HPLC法测定盐酸小檗碱β-环糊精包合物中盐酸小檗碱的含量

王汝兴，朱炎杰，于海龙

（承德医学院，河北承德 067000）

黄柏为常用中药，性寒、味苦，具有清热燥湿、解毒疗疮、退虚热之功效，用于湿热痢疾、黄疸、带下、热淋、盗汗、遗精等症状[1]。黄柏中含有小檗碱、黄柏碱等多种生物碱及内酯、甾醇等成分，其中盐酸小檗碱为主要有效成分[2，3]。但由于盐酸小檗碱在常温下的溶解度比较低，影响了临床疗效。本研究采用饱和技术制备了盐酸小檗碱β-环糊精包合物，以增强其在体内的溶解度并最终提高其生物利用度。同时本研究建立的分析方法可以快速、准确的测定β-环糊精包合物中盐酸小檗碱的含量。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪，日本分光公司；SpherisorbC18柱（4.6mm×25mm，5μm）。盐酸小檗碱标准品，中国药品生物制品鉴定所；黄柏，承德市药材公司；β-环糊精，中国医药集团上海化学试剂公司。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 SpherisorbC18柱（4.6mm×25mm，5μ m）；流动相：水-乙腈 （69：31），用0.3%三乙胺、磷酸调至pH为3.0；检测波长：350nm；柱温：30℃；流速：1ml/min，进样量10μl。

2.2 盐酸小檗碱的提取及精制[4]黄柏粗粉（20-40目）加石灰乳搅拌均匀，放入渗滤桶内以石灰水浸泡6h，过滤，滤液加NaCl，搅拌，静置12h，过滤。沉淀以热水溶解，趁热过滤，以5%盐酸调pH为2.0，静置12h，过滤。沉淀以水洗至中性，加热水溶解，趁热过滤，滤液于水浴加热至澄清，加浓盐酸调pH为2.0，搅拌放冷，过滤。沉淀以水洗至中性，得到盐酸小檗碱结晶，80℃干燥。

2.3 盐酸小檗碱β-环糊精包合物的制备[5]取2g盐酸小檗碱，溶于10ml无水乙醇中。另取100gβ-环糊精溶于适量蒸馏水中，搅拌、加热使全部溶解，冷却。将盐酸小檗碱无水乙醇溶液缓慢滴加到盐酸小檗碱水溶液中，室温下搅拌10h，减压抽滤，以蒸馏水洗涤沉淀3次，真空干燥得棕色晶体，即为盐酸小檗碱β-环糊精包合物。

2.4 标准曲线的建立 精密称取盐酸小檗碱对照品1.5mg，置50ml容量瓶中，加甲醇至刻度。精密吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、4.0ml，分别置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。分别吸取上述溶液10μl进样，以进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为：Y=26269.6X-350.4，r=0.9999（n=6），RSD=1.02%，线性范围为1.5-12.0μg。

2.5 供试品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱β-环糊精包合物2.5g，置100ml容量瓶中，加适量蒸馏水溶解后，加蒸馏水至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，续滤液即为供试品溶液。

2.6 精密度试验 以盐酸小檗碱对照品溶液10μl进样，重复进样5次，测定盐酸小檗碱峰面积，计算RSD为1.02%。

2.7 重复性试验 称取同批制做的盐酸小檗碱β-环糊精包合物，按2.5的方法制备供试品溶液，重复测定5次，测定盐酸小檗碱的峰面积，RSD=1.77%（n=5）。

2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的盐酸小檗碱β-环糊精包合物，加入适量盐酸小檗碱对照品，按供试品溶液制做方法制备，按样品含量测定方法测定6次，计算回收率，结果见附表。

附表 加样回收率试验结果（n=6）

2.9 样品测定 分别称取三批制做的盐酸小檗碱β-环糊精包合物各1份，每份1.0g，按2.5的方法制备供试品溶液，测定盐酸小檗碱含量。三批样品盐酸小檗碱含量（%）：20080618为2.025，20080621为2.022，20080706为2.010。

3 讨论

以碱水提取黄柏中小檗碱的方法较好，原因是黄柏中除含有小檗碱外，还含有药根碱、木兰花碱、巴马汀、蝙蝠葛碱、黄柏碱等以及较大量的粘液质类杂质，在中性或酸性水溶液中易生成难于过滤的粘性溶液，会增加提取操作中的困难。而粘液质类杂质具有能被石灰水很好沉淀的性质，所以生产上多采用石灰乳浸取的方法，以排除粘液质的干扰，使之有利于过滤分离，提高浸取率。

盐酸小檗碱在230nm、265nm、350nm波长处均有强吸收，选用350nm作为测定波长可以有效避免其它组份干扰。流动相中加入三乙胺并调至3.0，可改善峰形，保证测定结果准确可靠。本文建立的HPLC法测定β-环糊精包合物中盐酸小檗碱含量的方法操作简便，测定结果准确可靠，可用于黄柏药材中盐酸小檗碱的含量测定。

[1]Ikeda Y,Kimura K,Hirayama F,et al.Controlled release of a water-solube drug,cap top ril,by a combination of hydrophilic and hydrophobic cyclodextrin derivatives[J].J Control Release,2000,66 （3）:271-280.

[2]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[M].上海：上海科学技术出版社，1999.3775-3776.

[3]刘寿山.中药研究文献摘要[M].北京：科学出版社，1963.608-614.

[4]杨云，冯卫生.中药化学成分提取分离手册[M].北京：中国中医药出版社，1998.300-302.

[5]赵榆林，杨波，杨明惠.盐酸小檗碱β-环糊精包合物的体外溶出度研究[J].云南化工，2003，30（2）：1-3.