HPLC法测定补脑丸中阿魏酸的含量

张 红 唐志书 王海峰 陕西中医学院(咸阳 712046)

补脑丸为部颁标准收载品种,主要由当归、胆南星、枸杞子等十几味中药组成,其中当归为方中君药,当归中主要含多种有机酸类化合物以及挥发油等。本试验参考有关文献,并经试验摸索,建立高效液相色谱法测定本品中阿魏酸的含量,该方法分离效果较好,操作简便,结果准确。

1 仪器与试药 岛津 LC-2010A型高效液相色谱仪 ,UV-VIS紫外-可见检测器,阿魏酸对照品购自中国药品生物制品检定所(供含量测定用,批号:0773-9809);甲醇为色谱纯试剂,水为重蒸水,其它试剂均为分析纯。

2 色谱条件 色谱柱 Shim-pack VP-ODS柱(250mm× 4.6mm,0.45 μ m),甲醇:1% 醋酸 (20:80)为流动相;检测波长为 320nm;流速 1mL/min;柱温30℃。在选定色谱条件下,测得供试品中阿魏酸峰理论塔板数均大于 3000,与相邻峰的分离度大于 1.5。

3 方法与结果

3.1 供试品溶液的制备 取本品 50丸,除糖衣,研碎,取 5g精密称定,置 50mL具塞锥形瓶中,精密加 50%甲醇 25mL,称定重量,超声处理 40min,放冷后,再称定重量,用 50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取适当的续滤液离心 25min,转速为 3000转 /min。取离心液 ,微孔滤膜(0.45 μ m)滤过,取续滤液,即得。

3.2 空白试验 取对照品溶液、供试品溶液及空白对照溶液各 10 μL,依法测定,结果表明,空白样品中无干扰。

3.3 线性范围的考察 精密称取阿魏酸对照品适量,用流动相配成浓度为 1.2mg/mL的溶液,然后用流动相分别稀 释成 12 μ g/mL、 10 μ g/mL、 8 μ g/mL、6 μ g/mL、4 μ g/mL的系列对照品溶液 ,进样 10 μL记录色谱图,测定峰面积,以所得的峰面积为横坐标,以进样量为纵坐标,在浓度为 40～ 120ng范围内呈良好的线性关系。回归方程 C=0.0046A+9.023,r=0.9999。

3.4 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液10 μL,重复进样 5次,依法测定,计算,阿魏酸峰面积RSD=1.30%。

3.5 重现性试验 分别精密称取同一批号样品5份,按供试品溶液的制备方法配制,依法测定,阿魏酸含量 RSD=1.58%。

3.6 稳定性试验 精密称取同一批号样品 4.9352g,按供试品溶液的制备方法配制,分别在放置 0,1,2,4,8h,精密吸取 10 μL,注入液相色谱仪,依法测定,阿魏酸峰面积 RSD=0.95%,试验结果表明,供试品溶液在 8h内稳定性良好。

3.7 加样回收率试验 取已知含量的样品(0.0404mg/g)的供试品共 6份,分别加入不同量的对照品溶液(0.1mg/mL)1.1mL、 1.1mL,0.9mL、0.9mL,1.3mL、1.3mL,依法测定,结果:阿魏酸回收率分别为:102.37,101.53,98.34,100.09,99.99和 99.27%,平均回收率为 100.26%,RSD为 1.29%.

3.8 样品测定 按拟定的含量测定方法,对三批样品中的阿魏酸依法测定,结果 3批样品阿魏酸含量分别为 6.13,6.06,6.24 μ g/丸。

4 讨 论 4.1本试验根据文献报道方法测定本品中阿魏酸的含量,但结果均不理想,后经反复试验,以甲醇∶1%醋酸(20∶80)为流动相;采用 ODS柱;检测波长为 320nm;流速 1ml/min;柱温 30℃。结果样品中阿魏酸峰获得良好的分离,峰形对称,重现性较好。

4.2 样品处理方法简单可行,阴性对照未见干扰,可用于控制补脑丸中阿魏酸的含量。

[1] 王 兰.柏子养心丸中阿魏酸的含量测定.陕西中医,2004,25(7)11:58.

[2] 蒋心惠.RP-HPLC测定普藏红胶囊中阿魏酸的含量.华西药学杂志,2001,16(4):374-375.