红果龙葵水提液与乙醇提取液的抑菌作用

古丽扎尔·阿布都克依木，阿不都拉·阿巴斯*

(新疆大学生命科学与技术学院，新疆 乌鲁木齐 830046)

红果龙葵水提液与乙醇提取液的抑菌作用

古丽扎尔·阿布都克依木，阿不都拉·阿巴斯*

(新疆大学生命科学与技术学院，新疆 乌鲁木齐 830046)

使用无菌蒸馏水和70%乙醇从红果龙葵果实中提取活性成分并探讨其抑菌作用。结果表明，提取物对微生物有明显的抑制作用。水提液的最低抑菌质量浓度分别为大肠杆菌2mg/mL、金黄色葡萄球菌1mg/mL、枯草杆菌0.5mg/mL、短小芽孢杆菌3mg/mL、产气芽孢杆菌0.5mg/mL；乙醇提取液的最低抑菌质量浓度分别为大肠杆菌2mg/mL、金黄色葡萄球菌2mg/mL、枯草杆菌1mg/mL、短小芽孢杆菌5mg/mL、产气芽孢杆菌1mg/mL。

红果龙葵；水提取物；乙醇提取物；抑菌作用

我国植物资源丰富，红果龙葵(Solanum alatum Moench.)俗名朱红星星、红葵，隶属于被子植物门双子叶、合瓣花亚纲、茄科、茄属，一年生草本植物，我国新疆、河北(栽培)、山西、甘肃、青海有分布，欧洲各国也有[1]。由于其分布地区广、应用范围多、营养丰富、经济价值高、开发潜力大、它是一种值得开发的重要野生植物资源。到目前为止，国内外对于红果龙葵研究比较少，关于水提取液和乙醇提取液抑菌作用比较实验尚未见报道。因此本实验采用水和乙醇从红果龙葵中提取有效的抗菌成分做抑菌实验，旨在为红果龙葵进一步开发利用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料、菌种与试剂

红果龙葵于2007年10月采自新疆大学农场，经阿不都拉·阿巴斯老师鉴定为红果龙葵(Solanum alatum Moench.)。红果龙葵果晾干、粉碎备用。

图1 红果龙葵果实Fig.1 Photograph of Solanum alatum Moench. fruits

供试菌种：大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草杆菌(Bacillus subtilis)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、产气芽孢杆菌(Enterobacter aerogenes)，下文中分别简称为E.c、S.a、B.s、B.p、E.a。以上菌种由新疆维吾尔自治区药检所药理实验室和新疆大学生命科学与技术学院微生物教研室提供。

牛肉膏蛋白胨培养基[2]：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、NaCl、NaOH、HCl、乙醇、无菌蒸馏水。

1.2 仪器与设备

RE-52A型旋转蒸发器、电子天平 北京赛多利斯天平有限公司； YXQ-SG46-2压力蒸汽灭菌器 上海博讯实业有限公司医疗设备厂； KK22EOOTI西门子冰箱 安徽博西制冷有限公司；光照培养箱 上海恒科技有限工司；PYX-DHS电热恒温培养箱 上海跃进医疗器械厂。

1.3 方法

1.3.1 红果龙葵水和乙醇提取液的制备流程

称取样品5g→加10倍样量的相应提取溶剂50mL→分别采用90℃热水提取3h和70%乙醇回流提取3h→分别过滤→滤渣分别加25mL相应溶剂同条件提取2.5h合并，旋转蒸发浓缩至黏着状→用水溶解并定容于10mL制成水悬浊液→分别获得0.5g/mL的水提液、乙醇提取液[3-4]。

1.3.2 供试菌的活化

将各供试菌种接种于牛肉膏蛋白胨培养基斜面上(25mL的试管斜面)，在37℃培养箱中培养18h后，获得活化的新菌种。

1.3.3 菌悬液的制备

分别用接种环挑取少许菌体置于装有9mL无菌生理盐水的试管中，振荡摇匀，10倍稀释法分别稀释制成含菌量为106～108CFU/mL的菌悬液[5]。

1.3.4 含菌平板的制备

配制灭菌好的培养基冷却至50～60℃，在无菌操作台内趁热倒入已灭菌好的培养皿中，每皿约15～20mL，待冷却。再吸取0.2mL菌悬液均匀涂抹到平板上，制成含菌平板。

1.3.5 滤纸片扩散法测定抑菌圈直径

将厚度1.3mm的优质定性滤纸用打孔机制成直径为6mm的小圆片，将滤纸圆片浸泡在准备好的各提取液中(浸泡约0.5～1h)使它充分吸收样品。将灭菌过的培养基制成平板，吸取0.2mL菌悬液均匀涂抹到平板上。用打孔器将滤纸打成6mm的纸片，高压灭菌。用无菌镊子将灭菌后的滤纸片放入红果龙葵水提液和乙醇提取液中，浸泡0.5～1h，风干后，用无菌镊子夹取滤纸片贴于已涂抹菌悬液的平板表面，并轻轻按压使充分接触，每皿等距离放3～4片，每个实验平行3次，并用无菌水作空白对照，在37℃培养20～24h后测定抑菌圈直径大小，取平均值[6]。

