玉米须提取物对胆汁淤积性肝病的改善作用研究

张百明，赵致臻（甘肃张掖市人民医院药剂科，张掖市734000）

玉米须为禾本科玉蜀黍植物玉米Zea maysL.的干燥花柱和柱头[1]，味甜，性微温，源于《滇南本草》，具有平肝、利胆、利尿、泄热之功效，可用于高血压、肾炎、胆结石、糖尿病等疾病的治疗[2]。目前，玉米须在胆汁淤积性肝病方面的研究情况未见报道。本研究复制胆管结扎致大鼠急性胆汁淤积性肝损伤模型和异硫氰酸-α-萘酯（ANIT）诱导大鼠胆汁淤积性肝病模型，探讨玉米须对胆汁淤积性肝病的影响，为临床玉米须应用于胆汁淤积性肝病的治疗提供理论依据。

1 材料

1.1 仪器

Spectra Max M5型全功能微孔板检测仪（美国Molecular Devices公司）；电热恒温培养箱（上海精宏实验设备有限公司）；JA1003A型电子天平（上海精天电子仪器公司）。

1.2 试药

熊去氧胆酸胶囊（德国Dr.falk Pharma GmbH公司，批号:09E11710L，规格:每片250 mg）；血清总胆汁酸（TBA）测定试剂盒（德国Human公司，批号:H302B）；ANIT、乌来糖、总胆红素（TBIL）试剂盒（批号:20090821）、直接胆红素（DBIL）试剂盒（批号:20090702）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）试剂盒（批号:20090611）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）试剂盒（批号:20090602）由北京北化康泰临床试剂有限公司提供；戊巴比妥钠（北京化学试剂有限公司，批号:060102）；注射用青霉素钠（华北制药股份有限公司，批号:080911）。

1.3 动物

SD大鼠110只，体质量180～250 g，♀♂兼半，由四川省医学科学院实验动物研究所提供（动物合格证号:SCXK（川）2008-24）。

2 方法与结果

2.1 玉米须提取物的制备

4 kg生药材以5倍蒸馏水浸泡，大火煮沸，改小火煎煮2 h，多层滤纸抽滤，浓缩体积至生药量质量的一半，冷却后加入90%乙醇，4℃静置24 h，收集上清浓缩至620 g提取物。

2.2 玉米须提取物对ANIT诱导胆汁淤积性肝病模型大鼠的影响

取SD大鼠60只，♀♂兼半，随机均分为空白（蒸馏水）、模型（蒸馏水）、熊去氧胆酸（0.07 g·kg-1）及玉米须提取物高、低剂量（6.2、3.1 g·kg-1）组。ig给药，连续给药5 d；同时ig3%的ANIT香油溶液，剂量为150 mg·kg-1，空白组ig等体积香油溶液，连续5 d。第5天大鼠禁食16 h后，每组取6只给药1 h后以乌来糖1 g·kg-1ip麻醉，仰位固定，打开腹腔，在十二指肠降部肠系膜中找到胆管，做胆汁分流术，收集3 h胆汁量并计算出3 h内胆汁流速。每组余下6只股动脉采血，37℃保温30 min，3 000 r·min-1离心10 min分离血清，测定血清生化指标中TBA、TBIL、DBIL、ALT、AST含量。玉米须提取物对ANIT诱导胆汁淤积性肝病模型大鼠胆汁流量、流速的影响见表1；玉米须提取物对ANIT诱导胆汁淤积性肝病模型大鼠血清TBIL、DBIL、ALT、AST、TBA的影响见表2。

表1 玉米须提取物对ANIT诱导胆汁淤积性肝病模型大鼠胆汁流量、流速的影响（±s，n＝6）Tab 1 Effect of Z.mays extract on the flow and speed of bile in ANIT-induced cholestatic liver rats（±s，n＝6）

表1 玉米须提取物对ANIT诱导胆汁淤积性肝病模型大鼠胆汁流量、流速的影响（±s，n＝6）Tab 1 Effect of Z.mays extract on the flow and speed of bile in ANIT-induced cholestatic liver rats（±s，n＝6）

与空白组比较:＊P＜0.05；与模型组比较:#P＜0.05，##P＜0.01 Vs.blank group:＊P＜0.05；vs.model group:#P＜0.05，##P＜0.01

