果如表1所示;结核组3项指标的详细检测结果如表2所示。

由以上结果我们看到,结核组敏感性61.9%(13/21),其中LAM 和38 kD同时阳性比例最高为19%(4/21),其次为 38 kD单项阳性 14.3%(3/21)。非结核组误诊率24.3%(9/37),其中肺癌组为16.7%(3/18),其他组为31.6%(6/19)。非结核组总体特异性为75.7%(28/37),肺癌组特异性为83.3%(15/18),其他组特异性为 68.4%(13/19)。本研究阳性预测值及阴性预测值分别为59.1%(13/22)及77.8%(28/36)。结核组和非结核组总体阳性率差异有统计学意义(P＜0.01),和肺癌组总体阳性率亦差异有统计学意义(P＜0.01)。但结核组漏诊率达38.1%(8/21)。

3 讨论

结核病的诊断目前方法较多,主要包括痰涂片镜检、痰/其他体液或组织培养、血清ELISA检测结核抗体、PCR检测结核菌特异性DNA片断、影像学检查等,对于采样方便,临床表现典型的病例,诊断不难。但多数肺门淋巴结结核及肺结核球和肺癌等占位病变鉴别困难。对于占位部位靠近纵隔或大血管,或患有肺气肿、肺大疱容易并发气胸,或肿大的淋巴结气管镜下穿刺困难等情况,由于无法取样做病理,只能寻求其他诊断途径。结核蛋白芯片的出现为我们提供了诊断结核病的新途径,其检测原理如前所述,LAM是一种非蛋白结核分枝杆菌抗原,化学本质是多糖,具有较强的免疫原性,能够刺激结核菌感染者产生抗体,而其他分枝杆菌由于表面LAM含量低,不能刺激机体产生高水平抗体量,故抗LAM-IgG抗体检测的特异性和敏感性都较高。基因工程重组的38 kD和16 kD抗原蛋白和结核杆菌本身合成的抗原免疫性差异无统计学意义,3种抗原均为结核杆菌特异性较高的抗原,存在于结核杆菌复合群中,南京大渊公司采用这3种抗原同时检测确实能提高检测的阳性率。一般来说,感染结核菌后IgG抗体在体内可存在6个月～1年的可检测到水平,而后下降,若出现结核活动可再次升高,这就为鉴别结核和肺癌提供了依据。

表1 蛋白芯片检测血清标本的整体结果

表2 结核组3种结核分枝杆菌抗原的抗体检测结果

国内很多学者对于大渊公司的蛋白芯片检测结核菌感染的敏感性和特异性已有较多研究,蛋白芯片检测结核病变的阳性率多在 60%～65%[1-2]。有研究显示蛋白芯片对于各种结核的整体检测敏感性约为 65%～80%[1-4],痰涂阳者达到80%以上[5],痰涂阴者也可达到60%稍多[7],但对于单纯的肺门淋巴结或肺结核球未见专门研究。肺门淋巴结多为近期几个月内的病变,抗体水平多在可检测到的水平。肺结核球多由于干酪性病变吸收和周边纤维膜包裹或干酪空洞阻塞性闭合形成的,少数结核球内可液化坏死形成空洞,也可长期无变化,有时和肺癌等无法区别,总体来说是个慢性改变。本研究蛋白芯片对于病理确诊的结核结节样病变敏感性为61.9%,和肺癌、炎性假瘤、肺脓肿及其他瘤样病变阳性率(24.3%)比较差异有统计学意义,可做为筛检的指标。其中,38 kD和 LAM出现阳性者较多,分别为10例和8例,其他研究也显示感染结核后38 kD和LAM阳性率较高[7-8]。考虑到老年人患结核病同时患肺癌的机率较高,影像学很难区分,检测结核抗体就有优势,从本次研究看,阴性预测值77.8%,即3项抗体均阴性则未患结核的机会远大于一半。对于单纯的肺癌患者,阳性率为16.7%(3/18),和结核组61.9%(13/21)比较差异有统计学意义(P＜0.01),若再结合其他指标及临床特点则可做鉴别。但本研究样本量较小,今后应扩大研究例数得到的结论才更可靠。

必须指出的是,结核分枝杆菌抗原多而复杂,在宿主体内表达的数量、种类或时机可能随病人的个体免疫背景和病程而异,表现出不同的抗原抗体谱。蛋白芯片3种抗体联合检测是为了提高检测的灵敏度。血清学诊断,无论是ELISA、Digfa还是蛋白芯片,均只发挥辅助诊断作用,无论确诊结核或肿瘤,均需要结合其他方面的证据。

[1]吴艳,赵英,符生苗,蔡俊宏.结核分枝杆菌蛋白芯片检测对结核病诊断的价值[J].中国热带医学,2007,7(6)：865-866.

[2]朱中元,王海波,刘爱国,谢勇.抗结核分枝杆菌多种抗原的抗体检测蛋白芯片研究[J].中国热带医学,2004,4(6)：907-910.

[3]郭光云,陈功,郭凌郧,王家宁.结核蛋白芯片对肺结核诊断的临床价值[J].中国防痨杂志,2005,27(6)：367-369.

[4]王海波,朱中元,谢勇.抗结核分枝杆菌抗体检测蛋白芯片的临床应用[J].中国热带医学,2005,5(2)：317-318.

[5]米琳,刘幸福.蛋白芯片技术检测抗酸杆菌涂片阳性患者结核分枝杆菌多种抗原的IgG抗体的研究[J].山西医药杂志,2006,35(11)：1047.

[6]郭光云,陈功,王家宁,郭凌云.结核蛋白芯片联合PPD检测对痰菌阴性肺结核的诊断价值[J].郧阳医学院学报,2005,24(2)：85-86.

[7]潘继文.蛋白芯片3种抗原检测结核抗体对结核病的诊断意义[J].现代中西医结合杂志,2006,15(14)：1962-1963.

[8]王红.蛋白芯片技术检测结核分枝杆菌IgG抗体结果分析[J].实用医技杂志,2006,13(22)：3955-3956.

2009-10-24)

(本文编辑：李树萍)