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健脾化湿颗粒对IBS模型大鼠结肠NO和NOS的影响

2010-04-17王迎寒陈光晖刘玉玲张晓峰

承德医学院学报 2010年2期
关键词:灌胃脾虚低剂量

王迎寒,陈光晖,刘玉玲,张晓峰

(承德医学院中药研究所,河北承德 067000)

近年来,大量国内外研究资料证实一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)与许多疾病密切相关,因此推测NO、NOS可能与肠易激综合征(Irritable Bowel Syndrome,IBS)的发病也存在某种关系,可能是IBS发病机理之一。本实验采用应激腹泻IBS大鼠模型,探讨健脾化湿颗粒对大鼠结肠NOS、NO的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物分组与处理 清洁级雌性Wistar大鼠60只,体重180±20g,由河北医科大学实验动物中心提供(合格证号:603105)。随机分为正常组、模型组、得舒特组、健脾化湿颗粒低剂量组、健脾化湿颗粒中剂量组和健脾化湿颗粒高剂量组,每组10只大鼠。模型组、得舒特组、健脾化湿颗粒低剂量组、健脾化湿颗粒中剂量组和健脾化湿颗粒高剂量组大鼠均建立脾虚型IBS大鼠模型,待模型成功建立后,得舒特组大鼠灌胃给予得舒特(0.03g/kg),健脾化湿颗粒低剂量组、健脾化湿颗粒中剂量组和健脾化湿颗粒高剂量组分别灌胃给予不同剂量的健脾化湿颗粒(2.5g/kg、5g/kg、10g/kg),模型组大鼠灌胃给予同等剂量的动物饮用水,各组大鼠灌胃给药时间均为2周。

1.2 药物与试剂 健脾化湿颗粒,由炙黄芪、茯苓、砂仁、益智仁、炒白芍等10味中药按比例采用现代制剂工艺制成;得舒特,法国苏威特制药公司(批号:0021)。总蛋白试剂盒,南京建成生物工程研究所(批号:20060628);NO检测试剂盒,南京建成生物工程研究所(批号:20060628);NOS分型检测试剂盒,南京建成生物工程研究所(批号:20060628)。

1.3 IBS动物模型的建立 制备番泻叶煎剂,浓缩制成生药含量为0.6g/ml,冰箱保存,使用时水浴加温至25℃。按文献方法建立脾虚型IBS模型[1]:实验前10h大鼠禁食,自由饮水。按10ml/kg剂量灌服番泻叶,每日一次,灌服后即用粗制棉绳束缚大鼠后肢2h,使之行动不便、烦躁不安,造成一定的应激刺激。灌服番泻叶持续2周,以大鼠稀便级判断模型是否成功;2周后待模型成功建立,继续灌胃给予大鼠番泻叶煎剂,继续持续2周。正常组大鼠予以动物饮用水灌胃。

1.4 观察指标

1.4.1 大鼠稀便级[2]:稀便级表示稀便的程度,以稀便污染滤纸形成的污迹大小定级,分为 0、1、2、3、4、5、6、7共8个等级,统计时逐个统计每堆稀便的级数,然后将所有级数相加除以稀便的数目即为稀便级。分别于治疗前1d(造模成功日)和治疗第14d(治疗结束日)统计各组大鼠的稀便级。

1.4.2 结肠NOS、NO含量的测定[3]:处死大鼠,打开腹腔,距肛门2cm以上取结肠,迅速称重,加入生理盐水制成10%的组织匀浆,3000r/min离心10min,取上清液采用硝酸还原酶法测定NOS和NO的含量。

1.5 统计方法 采用SPSS 11.0统计软件处理数据,各组间差异的比较采用单因素方差分析。

2 结果

2.1 各组大鼠的稀便级 见表1。⑴药物治疗前1d,模型组、得舒特组、健脾化湿颗粒各剂量组大鼠稀便级比较无明显差异(P>0.05),均明显高于正常组(P<0.01)。⑵药物治疗第14d,健脾化湿颗粒中、高剂量组大鼠的稀便级明显低于模型组和得舒特组(P<0.01),中、高剂量组间比较无显著差异(P>0.05);健脾化湿颗粒低剂量组大鼠的稀便级与得舒特组比较无明显差异(P>0.05)。

