加味西黄软胶囊中胆酸、麝香酮的含量测定

金 芬， 熊富良， 熊登科， 熊 莉， 向 阳

（1.湖北中医学院，湖北武汉430061；2.武汉理工大学化工学院，湖北武汉430070；3.湖北省暨武汉市中药现代化工程技术研究中心，湖北武汉 430052）

加味西黄软胶囊中胆酸、麝香酮的含量测定

金 芬1， 熊富良2*， 熊登科3， 熊 莉3， 向 阳3

（1.湖北中医学院，湖北武汉430061；2.武汉理工大学化工学院，湖北武汉430070；3.湖北省暨武汉市中药现代化工程技术研究中心，湖北武汉 430052）

加味西黄软胶囊；胆酸；麝香酮；含量测定

目的：建立反相高效液相色谱-蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD）测定加味西黄软胶囊（牛黄、麝香、蟾酥、乳香、没药）中胆酸的含量；建立气相色谱法测定加味西黄软胶囊中麝香酮的含量。方法：胆酸采用十八烷基键合硅胶色谱柱（Kromasil C18，5 μm，4.6 mm × 250 mm），流动相为甲醇 －0.1%冰醋酸（73∶27），流速：1.0 mL/min；ELSD检测器参数：蒸发温度40℃，载气（N2）压力200 kPa。麝香酮的含量测定以正十八烷为内标物，采用DB-1型毛细管色谱柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm）；FID检测器；程序升温。结果：胆酸在45.2～904 ng范围内呈良好的线性关系，平均回收率为99.06%，RSD为1.56% 。麝香酮在0.05～0.5 mg/mL范围内与峰面积比值的线性关系良好，平均回收率为99.40%，RSD为0.95%。结论：本方法简便、准确，可用于该制剂的质量评价。

加味西黄软胶囊是由牛黄、麝香、蟾酥（制）、乳香（制）、没药（制）五味药组成的复方中药制剂，具有清热解毒、活血化瘀、消毒散结、止痛等功效，临床上用于痈疽疔毒、瘰疬、流注、癌肿等的治疗。方中牛黄既为君药又为贵重药、麝香为贵重药，因此建立了这两味药材的含量测定方法。胆酸为牛黄的有效成分之一，麝香酮为麝香的有效成分之一，本试验参考有关文献［1］，通过大量试验建立了胆酸的反相高效液相色谱-蒸发光散射检测法；参照《中国药典》2005年版“麝香”项下的含量测定方法［2］及有关文献［3］，制定了制剂中麝香酮的气相色谱分析法。方法简便、准确，分离度、稳定性、重现性等均能满足要求，可用于加味西黄软胶囊的质量评价。

1 仪器与试药

SHIMADZU 10A高效液相色谱仪（日本岛津）；SEDEX 75蒸发光散射检测器；HW色谱工作站2.02版（南京千谱软件公司研制）；Agilent 6890气相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；Sartorius CP225D型分析天平（十万分之一）；AB204-N型分析天平（万分之一）；超声仪（功率250W，40KHz，上海船舶电子研究所）；胆酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100078-200414）；麝香酮对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110707-200107）；正十八烷（色谱纯，美国Sigma公司）；甲醇（色谱纯，美国TEDIA）；水为重蒸馏水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 胆酸的含量测定

2.1.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil C18（5 μm，4.6 mm ×250 mm）；流动相：甲醇－0.1%冰醋酸（73∶27）；柱温：30℃；流速：1.0 mL/min；ELSD检测器参数：蒸发温度：40℃，载气（N2）压力：200 kPa。

2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取胆酸对照品适量，加甲醇稀释成每1 mL含胆酸50 μg的溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备 取本品内容物约0.8 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理 30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。

2.1.4 空白试验 按加味西黄软胶囊处方比例及制备方法，自制缺牛黄的阴性样品，按2.3项下方法制备阴性样品溶液。按上述色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，测定。结果阴性无干扰，见图1～3。

图1 胆酸对照品HPLC色谱图

图2 胆酸供试品溶液HPLC色谱图

图3 牛黄阴性溶液HPLC色谱图

2.1.5 线性关系 按对照品溶液制备方法，精密配制浓度为0.090 4 mg/mL的对照品溶液，精密吸取上述对照品溶液 0.5、1、2、3、5、10 mL，分别置 10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，各精密吸取10 μL进样，按上述色谱条件测定。以进样量的对数值（X：log M）为横坐标，峰面积的对数值（Y：log A）为纵坐标，绘制标准曲线，测定结果表明，胆酸在进样量45.2 ng～904 ng范围内呈良好的线性关系，回归方程为：Y=1.121 3 X+2.418 7，r=0.999 9。

