泉州市318例HIV抗体筛查阳性的确认结果分析

杨育红，陈杰毅，陈明春，刘建忠，吴幼玲

(福建省泉州市疾病预防控制中心，福建泉州 362000)

艾滋病是我国重点防治的重大传染病，艾滋病检测工作是艾滋病防治工作的基础，包括HIV抗体检测、HIV抗原检测、核酸检测、病毒载量测定、CD4细胞和CD8T淋巴细胞检测等等，其中血清学HIV抗体的检测是艾滋病检测中最常用的方法，它是诊断艾滋病感染者和艾滋病的主要指标和标准检测项目。因为HIV抗体是患者感染了HIV后最容易检出并且持续时间最长的免疫标志物，且抗体检测的方法多种，大多简单、经济便于广泛推广应用。我国《艾滋病检测技术规范》规定常规HIV抗体检测的程序分为初筛(筛查和复检)和确认试验。筛查及复检试剂常用的是酶联免疫试验(ELISA)和快速检测试剂，如明胶颗粒凝集试验(PA)、胶体金、胶体硒等，确认试验目前国内常用的是免疫印迹试验(WB)。本实验室自2008年开展HIV抗体确认工作以来，共对318例HIV抗体筛查阳性的标本进行WB确认，为了解筛查阳性标本与与确认结果之间的关系，对确认结果进行如下分析。

1 材料与方法

1.1 标本来源 2008年至2009年泉州市各筛查实验室送检的初筛阳性或可疑的标本及我室自愿咨询检测初筛为阳性或可疑标本，共318例。

1.2 方法与试剂 初筛实验试剂采用：珠海丽珠试剂有限公司生产的HIV1/2酶联免疫吸附实验(ELISA)双抗原夹心法和美国雅培生产的HIV1/2胶体硒试剂或厦门英科新创的胶体金诊断试剂。确认试验试剂为新加坡Genelabs公司生产的HIV-1/2免疫印迹试验(Western blot)试剂。所有检测试剂均在有效期内并严格按照各自说明书操作。仪器采用奥地利Anthos公司生产的2010型酶标仪，郑州安图生物的Anthos fluido型洗板机和MP生物医学亚太私人有限公司生产的Autoblot System 20全自动蛋白印迹仪。方法按 《全国艾滋病检测技术规范》(2004年)的要求，所有初筛阳性或可疑的标本先用ELISA和金标或硒标复检，复检均阴性按阴性报，均阳性或一阴一阳进一步用WB试剂确认。

2 结果

2.1 318份筛查阳性标本经WB确认后，227份确认为HIV-1抗体阳性 (71.4%)，48份确认为HIV-1抗体不确定 (15.1%)，43份确认为HIV-1抗体阴性(13.5%)。

2.2 在227份WB确认阳性标本中，ELISA和硒标或金标的结果均为阳性，其中ELISA的S/CO值＞11的占98.2%，S/CO值在6～11之间占1.8%，即确认阳性标本中ELISA的S/CO值均＞6，见表1。

2.3 在48份不确定标本中，45份ELISA阳性，占93.8%，S/CO值平均为 5.43，其中 S/CO值＞6占33.3%，结果见表1。48份标本中7份硒标或金标阳性，其中有5份ELISA和硒标或金标均阳性。

2.4 在43份阴性标本中，ELISA阳性35份，占81.4%，S/CO值平均为2.51，其中S/CO值＞6仅 2例，88.4%S/CO值＜4，见表1。43份中有8份硒标或金标阳性，无ELISA和硒标或金标均阳性的标本。

表1 ELISA结果S/CO值与WB确认结果的关系

2.5 在 WB确认阳性标本的条带中，gp160、gp120、p66出现的百分率最高100%，其次是gp41、p31、p24， 为99.6%，p51为 97.8%， p17为 84.1%，p55最少50.7%。在不确定标本中，p24出现的几率最高，为85.4%，其次是gp160(58.3%)，与文献报道的一致[1]。阴性标本未出现任何条带。结果见表2。

