对乙肝标志物HBeAg、抗HBe双阳性结果的再分析

吴建华，谢 银

(江苏省如皋市博爱医院，江苏 如皋 226500)

ELISA检测乙肝病毒标志物是临床常规开展的方法，HBeAg常使用双抗体夹心一步法检测，以S/C0≥1.0为阳性。抗HBe使用竞争一步法检测，以抑制率＞50%即S/CO＜1(CO=1/2N)为阳性。理论上，由于HBeAg与抗HBe存在“血清转换”，即 HBeAg消失而抗 HBe产生，故HBeAg、抗 HBe双阳性应很少出现，但事实上这种双阳性并不鲜见。笔者通过对双阳性样本的复检发现造成双阳性的原因是多方面的，主要有灰区假阳性、HBeAg浓度过高、样本问题、干扰物质等，本文对此进行了探讨。

1 材料与方法

1.1 样本 本院2009年7月至2010年5月门诊、住院作乙肝标志物 HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb 检测时HBeAg、抗HBe双阳性的患者样本57例，其中HBeAg的吸光度A值位于灰区阳性(CO+15%)的样本4例，抗HBe的吸光度A值位于灰区阳性(CO-15%)的样本36例。灰区是指CO值上下一段阳性可疑的吸光度区间，通常为CO±15%。若有标本溶血、脂血、污染等则重新采集标本并及时检验。

1.2 仪器与试剂 检测试剂为上海科华公司生产的ELISA一步法 “两对半”检测试剂盒，HBeAg为双抗体夹心法，抗HBe为竞争一步法(HBeAg包被反应孔)。HBeAg、抗HBe免疫层析法(ICA)复检试剂为厦门先科英创公司生产。Bio Rad 680型酶标比色计，YT-Wash型洗板机。室内质控物由江苏省临床检验中心提供，浓度为HBeAg 2ncu/m l，抗HBe 4ncu/m l。类风湿因子使用Beckman-Coulter公司的Immage特种蛋白检测仪及配套试剂，检测原理为免疫散射比浊法。

1.3 方法 57例双阳性样本的HBeAg使用ICA及ELISA复检。为避免HBeAg浓度过高导致HOOK效应，HBeAg复检改用ELISA两步法检测，即样本加入孵育30min、洗板后，再加入酶标抗体孵育、洗板、显色，结果判断相同，以HBeAg的S/CO≥1为阳性。若ELISA与ICA检测结果不一致时，首先检查标本是否合格，再检测样本中的类风湿因子。为避免加样时差导致的不公平竞争对抗HBe检测结果的影响，ELISA测定抗HBe时，在样本加入后随即加入酶标抗体。

2 结果

57例抗HBe阳性样本经复检后转为阴性的样本共为45例，其中43例经ICA与ELISA复检后均为阴性(包括初检位于灰区阳性的36例样本)，有2例用ICA检测阴性而ELISA仍为阳性，疑为HBeAg浓度过高导致的抗HBe假阳性。4例HBeAg初检阳性的样本经ICA复检后均为阴性，但ELISA检测3例阴性(初检为灰区样本，其中1例溶血标本)，1例仍为阳性，检测该标本类风湿因子为256IU/L。复检后双阳性样本为8例。将复检结果模式重新组合后HBeAg+、抗HBe-为45例 (78.9%)，HBeAg-、 抗 HBe+的 4例 (7%)， 双阳性 8例(14%)。3种模式占调查期间HBsAg阳性样本的比例分别为45/2510(17.9‰)、4/2510(1.59‰)、8/2510(3.18‰)。 见表 1。

表1 57例HBeAg、抗HBe双阳性模式样本的复检结果

3 讨论

HBeAg是HBcAg合成时的可溶性蛋白，由前C基因编码加工后分泌到细胞外，一般仅见于HBsAg阳性血清，急性HBV感染时HBeAg的出现略晚于HBsAg，在病变极期后消失，若HBeAg持续阳性病变趋向慢性。在慢性HBV感染时HBeAg是重要的免疫耐受因子，大部分情况下其存在表示患者处于高感染低应答期。HBeAg消失而抗HBe产生称为血清转换(seroconversion)。每年约有10%的患者发生自发的血清转换。由于基因变异后即表达抗HBe而非HBeAg，故HBeAg、抗HBe双阳性应很少见，本文仅占HBsAg阳性样本的1.59‰，而绝大多数双阳性是由于各种原因导致的抗HBe假阳性。

有作者[1]在对双阳性结果分析后得到大部分双阳性结果是由于操作不规范和一步法影响因素所致。本文结果提示导致HBeAg、抗HBe双阳性模式的主要原因是ELISA检测结果的灰区假阳性，且第一位的是抗HBe的假阳性，本文占63.2%(36/57)。所谓灰区就是CO值上下一段阳性可疑区域，灰区吸光度范围为CO±(15～20%)或CO±2s(s为室内质控OCV的s)。由于ELISA检测时的影响因素众多且以CO值判断阴阳性，因而如试剂敏感性、标本因素、加样、孵育、洗板、比色等均可能导致检测结果尤其是灰区结果的误判[2-4]。通常实验室ELISA检测乙肝标志物室内质控的CV值均＞15%，对于灰区样本初检及复检结果的不一致是完全可能的，因而《医院检验科建设管理规范》要求对该阳性可疑区域的样本需重复试验或更换试剂后重测以确定其阴阳性[5]。考虑到“血清转换”时HBeAg、抗HBe双阳性的模式比较少见，因而笔者认为由于“加样时差”不公平竞争导致的抗HBe假阳性[6-7]可能性较小。同样在本文中4例HBeAg初检阳性的样本经复检后为阴性，其中3例为灰区样本(1例为初检为溶血标本)，1例为类风湿阳性。类风湿因子为变异的免疫球蛋白，其Fc受体可导致检测结果的假阳性。

本文有2例HBeAg浓度过高导致抗HBe检测结果的假阳性。原理是当HBeAg浓度过高时，样本中过剩的HBeAg与酶标抗体结合使固相HBeAb-HBeAg-HBeAb-HRP生成减少显色下降产生假阳性。

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