2.1.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液15 μL，重复进样6次，测定峰面积。结果求得峰面积平均值为392 099；相对标准偏差（RSD）为0.67%。

2.1.7 稳定性试验 将供试品溶液室温下放置0、2、4、6、8、12、24 h，精密吸取 10 μL 进样，测定其峰面积，求得峰面积平均值为 525 327；RSD为1.25%（n=7），表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.1.8 重复性试验 取同一批号的样品5份，照供试品溶液制备方法制备，精密吸取10 μL进样，测定，计算含量，结果平均含量为2.40 mg/g；RSD为1.49% 。结果表明本法的重复性良好。

2.1.9 回收率试验 精密称取已知含量的样品0.4 g，精密加入胆酸对照品，按供试品溶液的制备方法制备，并依法测定，计算，其平均回收率为99.06%，RSD=1.56% 。结果见表1。

表1 胆酸回收率试验结果

2.1.10 样品的测定 按拟定的含量测定方法，测定3批样品中胆酸的含量，结果见表2。

表2 3批样品胆酸测定结果

2.2 麝香酮的含量测定

2.2.1 气相色谱（GC）条件 色谱柱：DB-1毛细管（30 m×0.32 mm ×0.25 μm）；FID检测器；载气：N2，1 mL/min；H2，40 mL/min；空气：400 mL/min；进样口温度：260℃，检测器温度：300℃，柱温：为程序升温，起始120℃，保持1 min，以 4℃/min升温至160℃，保持15 min，再以10℃/min升温至250℃，保持5 min。进样量：1 μL，分流进样，分流比：20∶1。

2.2.2 内标溶液、对照溶液的制备

近年来随着素质教育的推进，虽然越来越多的准大一新生在高考填报志愿时，通过网络及相关的指导机构，了解了专业培养目标、专业所学课程、专业内包含的相关职业，大致选择了与自己兴趣能力相匹配的专业，但是在踏入大学之门后，面对大学里各种各样的社团、学生组织，丰富多彩的学生活动，特别是自由自主的大学氛围，学习上没有人督促和监督，突然不知道如何在学校里举办的各种活动和繁重的课业负担之间找到平衡，整天忙碌却不知忙碌的是什么，没有一个明确的方向和目标。

2.2.2.1 内标溶液的制备 称取正十八烷适量，加乙醚制成每1 mL含0.1 mg的溶液。

2.2.2.2 对照品溶液制备 称取麝香酮对照品适量，加乙醚制成每1 mL含1.0 mg的溶液。

2.2.2.3 校正因子测定 精密吸取对照品溶液2 mL，置10 mL量瓶中，加内标溶液稀释至刻度，摇匀，吸取1 μL注入气相色谱仪，连续进样3次，计算平均校正因子f=0.861 7。

2.2.3 供试品溶液制备方法 取本品内容物0.8 g，精密称定，置大试管中，精确加入内标溶液5 mL，密塞，超声处理10 min，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 专属性试验 配制缺麝香的阴性样品，按供试品溶液制备方法配制阴性样品溶液，吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各1 μL，注入气相色谱仪中测定。结果表明：阴性样品无干扰（见图4～6）。

图4 麝香酮对照品溶液GC色谱图

图6 麝香阴性溶液GC色谱图

2.2.5 线性范围 精确吸取对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分别置10 mL 量瓶，各精确加入5.0 mL内标溶液，用乙醚稀释至刻度，摇匀，分别吸取1 μL注入气相色谱仪，进行测定。以对照品与内标峰面积的比值（Y：AR/AS）对对照品浓度（X：CR）进行线性回归，得回归方程为：Y=4.390 X －0.016 1，r=0.999 9。表明麝香酮进样量在0.05～0.5 mg/mL范围内线性关系良好。

2.2.6 仪器精密度试验 精密吸取同一样品溶液1 μL，按色谱条件连续重复进样 6次，计算麝香酮与内标物峰面积的比值，平均比值为1.055 5，RSD为0.98%。表明该仪器的精密度良好。

2.2.7 供试品溶液稳定性考察 将西黄软胶囊供试样品溶液室温保存，在 0、2、4、6、8、10 h 时进样，计算麝香酮与内标物峰面积的比值，平均比值为1.089 4，RSD为1.22%。结果表明：样品溶液在10 h内保持稳定。

