高效液相色谱法测定健脾化湿颗粒中芍药苷含量

梁 文，潘海峰，张晓峰

（承德医学院中药研究所，河北承德 067000）

健脾化湿颗粒由黄芪、白芍、防风、甘草等10味中药组成，主要用于治疗脾虚型肠易激综合征。黄芪为健脾化湿颗粒的君药，白芍为佐药之一。白芍为中国药典2005版一部收载品种，具有平肝止痛、养血调经、敛阴止汗的功效，用于柔肝止痛。本实验采用高效液相色谱法，建立健脾化湿颗粒中白芍的芍药苷含量测定方法，作为健脾化湿颗粒的质量控制指标之一。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC-10ATVP高效液相色谱仪，CLASS-VP工作站（日本岛津）；KQ-100E型超声波清洗器。

1.2 试药 健脾化湿颗粒（承德医学院中药研究所提供，批号：20090327，20090328，20090329）；芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110736-200423）；高效液相用甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯；阴性对照品，自制。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为Discovery C18柱（4.6mm×250mm×5μm）；流动相为甲醇：0.1%甲酸（23:77）；柱温25℃；流速0.8ml/min；检测波长230nm；进样量10μ l。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每ml含0.675mg的溶液，作为对照品溶液。

2.3 标准曲线及线性范围 分别精密吸取对照品溶液2μl、4μl、6μl、8μl、10μl注入液相色谱仪中测定，测得峰面积，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标做标准曲线，线性范围为1.35-6.75μg，回归方程为Y=601529X-57053，r=0.9998，结果表明芍药苷在1.35-6.75μg范围内线性关系良好。

2.4 供试品溶液的制备 精密称定健脾化湿颗粒2g，研细，置于锥形瓶中，加入适量水溶解，然后加入正丁醇萃取2次，每次20ml，合并并减压回收正丁醇液；残渣加适量的乙酸乙酯溶解，过滤，水浴将乙酸乙酯液挥干，残渣加适量的甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，以微孔滤膜（0.45μm）滤过，作为供试品溶液。

2.5 阴性实验 按处方比例，制得缺白芍制剂，按供试品项下方法制备阴性样品并测定，证明阴性无干扰。2.6 精密度实验 取芍药苷对照品溶液，重复进样5次，记录芍药苷的峰面积。结果RSD为0.97%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性实验 取供试品溶液（批号20090327），每隔2h进样测定1次，共进样5次，测得芍药苷峰面积。结果RSD为0.81%，表明样品溶液在10h内稳定。

2.8 重复性实验 取样品（批号20090327）5份，按2.4方法制备项供试品溶液，测定，芍药苷含量分别为1.9621、1.9296、1.9844、2.0059、1.9573（mg/g），RSD=1.81%，表明实验重复性良好。

2.9 加样回收率实验 取样品（批号20090327）6份，分别加入芍药苷对照品适量，按2.4方法制备供试品溶液并测定，结果见表1。

表1 芍药苷加样回收率实验结果

2.10 样品测定 分别取3批样品，按2.4方法制备供试品溶液，分别进样，检测，结果见表2。

表2 不同批次样品中芍药苷的含量测定结果（n=3）

3 讨论

本文首次采用高效液相色谱法对健脾化湿颗粒白芍中的芍药苷含量进行测定。2005年版《中国药典》用稀乙醇超声提取测定芍药苷的含量[1]；但健脾化湿颗粒是由10味中药组成的复方制剂，采用此方法制备样品，干扰较大。因此，本实验对提取溶剂进行了筛选，先后采用了乙醇、甲醇、正丁醇、乙酸乙酯等对样品进行处理，发现乙酸乙酯可使健脾化湿颗粒复方中的芍药苷获得最佳分离。

文献报道[2-3]，高效液相色谱法测定芍药苷含量时所用流动相有乙腈：水（15:85）、乙腈：0.1%磷酸（15:85）、甲醇：水（30:70）、甲醇：水（25:75）等。本实验发现，以甲醇：0.1%甲酸水溶液（23:77）作为流动相分离效果最佳，保留时间适中。

综上所述，本实验通过对不同提取方法和不同流动相的选择，建立了测定健脾化湿颗粒中芍药苷含量的方法。2005版药典I部[1]中规定白芍药材中芍药苷的含量不得少于1.6%，由此推算得知健脾化湿颗粒中芍药苷的含量应不得少于1.143mg/g。本研究结果表明，所检测的3批样品含量均合格。本研究建立的测定健脾化湿颗粒中芍药苷含量的方法简便可靠，分离度好，精密度高，可以作为该制剂中白芍的质量控制。

[1]国家药典委员会.中国药典I部[S].北京：化学工业出版社，2005.68-69.

[2]吴艳丽，孙海涛，史学惠，等.HPLC测定荡涤灵颗粒中芍药苷的含量[J].中国现代中药，2006，8（10）：16-18.

[3]张家富，孟楣，邢安之.HPLC法测定白芍不同饮片中芍药苷的含量[J].安徽医药，2005，9（8）:588-589.