HPLC法测定通便宁片中芦荟大黄素和大黄酸的含量

于 永 洲

(广州市药品检验所，广东省广州市荔湾区西村西增路 23号，510160)

通便宁片是由番泻叶干膏粉、牵牛子、砂仁、豆蔻组成的复方制剂，具有宽中理气，泻下通便的功效，用于实热便秘，其中番泻叶为君药。原标准采用分光光度法测定番泻叶中番泻苷 B的含量，其测定操作复杂且所测成分易见光分解，故本文中采用芦荟大黄素和大黄酸作为番泻叶的指标成分进行 HPLC法测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津 LC-20AT高效液相色谱仪;SPDM20A检测器;SHIMADZU LC solution工作站。

1.2 试药 芦荟大黄素(0795-200806)，大黄酸(110757-200206)均由中国药品生物制品检定所提供;通便宁片及相关阴性对照药由某药厂提供;甲醇为色谱纯;水为超纯水，其他均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:岛津 shim pack VP-DOS C18(150mm×4.6mm，5μm);流动相:甲醇 -0.2%磷酸溶液(70:30);检测波长为 254nm;流速为 1.0mL/min;柱温:30°C。

2.2 对照品溶液的制备 取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 1mL含 30μg芦荟大黄素和 100μg大黄酸的混合溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备 取本品 10片，称定重量，研细，取 1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇 25mL，称定重量，超声处理 30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液 15mL，置锥形瓶中，水浴蒸干，残渣加 8%盐酸溶液 15mL，水浴加热回流30min，放冷，加二氯甲烷 20mL，继续加热回流 1h，立即冷却，转移置分液漏斗中，用二氯甲烷少量多次的洗涤容器，溶液并入分液漏斗中，分取下层溶液，酸水层再用二氯甲烷振摇提取 3次，每次 20mL，合并二氯甲烷提取液，80℃水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得 。

2.4 阴性对照溶液的制备 依照“2.3”项下的方法制备阴性对照溶液。试验结果表明阴性对照溶液无芦荟大黄素和大黄酸的吸收峰，故认为阴性无干扰。

2.5 线性关系考察 取芦荟大黄素、大黄酸对照品，用甲醇溶解稀释配成含芦荟大黄素 30.23μg/mL和大黄酸 117.4μg/mL的混合对照品溶液，分别进样 1μL、3μL、5μL、10μL、20μL、30μL。以进样量 (m)为横坐标(x)，峰面积积分为纵坐标(y)，绘制标准曲线，得线性方程:芦荟大黄素 y=4863.3x-11477，γ=1;大黄酸 y=4321.5x-37631，γ=1，结果表明在 30.23～906.9ng范围内芦荟大黄素线性关系良好，在 117.4～3522ng范围内大黄酸线性关系良好。

2.6 重复性试验 取同一批通便宁片样品 6份，每份约 1g，精密称定，研细，按“2.3”项下的制备方法制备供试品溶液并测定，结果芦荟大黄素平均含量为 0.202mg/片，RSD为 2.0%。大黄酸平均含量为 0.673mg/片，RSD为 1.1%，结果表明本方法重复性良好。

表1 芦荟大黄素回收率试验结果

表2 大黄酸回收率试验结果

2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于 0、2、4、8、12、24、48h依法测定样品，结果芦荟大黄素含量的RSD为 1.0%，大黄酸含量的 RSD为 0.6%，表明供试品溶液在 48h以内稳定。

2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的(含芦荟大黄素为 0.202mg/片，大黄酸 0.673mg/片)粉末约0.5g，精密称定，共 6份，置锥形瓶中，精密加入混合对照品溶液 (含芦荟大黄素 8.48μg/mL，大黄酸28.12μg/mL)25mL，继续“2.3”项下制备供试品溶液 ，

按“2.1”项下的色谱条件测定。结果见表 1和表 2。2.9 3批样品测定结果 取收集到的通便宁片样品 3批，照“2.3”项下的制备方法制备供试品溶液，分别吸取对照品溶液与供试品溶液各 10μL，按上述色谱条件测定，计算，测定结果见表 3。

表3 样品测定结果

3 讨论

参考《中国药典》2005年版一部中“大黄”含量测定项下的提取方法并进行修改，由于三氯甲烷毒性较大，改为二氯甲烷作为提取溶剂，并对比了直接酸水解提取与先酸水解再提取的差异，结果表明先酸水解再提取所得含量明显高于直接酸水解提取的含量，故作为本文选择的提取方法。曾对 4%盐酸溶液、8%盐酸溶液、16%盐酸溶液进行考察，结果表明当盐酸溶液浓度为 8%时，其提取的芦荟大黄素和大黄酸含量最高，故选择 8%的盐酸溶液进行酸水解。考察不同酸水解时间对芦荟大黄素和大黄酸测定结果的影响。分别将水浴加热回流 30min、1h、2h，结果表明，酸水解 30min就可以水解完全，因此选择酸水解时间为 30min。