2.2.8 重复性试验 取同一批样品6份，按含量测定方法操作，计算，平均含量为0.634 mg/g。结果表明方法重复性良好，RSD为1.65%。

2.2.9 回收率试验 精密称取6份已知含量的西黄软胶囊0.4 g，置大试管中，各精密加入麝香酮对照品溶液（0.252 mg/mL）1 mL，精确加入内标溶液5 mL，密塞，超声处理10 min，过滤，取续滤液，即得测定用样品溶液；按正文样品含量测定方法进行测定，计算准确度，见表3。结果表明：本方法的准确度较好，平均回收率为99.40%，RSD为0.95%。

表3 麝香酮回收率试验结果

表4 3批样品麝香酮测定结果

3 讨论

3.1 供试品溶液制备方法的选择 本试验曾比较《中国药典》（2005年版）牛黄胆酸和麝香的含量测定项下供试品的制备方法，结果表明本法操作简便，主峰分离度高，胆酸和麝香酮含量基本提取完全。

3.2 胆酸流动相的选择 由于胆酸在pH 4～6时，游离胆酸以离子型和非离子型2种形式存在，因此在流动相的选择时发现，流动相pH对胆酸的色谱行为影响很大，只有采用酸性洗脱剂，较好的抑制胆酸电离，样品才能得到较好的分离，且呈现1个对称的色谱峰。同时由于样品中成分的复杂，酸性洗脱剂冲柱的时间须适当延长。

3.3 内标法计算麝香酮的含量 麝香酮的气相色谱法采用手动进样，由于留针时间和室温等对进样量的影响，使进样量不易精确控制，故采用内标法进行计算。

3.4 小结 本试验建立的胆酸的高效液相色谱法和麝香酮的气相色谱法具有操作简便，分析条件易于精确控制，重现性好和精密度高等优点，为加味西黄软胶囊的质量标准的建立提供了科学依据。

［1］李晓蒙，刘惠琼，程力惠.HPLC-ELSD测定清开灵颗粒中胆酸和猪去氧胆酸的含量［J］.中成药，2007，29（4）：623-625.

［2］马玲云，郑笑为，马双成.HPLC-ELSD测定消痔灵片中胆酸的含量［J］.药物分析杂志，2006，26（2）：250-252.

［3］袁红宇，欧 宁，郭立玮.HPLC-ELSD测定超细珠黄凝胶中胆酸的含量［J］.现代中药研究与实践，2005，19（6）：41-43.

［4］中国药典［S］.一部.2005：48.

［5］李玲玲.大圣宝丹中麝香酮的气相色谱法分析［J］.中成药，2003，25（9）：768-769.

［6］张翠英，李振国，马晓峰，等.毛细管色谱柱测定消癌胶囊中麝香酮和冰片的含量［J］.中国药师，2007，10（11）：1101-1104.

Determination of cholic acid and muscone in Jawei Xihuang Soft Capsule

JIN Fen1， XIONG Fu-liang2， XIONG Deng-ke3， XIONG Li3， XIANG Yang3

（1.Hubei College of Traditional Chinese Medicine，Wuhan 430061，China；2.College of Chemical Engineering，Wuhan University of Technology，Wuhan 430070，China；3.Hubei Engineering Technology Centre of Modernization of TCM，Wuhan 430052，China）

Jawei Xihuang Soft Capsule；cholic acid；muscone；determination

AIM：To develop a method for determining cholic acid by HPLC-ELSD and GC was applied to determing muscone；in Jawei Xihuang Soft Capsule（Calculus Bovis，Moschus，Venenum Bufonis，Olibanum，Myrrha）.METHODS：A C18column（Kromasil C18，5 μm，4.6 mm × 250 mm）was used as stationary phase，the mobile phase was methanol－0.01%glacial acetic acid（73∶27）at a flow rate of 1.0 mL/min.The parameters of ELSD were set as follows：evaporation temperature was 40℃，carrier gas（N2）pressure was 200 kPa.The GC system consisted of DB-1 capillary column（30 m × 0.32 mm × 0.25 μm）and FID as the detector.The programmed temperature-GC and internal standard method were employed to determine the content of muscone.RESULTS：The linear ranges of cholic acid and muscone were in the range of 45.2 ng－904 ng and 0.05 mg/mL—0.5 mg/mL respectively.The average recoveries were 99.06%and 99.40%with RSD of 1.56%and 0.95%re-spectively.CONCLUSION：The method is convenient and accurate，and it can be used for the quality evaluation of Jawei Xihuang Soft Capsule.

R927.2

A

1001-1528（2010）03-0429-04

2009-02-18

金 芬（1982－），女，在读硕士，研究方向：中药新制剂、新剂型。Tel：15872376886

*通讯作者：熊富良，男，教授。Tel：（027）87850820 E-mail：fuliang_xiong@holley.cn