甲氨蝶呤血清样品的稳定性观察

邹德琴，魏筱华，郑雪莲

(南昌大学第一附属医院药剂科，江西南昌 330006)

大剂量甲氨蝶呤结合四氢叶酸钙解救目前已成为治疗儿童急性淋巴细胞白血病重要方案之一。应用该药时，常发生严重的毒副作用，以胃肠道反应多见，其余依次为发热、骨髓抑制、肝功能损害等[1]。由于甲氨蝶呤剂量血药浓度的个体差异大，因此有必要监测甲氨蝶呤用药后的血药浓度，以便更好地指导临床安全用药。甲氨蝶呤制剂要求密闭、避光保存[2]，甲氨蝶呤血标本应当避光保存[3]，没避光保存的甲氨蝶呤血清样品浓度是否准确，引起临床医生的关注。为此，我们对甲氨蝶呤血清样品在室温避光与不避光条件下的稳定性进行了初步观察，现将观察结果报告如下。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 全自动药物浓度仪TDXFLX(美国雅培公司)；高速离心机(美国雅培公司)；H-1微型振荡器(上海康禾光电仪器有限公司)。

1.2 试剂 甲氨蝶呤标准曲线盒(批号：58050Q100)、甲氨蝶呤试剂盒 (批号：60018Q100)、甲氨蝶呤质控盒 (批号：58644Q100)，均为美国雅培公司生产。

1.3 标本 取小儿急性淋巴细胞白血病患者外周血 (普通管)

2 方法与结果

2.1 定标 分别吸取甲氨蝶呤标准浓度(0.05、0.15、0.3、0.6和1.00μmol/L)，制作标准曲线，同时测定低、中、高质控。

2.2 样本测定 精确吸取被检血清150μl于样品杯中，置TDXFLX仪器内测定。

2.3 统计方法 双侧配对t检验，两样本均数的t检验，运用SPSS 10.0统计分析。

2.4 不同条件下样品的稳定性实验

2.4 .1室温避光保存 取甲氨蝶呤血清样品6份，每人取血3份，于取血后立即、室温避光保存1天、2天，分别用荧光偏振免疫法测定血清药物浓度，比较测定结果，见表1。

对保存1天和2天后测定的结果与保存前测定的结果进行双侧配对t检验，所得P值分别为0.186和0.629，P值均大于0.05，表明室温避光保存1天和2天后测定结果与保存前差异无显著性。

2.4 .2室温不避光保存 取甲氨蝶呤血清样品6份，每人取血3份，于取血后立即、室温不避光保存1天、2天，分别用荧光偏振免疫法测定血清药物浓度，比较测定结果，见表2。

对保存1天和2天后测定的结果与保存前测定的结果进行双侧配对t检验，所得P值分别为0.332和0.278，所得P值均大于0.05，表明室温避光保存1天和2天后测定结果与保存前差异无显著性。

表1 甲氨蝶呤血清样品在室温避光条件下浓度的变化(μmol/L)

表2 甲氨蝶呤血清样品在室温不避光条件下浓度的变化(μmol/L)

3 讨论

本实验中，依实验需要量采取分管采血后保存，避免了因单管采血，从中取样继续非真空存放，可能引起微生物污染等对结果造成影响。

本实验结果表明：血样在室温不避光条件下至少可保存2天。我院通常从临床采血到送达实验室需1～2小时，如送血过程无避光措施不会影响测定结果。临床医生不必担心血样未避光保存影响测定结果的准确性，日常检测时我们也可在保证结果准确的前提下灵活掌握测定时间，有利于工作安排。

荧光偏振免疫法测定甲氨蝶呤血清药物浓度是我院新开展的血药浓度监测项目，深入考察不同保存条件、保存时间对测定结果的影响，有助于保证测定结果的稳定可靠性和适当的灵活性。甲氨蝶呤用药方案的特点决定了甲氨蝶呤血药浓度的测定必须准确快速，因此，我们只考察了甲氨蝶呤在室温不避光条件下保存2天的稳定性，考察的保存条件和保存时间还不够多，考察的样本量也不够大，相关数据还有待不断积累补充。

[1]卢莉敏.大剂量甲氨蝶呤治疗急性淋巴细胞白血病毒副作用观察[J].中国小儿血液,2003,8(4):171～173.

[2]陈新谦,金有豫,汤 光.新编药物学[M].第16版,北京:人民卫生出版社,2007:733.

[3]李金恒.临床治疗药物监测的方法和应用[M].第1版,北京:人民卫生出版社,2003:130.