HPLC测定血栓通注射液中3种皂苷含量

2010-05-26刘建俊

中成药 2010年6期

刘建俊，郭兵

（湖南省常德市药品检验所，湖南常德 415000）

血栓通注射液为三七总皂苷制成的静脉注射液，其主要含人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1等皂苷，临床广泛应用于心脑血管疾病的预防与治疗，现行质量标准为《中药成方制剂第二十册》［1］，采用比色法测定三七总皂苷的含量，比色法用于定量测定专属性差、影响因素较多且操作过程复杂;采用薄层扫描测定人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量，薄层扫描用于定量测定误差较大、影响因素较多;本实验建立高效液相色谱法同时定量测定血栓通注射液中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1的含量，该法简便、准确、重复性好及回收率高，可为该制剂3种皂苷分别定量测定提供可靠实验方法，也可用于血塞通注射液等三七制剂中3种皂苷的定量测定。

1 仪器与试药

SHIMADZU高效液相色谱仪（日本岛津），包括SPD-20A工作泵、SPD-M20A DAD检测器、Lc-solution工作站;三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1（均购自中国药品生物制品检定所;乙腈、甲醇均为色谱纯，水为娃哈哈饮用纯净水。血栓通注射液及阴性对照样品均由广东永康药业有限公司和哈尔滨圣泰制药股份有限公司提供。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件

采用 UltimateTMXB C18柱（4.6 mm ×250 mm，5 μm）;流动相A:乙腈，流动相B:水;检测波长:203 nm，流速:1.0 mL/min，理论塔板数:按三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1计算均不低于5 000，流动相梯度条件见表1。

表1 梯度洗脱条件Tab.1 Gradient elution conditions

2.2 溶液制备

2.2.1 混合对照品溶液用90%甲醇溶解并制成含三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1分别为0.080 2、0.293 88、0.300 6 mg/mL 的混合溶液。

2.2.2 供试品溶液精密量取样品1 mL（约相当于含三七总皂苷35 mg），置50 mL量瓶中，加90%甲醇稀释至刻度，摇匀。

2.2.3 阴性对照溶液取缺三七总皂苷的阴性样品，照供试品溶液制备方法制备。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性试验精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各20 μL，按2.1项下的色谱条件测定。结果供试品中3种皂苷的色谱峰能达到基线分离，其保留时间与相应对照品一致，阴性对照溶液在相同保留时间处无峰，表明阴性无干扰。结果见图1。

2.3.2 线性关系考察精密吸取2.2.1项下对照品溶液分别进样 5、10、20、30、50 μL，以实际进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得各组分的回归方程见表2。结果表明该方法在较大范围内线性关系良好。

图1 高效液相色谱图A.对照品 B.供试品 C.阴性样品 1.三七皂苷R1 2.人参皂苷Rg1 3.人参皂苷Rb1Fig.1 HPLC chromatogramsA.reference substances B.sample C.negative sample 1.notoginsenoside R1 2.ginsenoside Rg1 3.ginsenoside Rb1

表2 3组份线性关系测定结果Tab.2 Linearity of each component

2.3.3 精密度试验精密吸取对照品混合溶液20 μL在2.1项下色谱条件下进样，重复测定6次，结果三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1的RSD分别为:0.23%、0.23%、0.29%，表明仪器的精密度良好。

2.3.4 稳定性试验精密吸取供试品溶液20 μL，分别于0、2、4、8、12、24 h 测定，结果三七皂苷 R1、人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1峰面积的RSD分别为0.31%、0.20%、0.22%，表明供试品溶液稳定性较好。

2.3.5 重复性试验精密量取同一批号供试品6份，按2.2.2项下同法制备供试品溶液，测定，结果三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1含量的RSD分别为0.24%、0.19%、0.21%，表明该测定方法重复性良好。

2.3.6 回收率试验精密量取200 μL已知含量的同一批号供试品6份，置50 mL量瓶中分别精密加入一定量另配的对照品混合溶液，加90%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，进样20 μL，按外标法计算3种组份含量，并计算回收率，测定结果见表3。

表3 回收率试验结果（n=6）Tab.3 Results of recovery tests（n=6）

2.3.7 样品含量测定按2.2.2项下方法制备供试品溶液，共4批，同时配制对照品混合溶液，各进样20 μL，按外标一点法计算结果，测定结果见表4。

3 讨论

因3种皂苷极性相差较大，文献报道三七制剂中皂苷含量均采用梯度洗脱高效液相色谱法［3-5］，本品如按《中国药典》2005版一部［2］三七含量测定项下的梯度洗脱，结果样品峰形差且人参皂苷Rb1峰与杂质峰未完全分离，经过反复改变流动相比例及时间摸索条件，在所选用的梯度洗脱比例下，3种皂苷分离良好，样品峰型好，分离度良好，且快速准确，是很理想的条件。