组别空白组模型组熊去氧胆酸组玉米须提取物高剂量组玉米须提取物低剂量组胆汁流速/mL·h-1 0.73±0.061 0.47±0.045＊0.66±0.023##0.66±0.091##0.59±0.060#剂量/g·kg-1- -0.07 6.2 3.1胆汁流量/mL 2.19±0.16 1.41±0.15＊2.00±0.076##1.97±0.26##1.77±0.21#

由表1可知，高、低剂量玉米须提取物能显著增加模型大鼠的胆汁流量与流速（P＜0.01或P＜0.05），具有促进胆汁分泌与排泄作用，且存在剂量依赖性。

由表2可知，玉米须提取物对大鼠ANIT诱导胆汁淤积性肝病有一定的改善作用，且存在剂量依赖性。当剂量为6.2 g·kg-1时对模型大鼠ANIT诱导胆汁淤积性肝病血清DBIL、ALT、TBA有降低作用（P＜0.01或P＜0.05）；当剂量为3.1 g·kg-1时对模型大鼠血清DBIL和TBA均有降低作用（P＜0.05）。

2.3 玉米须提取物对胆管结扎致急性胆汁淤积性肝损伤模型大鼠的影响

取SD大鼠50只，♀♂兼半，随机均分为假手术（蒸馏水）、模型（蒸馏水）、熊去氧胆酸（0.07 g·kg-1）及玉米须提取物高、低剂量（6.2、3.1 g·kg-1）组。按体质量45 mg·kg-1ip戊巴比妥钠，麻醉后以碘伏溶液腹部消毒，酒精脱碘后沿腹正中线切开，暴露胆总管，双线结扎胆总管，中间剪断，关腹。假手术组分离胆管后不做结扎，每只按50 IU·kg-1注射青霉素钠以防感染。复制模型前当天给药，连续给药5 d。第5天大鼠禁食16 h后股动脉采血，37 ℃保温30 min，3 000 r·min-1离心10 min分离血清，测定血清生化指标中TBA、TBIL、DBIL、ALT、AST含量。玉米须提取物对胆管结扎致急性胆汁淤积性肝损伤模型大鼠血清TBIL、DBIL、ALT、AST、TBA的影响见表3。

表2 玉米须提取物对ANIT诱导胆汁淤积性肝病模型大鼠血清TBIL、DBIL、ALT、AST、TBA的影响（±s，n＝6）Tab 2 Effect of Z.mays extract on the content of TBIL，DBIL，ALT，AST and TBA in serum of ANIT-induced cholestatic liver rat（s±s，n＝6）

表2 玉米须提取物对ANIT诱导胆汁淤积性肝病模型大鼠血清TBIL、DBIL、ALT、AST、TBA的影响（±s，n＝6）Tab 2 Effect of Z.mays extract on the content of TBIL，DBIL，ALT，AST and TBA in serum of ANIT-induced cholestatic liver rat（s±s，n＝6）

与空白组比较:＊P＜0.05；与模型组比较:#P＜0.05，##P＜0.01 Vs.blank group:＊P＜0.05；vs.model group:#P＜0.05，##P＜0.01

组别空白组模型组熊去氧胆酸组玉米须提取物高剂量组玉米须提取物低剂量组TBA/μmol·L-1 7.76±4.08 31.90±5.31＊17.40±5.89##21.99±4.89#22.490±6.65#剂量/g·kg-1- -0.07 6.2 3.1 TBIL/μmol·L-1 1.52±0.41 11.42±3.23＊6.67±3.03##11.17±2.56 11.29±1.87 DBIL/μmol·L-1 0.62±0.47 5.76±0.45＊2.94±0.24##3.10±0.69##4.31±0.53#ALT/IU·L-1 69.70±6.05 135.87±29.36＊96.22±26.16#94.49±15.57#112.08±27.99 AST/IU·L-1 138.12±7.16 199.05±24.27＊163.50±22.11#189.97±16.32 197.20±17.38

表3 玉米须提取物对大鼠胆管结扎致急性胆汁淤积性肝损伤模型大鼠血清TBIL、DBIL、ALT、AST、TBA的影响（±s，n＝10）Tab 3 Effect of Z.mays stigma extract on the content of TBIL，DBIL，ALT，AST and TBA in serum of rats with acute cholestat ic liver injury induced by bile duct ligatio（n±s，n＝10）

表3 玉米须提取物对大鼠胆管结扎致急性胆汁淤积性肝损伤模型大鼠血清TBIL、DBIL、ALT、AST、TBA的影响（±s，n＝10）Tab 3 Effect of Z.mays stigma extract on the content of TBIL，DBIL，ALT，AST and TBA in serum of rats with acute cholestat ic liver injury induced by bile duct ligatio（n±s，n＝10）