表1 各组大鼠治疗前后的稀便级(±s)

表1 各组大鼠治疗前后的稀便级(±s)

与正常组比较:1)P<0.01;与模型组比较:2)P<0.01;与得舒特组比较:3)P<0.01

组别治疗前1d治疗第14d正常组0.1±0.3160.15±0.337模型组3.361±0.7151)4.537±0.332得舒特组3.395±0.6741)3.751±0.5172)低剂量组3.359±0.6751)3.552±0.5202)中剂量组3.379±0.6831)2.073±0.7052)3)高剂量组3.362±0.3431)1.829±0.5032)3)

2.2 各组大鼠结肠NOS含量 见表2。各组大鼠结肠cNOS含量比较无明显差异(P>0.05)。模型组大鼠iNOS含量明显低于正常组大鼠(P<0.01);各治疗组大鼠结肠iNOS含量明显高于模型组(P<0.01);健脾化湿颗粒中、高剂量组大鼠结肠iNOS含量明显高于得舒特组和健脾化湿颗粒低剂量组(P<0.05)。表明脾虚型IBS大鼠结肠iNOS含量明显减少,健脾化湿颗粒中、高剂量的效果优于得舒特和低剂量健脾化湿颗粒。2.3 各组大鼠结肠NO含量 见表2。模型组、得舒特组、健脾化湿颗粒低剂量组大鼠结肠NO含量明显低于正常组(P<0.01);健脾化湿颗粒中、高剂量组大鼠结肠NO含量明显高于模型组、得舒特组以及健脾化湿颗粒低剂量组(P<0.01)。表明脾虚型IBS大鼠结肠NO含量明显减少,健脾化湿颗粒中、高剂量可显著提高IBS大鼠结肠NO的含量。

表2 各组大鼠结肠NOS、NO含量 (n=6±s)

表2 各组大鼠结肠NOS、NO含量 (n=6±s)

与正常组比较:1)P<0.01;与模型组比较:2)P<0.01;与得舒特组、低剂量组比较:3)P<0.01

组别iNOS(U/ml)cNOS(U/ml)NO(μmol/L)正常组25.941±9.66616.643±7.42546.6.8±17.835模型组4.517±2.6121)14.224±5.32112.975±12.7981)得舒特组11.686±5.0032)13.257±5.95919.981±10.1191)低剂量组12.066±5.4672)16.076±3.57520.530±10.3911)中剂量组19.628±6.2492)3)13.584±8.18733.219±9.9472)3)高剂量组22.134±10.3072)3)14.624±9.19835.409±13.4792)3)

3 讨论

NO是一种重要的生物活性物质,实验证实,NO是非肾上腺素能非胆碱能(NANC)抑制性神经递质,可介导平滑肌松弛,在胃肠道蠕动反射中产生下行性抑制作用,对胃肠黏膜具有保护和损伤双重效应,也对胃肠运动和内脏感觉起重要调节作用[4-6]。大量基础实验证实,当NO含量减少时,胃肠运动加快;反之,胃肠运动减慢[7]。新近研究还表明,NO在外周、脊髓和中枢三个水平对内脏感觉的传导和感知有抑制作用[8]。NOS存在3种同功酶,其主要功能是催化L-精氨酸生成NO。其中,结构型一氧化氮合成酶(cNOS)呈基础性表达,合成的NO少且持续时间短,可松弛肠道平滑肌;非钙离子依赖的一氧化氮合成酶(iNOS)由细胞因子或内毒素诱导产生,合成的NO多,持续时间长。因此iNOS减少,可导致NO合成减少,引起肠运动加快、内脏感觉敏感性增加,从而出现IBS的一系列临床症状。

本研究发现,脾虚型IBS大鼠结肠iNOS含量明显减少,导致结肠NO含量下降,NO含量减少直接导致肠运动加快,从而出现腹痛、腹泻等一系列症状,表明NOS、NO参与了IBS的发病过程;本研究中,健脾化湿颗粒中、高剂量可明显改善IBS模型大鼠的稀便级、提高IBS大鼠结肠NOS和NO含量,表明健脾化湿颗粒中、高剂量通过提高结肠NOS和NO含量,具有良好的治疗脾虚型IBS的作用;并且,作用效果优于健脾化湿颗粒低剂量和得舒特。

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