高蛋白饮食对犬体内司帕沙星药动学的影响

康纪平，何海霞，李秋波，冯晓科（.四川省养麝研究所，都江堰市 6830；2.重庆医科大学附属第一医院临床药理研究室，重庆市 40006）

司帕沙星（Sparfloxacin，SPFX）是第3代氟喹诺酮类广谱抗菌药，已在临床广泛应用，其具有口服吸收良好、组织分布广、血浆蛋白结合率低、消除t1/2长等药动学特点。文献[1]报道，进食几乎不影响其吸收，但高蛋白饮食是否对其吸收等有影响未见文献报道，为此，本研究将探讨高蛋白饮食是否影响SPFX在Beagle犬体内的药动学参数，以为该药的合理用药提供参考。

1 材料与方法

1.1 试药

SPFX片（河南帅克制药有限公司，批号：20081201，规格：每片0.1 g）；SPFX对照品（重庆芸峰药业有限公司，批号：030612，纯度：99.1%；使用时精确称取SPFX 20 mg，置于50 mL容量瓶中，用适量甲醇溶解，加甲醇至刻度，即为400 μg·mL－1的SPFX标准贮备液，备用；再用双蒸水稀释为400 ng·mL－1的工作浓度备用）；内标诺氟沙星（NF，山西博达制药有限公司，纯度：99.0%。使用时精密称取NF对照品10 mg，置于50 mL容量瓶中，用适量双蒸水溶解，加双蒸水至刻度，混匀，即为200 μg·mL－1的NF标准贮备液；再用双蒸水稀释为20 μg·mL－1的工作浓度）；乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯；高蛋白饮食为雀巢奶粉。

1.2 动物

健康合格Beagle犬8只，♀♂各半，体质量10 kg左右，由四川养麝研究所提供。实验动物合格证为：川实动管质第63号，环境设施合格证号为：川实动管第64号。

1.3 仪器

1100系列高效液相色谱（HPLC）仪，包括1100泵系统、可调波长紫外检测器和1100工作站（美国Agilent公司）。

1.4 分组及给药

选取犬8只，♀♂各半，随机分为SPFX空腹组和合用高蛋白饮食组，即分别为空腹组与高蛋白饮食组，每组4只。犬于实验前禁食12 h，实验开始时，高蛋白饮食组供给牛奶每只200 g，同时给予SPFX 10 mg·kg－1[2]；空腹组仅给予SPFX 10 mg·kg－1和水（每只200 mL），然后送回笼中，8 h后统一进食。各组于给药后1、2、3、4、5、6、8、12、24、48 h经大隐静脉采血3 mL，分离血浆，－20℃保存，待测。2周后2组交叉实验，取血样时间等均同前。

1.5 血药浓度测定

1.5.1 色谱条件。色谱柱：Hypersil C18（200 mm×5.0 mm，5 μm）；固定进样环：100 µL；流动相：甲醇-0.008 mol·L－1磷酸盐缓冲液-0.5 mol·L－1四丁基溴化铵＝25∶75∶4；流速：1.0 mL·min－1；紫外检测波长：292 nm；柱温：室温；内标：NF。

1.5.2 样品处理。参照文献[2]，取1.0 mL犬血浆样品，加入NF 0.1 mL（20 µg·mL－1）、0.05 mol·L－1NaOH 0.1 mL 和 4 mL CHCl2，旋摇1 min，3000 r·min－1离心2 min，去有机层，置于40℃水浴中，氮气吹干。取0.1 mL流动相复溶，进样50µL。

1.5.3 方法学研究。（1）色谱行为：在本实验所采用的色谱条件下，取SPFX+NF对照品溶液、空白血浆、空白血浆+SPFX+NF、犬服药后2 h血浆+NF进样分析，色谱见图1。

图1 高效液相色谱图A.SPFX+NF对照品；B.空白血浆；C.空白血浆+SPFX+NF；D.犬服药后2 h血浆+NF；1.NF；2.SPFXFig 1 HPLC chromatographyA.SPFX+NF control；B.blank plasma；C.blank plasma+SPFX+NF；D.plasma 2 h after administration+NF；1.NF；2.SPFX