与空白组比较:＊P＜0.05；与模型组比较:#P＜0.05 Vs.blank group:＊P＜0.05；vs.model group:#P＜0.05

组别假手术组模型组熊去氧胆酸组玉米须提取物高剂量组玉米须提取物低剂量组TBA/μmol·L-1 11.09±7.04 188.25±37.30＊142.25±23.64#176.16±21.40 180.41±31.47剂量/g·kg-1- -0.07 6.2 3.1 TBIL/μmol·L-1 1.61±1.10 93.91±21.12＊90.11±16.30 93.12±18.33 93.44±23.31 DBIL/μmol·L-1 0.80±0.42 47.58±9.01＊30.22±7.65#31.32±6.21#44.32±10.41 ALT/IU·L-1 55.63±10.00 119.01±15.23＊81.13±15.41#83.11±14.30#102.40±16.12 AST/IU·L-1 167.17±27.13 265.30±47.11＊210.10±30.54 221.19±27.39 260.05±38.11

由表3可知，玉米须提取物对急性胆管结扎致胆汁淤积性肝病有一定的改善作用且有剂量依赖性。当剂量为6.2 g·kg-1时能降低血清DBIL、ALT含量（P＜0.05）；当剂量为3.1 g·kg-1时对血清TBIL、DBIL、ALT、AST、TBA指标均无影响（P＞0.05）。

3 讨论

胆汁淤积性肝病属于中医“黄疸”范畴，主要由胆汁分泌或排泄障碍引起肝内和肝外胆汁淤积所致，常分为肝内胆汁淤积性肝病和肝外胆汁淤积性肝病，临床上常表现为血清TBIL、DBIL、ALT、AST、TBA指标明显升高。目前，针对肝内胆汁淤积性肝病的动物模型主要是以药物诱导性为主。ANIT是一种肝毒剂，可以诱导大鼠肝脏损伤，主要损伤胆管上皮细胞，引起毛细胆管和肝小叶间胆管周围产生炎症造成肝实质细胞点状坏死，使胆汁的分泌与排泄功能发生障碍，进而血清生化指标TBIL、DBIL、ALT、AST、TBA均有不同程度的升高。胆管结扎所致的大鼠急性胆汁淤积性肝损伤模型是模拟临床肝外胆管阻塞性胆汁淤积性肝病，被国内、外广泛采用。该模型研究表明胆管结扎后引起胆管内DBIL、TBA急速升高，引起细胞应激、脂质过氧化物程度增加，能量代谢异常，进一步损伤肝细胞膜和（或）线粒体功能，导致肝细胞坏死和（或）凋亡[3]。

本研究采用ANIT诱导大鼠胆汁淤积性肝病实验动物模型和胆管结扎致大鼠急性胆汁淤积性肝损伤实验动物模型考察了玉米须提取物的治疗作用。结果发现，玉米须提取物对ANIT诱导大鼠肝内胆汁淤积性肝损伤改善作用较为明显，不仅能降低血清DBIL、ALT、TBA含量，而且能促进胆汁的排泌，但对肝外胆管结扎所致的胆汁淤积性肝损伤的改善作用相对较弱，仅能降低血清中DBIL、ALT，对TBA无影响，即对肝内胆汁淤积性肝病改善作用明显，对肝外胆管阻塞性胆汁淤积性肝病的改善作用较弱。笔者分析认为，玉米须提取物对肝内胆汁淤积性肝病改善作用与其增加胆汁的分泌和促进体内胆汁的排泄作用密切相关；而对于肝外胆管阻塞，虽然玉米须提取物能促进胆汁的体内排泄，减少DBIL、TBA带来的肝损伤，但由于胆汁流受阻，其利胆作用反而加剧胆管内DBIL、TBA的升高，又造成肝损伤，所以出现对肝外胆管阻塞性胆汁淤积性肝病改善作用较弱的情况。玉米须提取物对肝内、肝外胆汁淤积性肝病的的治疗作用及其机制有待于进一步研究证实。

[1]朱 旭，邱智东.玉米须的化学成分及药理作用研究[J].长春中医药大学学报，2009，25（2）:183.

[2]中华人民共和国卫生部药材标准委员会.中华人民共和国卫生部药材标准[S].北京:人民卫生出版社，1986:12．

[3]Perez MJ，Briz O.Bile-acid-induced cell injury and protection[J].World J Gastroenterol，2009，15（14）:167.