卵胞质内单精子显微注射术治疗梗阻性无精子症妊娠分娩 1例

陈少轻 徐 琨

(解放军第 255医院生殖医学中心 河北唐山 063000)

我院于 2009年 2月开展了卵胞质内单精子显微注射术(ICSI),采用该术治疗 1例梗阻性无精子症患者,获得临床妊娠并成功分娩,报告如下。

1 病历报告

患者,30岁,4次精液常规检查,精液量为 4.0m L,精子密度为0。精浆果糖:0.0g/L,染色体核型正常,Y染色体微缺失检查正常。生殖激素:FSH 2.5m IU/m L,LH 1.6m IU/m L,E 242.79pg/m L,T 6.86ng/mL。诊断为梗阻性无精子症,婚后 6年未育。拟行睾丸取精(TESE)卵胞质内单精子显微注射术(ICSI)。常规术前告知患者 TESE的风险,经患者夫妻知情同意后签署同意书。夫妻行术前常规检查,均正常。女方于前次月经周期排卵后第 6天给予达菲林 0.05mg/d,于月经第 4天给于国纳芬75IU/d及尿促性激素 75IU/d,共 8天,第 12天监测有 2个卵泡直径≥18mm,停止上述 3种药物,当日肌肉注射 HCG 10 000 IU,注射 35h后经阴道超声引导下取卵,共获卵 14枚。男方取较大侧睾丸,局麻后常规切开至睾丸白膜,避开白膜下血管,在睾丸中部切开白膜 0.5cm,取约 25mg睾丸组织,5mg送病理检查,余下的行 TESE。将睾丸组织放入 3mlHTF-HEPES培养液中,将其在培养皿底部的井字划痕上来回搓动,磨碎曲细精管,组织悬液离心 10m in后弃上清,加 0.2mlHTF-HEPES。获得的睾丸组织悬液作 10μL长滴 5个,盖以矿物油,200倍倒置显微镜下检查是否有精子。采用Nikon 2000倒置显微镜和 Eppendorf显微操作系统。显微固定针和注射针采用 Humagen HP-120-30和 MIC-35-30。显微注射前先准备一个Falcon1006培养皿,在皿中央加一个 10μL PVP微滴,再取备好的精子混悬液 5μL加在 PVP滴边缘形成交接面,在皿周围环绕PVP滴,用HTFHEPES培养液做 4个 5μL微滴,加矿物油覆盖。将卵子移入HTF-HEPES培养液滴中,1枚/滴。用显微注射针制动精子尾部,确认精子被制动后吸入精子。用显微固定针固定卵子,使第一极体位于 6/12点时钟方位,吸入精子的显微注射针从 3点时钟方位进入卵胞质内并回吸胞质,见凹陷的卵膜有回弹现象时,说明已刺入胞质内,即注射精子入胞质内。退出显微注射针,并检查卵子形态是否正常。将已注射后的卵子移入 HTF(含 10%SPS)培养液中,置 37℃、5%CO2培养箱中培养 24h后,将胚胎再放入 1026(含 10%SPS)培养液中至胚胎移植。显微注射后 17h观察受精情况,看到两个原核的为正常受精,3枚卵均受精,受精卵继续培养至 72h,挑选优质胚胎 2枚进行移植。胚胎移植 16d,尿检显示生化妊娠,36d后 B超见 1个孕囊显示临床妊娠,诊断为单胎妊娠,2009年 10月分娩一女婴,体质量2.6kg,发育正常,身体健康。

2 讨论

ICSI作为辅助生殖技术的一种手段,其结果是令人鼓舞的,但仍存在众多影响其成功的因素。①女方的年龄直接影响胚胎的质量。随着女方年龄的增长,卵巢功能下降,导致卵子质量老化,卵胞质成熟与核成熟不同步,卵胞膜弹性下降,老化易碎,尤其经 ICSI处理后,卵子受损严重,进而影响其继续发育,这样就增加了治疗难度,因此不育症应尽早发现、尽早治疗。②显微操作过程。尽量在短时间内操作完成,在抽吸胞质过程中,动作轻柔避免损伤细胞骨架,在注射精子时携带少量的 PVP或其它杂质,影响胚胎质量,或者是污染胚胎。③ICSI的危险性。ICSI技术本身毕竟是侵袭性操作,有可能将父亲携带的生殖方面的遗传缺陷传给后代,因此,应对这些患者进行遗传学筛查并提供遗传咨询,治疗前应常规检查染色体核型。