由图1可见，血浆中SPFX的tR为7.6 min左右，内标NF的tR为4.5 min左右。SPFX和NF峰形良好，且不受血浆内源性物质的干扰。

（2）标准曲线、线性关系与最低定量浓度：在空白血浆中分别添加SPFX使血药浓度相当于4.0000、2.0000、1.0000、0.5000、0.2500、0.1250、0.0625、0.03125 µg·mL－1，按“样品处理”项下操作，将所得数据SPFX峰面积/NF峰面积比Y与SPFX浓度X进行回归，得标准曲线方程为Y＝3.5307X－0.1346（r＝0.9994，n＝5）。结果，SPFX检测浓度线性范围为0.03125～4.0000 µg·mL－1，最低定量浓度为0.03125 µg·mL－1（RSD＝15.66%，n＝5）。

（3）精密度和重复性：取高、中、低3种质控样本（4.0000、0.5000、0.0625 µg·mL－1），每个浓度5份，考察批内和批间变异。批内误差（每个浓度同日内测定5次）、日内变异性结果及批间误差（每个浓度连续测5 d，每天测1次）、日间变异性结果见表1。

表1 精密度及重复性试验结果（n＝5）Tab 1 Results of precision and repeatability（n＝5）

（4）回收率：取高、中、低3种质控样本（4.0000、0.5000、0.0625 µg·mL－1），每个浓度5份，按规定方法评价本法的回收率。结果高、中、低浓度的回收率分别为（101.11±5.43）%、（99.34±3.58）%、（105.28±5.35）%。

（5）冻融稳定性考察：将含药血浆反复冷冻（－20℃）、融化，按“样品处理”项下方法处理及测定，5周内测定5次。结果表明，血浆样品在5周内经反复冻融，稳定性良好，RSD＝6.15%。

1.6 数据处理

采用中国药理数理学会编制的3p97计算机软件，计算各个体的药动学参数。数据以表示，组间行t检验。

2 结果

2.1 药-时曲线

空腹组与高蛋白饮食组SPFX的平均血药浓度-时间曲线见图2。

图2 2组平均血药浓度-时间曲线Fig 2 Mean plasma concentration-time curve of 2 groups

2.2 药动学参数

受试犬血药浓度-时间数据采用计算机3p97程序自动拟合，空腹组与高蛋白饮食组的口服吸收过程分别符合二室、一室模型。求得有关药动学参数见表2。

表2 2组药动学参数比较（，n＝8）Tab 2 Comparison of pharmacokinetic parameters between 2 groups（，n＝8）

表2 2组药动学参数比较（，n＝8）Tab 2 Comparison of pharmacokinetic parameters between 2 groups（，n＝8）

与空腹组比较：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.fasting group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

由表2可见，高蛋白饮食组与空腹组比较，lag time、tmax延长（P＜0.01），t1/2β/t1/2ke降低，Cmax无显著性差异，AUC（0～t）增加。

3 讨论

目前对SPFX的血药浓度检测几乎均选HPLC法测定，但测定条件如流动相等各有不同。在本研究中，笔者选用甲醇和磷酸盐缓冲液，同时加入四丁基溴化铵作为流动相，结果表明检测结果较好、方法简单、重现性好、保留时间恰当。原因是SPFX结构中同时具有芳胺和芳酸结构，整体呈现酸性，如果采用三乙胺和磷酸盐组成缓冲液与甲醇混合可致SPFX的保留时间过短，不能使药物与有关杂质峰充分分离，而加入离子对四丁基溴化铵可使SPFX保留时间延长1倍以上，保证药物与杂质充分分离。

文献[1]报道，进食对SPFX的吸收几乎无影响。本研究结果表明，合用高蛋白饮食后，与空腹相比较lag time延长，导致吸收滞后，故tmax也延长。虽然高蛋白饮食可推迟药物的tmax，并可加速药物自体内的排出，提高了AUC（0～t）值，但Cmax间比较无显著性差异。

总的来说，高蛋白饮食可延缓SPFX的吸收速度，但可增加吸收量，加快其排出速度，可明显影响司帕沙星药动学。该作用是否因高蛋白与SPFX间形成一定的复合物而减慢吸收，促进其排泄引起，尚待进一步研究。

[1]杜黎明，卫洪清，郜 艳，等.反相高效液相色谱法测定人尿中的司帕沙星[J].分析化学，2001，29（9）：1108.

[2]张 斌，汪华蓉，康纪平，等.脂质饮食对加替沙星药动学的影响[J].中国药房，2008，19（25）：1952.