3 讨论

表2 阳性和不确定WB试验反应条带

随着艾滋病检测技术的发展，HIV筛查试剂的敏感性和特异性也在不断提高，目前ELISA多使用的是第三代HIV诊断试剂，其敏感性和特异性已接近国际水平，但仍然会有假阳性、假阴性和抗体不确定的结果等情况出现。分析比较ELISA与WB确认试验结果，可见：确认阳性标本中的S/CO值较大，均大于6，而确认阴性和不确定的标本中S/CO值相对较低，由此可见高S/CO值预示HIV抗体阳性的可能性较大，而S/CO值较低时HIV抗体阴性及不确定的可能性较大,这与国内的一些报道是一致的[2～3]。但也有部分(18份，占5.7%)S/CO值大于6的强阳性标本,确认结果为阴性和不确定，分析其原因，可能①酶免试剂盒问题，如原料和工艺问题，②标本问题，可能由于一些传染病病原体与HIV某些抗原决定簇有交叉反应[4]③一些标本存在溶血、脂血、微生物污染等现象，增大了HIV抗体假阳性率。

《全国艾滋病检测技术规范》规定，复检要用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的试剂重复检测。我们用ELISA和快速诊断试剂复检，结果为双阳性的标本，确认试验阳性符合率较高，达到97.8%(227/232)，其余2.2%确认结果为不确定，阴性结果未出现双阳性标本，反映出ELISA试验加快速试验是较好的初筛复检手段。

有文献报道WB方法经常出现可疑杂带[5]，但往往是假可疑真阴性。Tebourski F等采用PCR技术证明，WB方法所检出的可疑标本应该报为阴性[6]。Jackson JB等通过长期跟踪随访WB方法所检出的可疑标本，未能发现其变为阳性[7]。本实验室48份确认结果为不确定的标本中，出现的条带多为p24和gp160，条带多比较细，颜色较浅或位置不确定，48份标本中有10份3个月后进行了复检，结果可疑条带依然存在，并未衍生出多样条带，按《全国艾滋病检测技术规范》判定为HIV阴性。由于318份标本中不确定占了48份(15.1%)，大量可疑标本的存在首先给检验人员带来了判断困难，其次，筛查阳性确认实验可疑的检测结果，使艾滋病流行病学调查随访和疫情管理变得复杂，也给被检者带来了严重的心理负担，再者由于复检也增加了检测成本。因此①期待WB确认试剂的质量有进一步的完善或有更有效、实用的HIV确认实验方法尽快出现，②通过辅助检测帮助判断，如核酸检测，该法直接检测HIV-1的核酸而非抗体，可以很好地解决抗体检测的假阳性，③修改现行的WB试验阳性结果判断标准。

鉴于目前HIV感染人数的不断增加，以及随着HIV传播的加速和对HIV认识的提高，对医院患者、高危人群、HIV感染者以及艾滋病病人的检查率也越来越高。面对如此大量的筛查以及检测工作，必须有过硬的技术力量，完善的实验室管理制度和质量控制以及高敏感性和高特异性的检测试剂作保障。因此，要不断提高整体检测能力，优先选择经国家参比实验室评估的、质量优秀的试剂盒，进行标准化操作，保证检测结果准确全面无误，为艾滋病防治工作提供准确科学的依据。

[1]黑发欣,张启云,孙伟东,等.HIV抗体筛查实验阳性确认实验可疑和阴性标本的对比分析 [J].中国性病艾滋病防治.2006,12(2):4～6.

[2]鲍作义,李敬云,米献淼,等.我国现行HIV检测策略和方法的应用评价[J].中国性病艾滋病防治,2001,7(5):304～305.

[3]李 宏,王 哲,马丽萍,等.HIV抗体初筛与确认(WB)测试结果对比分析[J].中国卫生检验杂志,2003,13(6):752～753.

[4]李敬云.艾滋病的病原学诊断[M].北京:军事医学科学院出版,1999:28.

[5]Srivastava BI,Gonzales C,Loftus R,et al.Examination of HTLV-ⅠELISA-positive leukemia/lymphoma patients by western blottinggave mostly negative or indeterminate reaction[J].AIDS Res HumRetroviruses,1990,6(5):617～1627.

[6]Tebourski F,Slim A,Elgaaied A.The significance of combining WorldHealth Organization and Center for Disease Control criteria to resolveindeterminate human immunodeficiency virus type-1Western blot re-sults[J].Diagn Microbiol Infect Dis,2004,48(1):59～61.

[7]Jackson JB,Hanson MR,Johnson GM,et al.Long-term follow-up of blood donors with in determinate human immunodeficiency virus type 1 results on Western blot[J].Transfusion,1995,35(2):98～102.