1.3.6 含不同浓度提取物培养基的制备

配制足够量的牛肉膏蛋白胨液体培养基，按每管准确量取10mL分装试管，121℃湿热灭菌，置于0～4℃冷藏备用。以提取备用液作为100%原液，加水稀释配成质量浓度为0.125、0.25、0.5、1、2、3、5mg/mL等系列的稀释液，准确量取该溶液0.2mL加入到盛有10mL液体培养基的试管中，配成含不同质量浓度的红果龙葵提取物的系列培养基[7-11]。

1.3.7 最低抑菌浓度(MIC)的测定

每一系列培养基接种一种菌种(0.2mL)，每个浓度做3个重复，另取一种已稀释的系列培养基不接种任何菌做空白对照，置适宜温度(36±1)℃培养24h，观察实验结果。以能抑制细菌生长的最低添加量为该提取物的MIC。因含提取液的培养液肉眼不宜辨明菌体的生长情况，可从各管取一环转接于固体平板上，经适宜条件培养后观察有无菌落生长。无菌生长的最低浓度即为提取物的MIC[12-13]。

1.3.8 最低杀菌浓度(MBC)的测定

将提取物浓度高于MIC(包括MIC)的各试管或培养皿继续培养24h，观察生长情况。以仍无菌生长的添加量为该提取液的MBC。为了更能确定MBC，将提取物的浓度高于最低抑菌浓度的各管中各吸取0.2mL涂布于合适的琼脂培养基平板上，置适宜条件下继续培养。平板上菌落数小于5个的最低样品浓度即为该样品的最低杀菌浓度。

2 结果与分析

2.1 红果龙葵水提液和乙醇提取液对各供试菌的影响

图2 红果龙葵果水提液和乙醇提取液对受试菌的抑菌效果Fig.2 Inhibition zone diameters of water and ethanol extracts from Solanum alatum Moench. fruits against five common bacteria

由图2可知，红果龙葵果水提液、乙醇提取液(质量浓度为0.5g/mL)对5种细菌均有抑制作用。红果龙葵果水提液和醇提液除了对短小芽孢杆菌的抗菌作用稍弱之外，对其余菌均具有比较强的抗菌作用。水提液对5种菌的抑菌敏感度比乙醇提取液抑菌敏感度更明显。乙醇提取液对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、产气芽孢杆菌抑菌敏感度差不多，对短小芽孢杆菌的抑菌敏感度较弱。

2.2 各提取物对供试菌的MIC值测定结果

表1、2显示了红果龙葵果实水提液和乙醇提取液对各受试细菌的抑菌效果，表明了最低抑菌浓度(MIC)

和最低杀菌浓度(MBC)值。水提液的最低抑菌质量浓度分别为大肠杆菌2mg/mL、金黄色葡萄球菌1mg/mL、枯草杆菌0.5mg/mL、短小芽孢杆菌3mg/mL、产气芽孢杆菌0.5mg/mL；乙醇提取液的最低抑菌质量浓度分别为大肠杆菌2mg/mL、金黄色葡萄球菌2mg/mL、枯草杆菌1mg/mL、短小芽孢杆菌5mg/mL、产气芽孢杆菌1mg/mL。将提取液质量浓度高于最低抑菌浓度(包括最低抑菌浓度)的各试管继续培养24h，观察，结果表明：红果龙葵果实水提取液和乙醇提取液对5种常见的细菌有最低抑菌浓度，除了红果龙葵果实乙醇提取液对短小芽孢杆菌没有最低杀菌浓度外，对其他菌均有杀菌作用浓度。

表1 红果龙葵果实水提液对受试细菌的最低抑菌质量浓度和最低杀菌质量浓度Table 1 Minimum inhibitory concentrations and minimum bactericidal concentrations of the water extract against five common bacteria

表2 红果龙葵果实乙醇提取液对受试细菌的最低抑菌质量浓度和最低杀菌质量浓度Table 2 Minimum inhibitory concentrations and minimum bactericidal concentrations of the ethanol extract against five common bacteria

3 讨 论

3.1 一般检测抑菌效果有两种方法：滤纸片法和打孔法。本实验采用了滤纸片法，因为打孔法的结果中很难测定抑菌圈直径。

3.2 一定质量浓度的红果龙葵果水提物和乙醇提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、短小芽孢杆菌、枯草杆菌和产气芽孢杆菌都显示出一定的抑制作用。红果龙葵果水提取液和乙醇提取液对受试菌的抑菌效果实验中，用无菌蒸馏水作为对照物放到含菌平板上测抑菌圈，所有对照物没有抑菌圈，不显示抑菌效果。

3.3 不同质量浓度的红果龙葵果水提液和乙醇提取液对受试细菌均有不同程度的抑制作用，可能是其抑菌机理不同，导致对不同菌的抑菌能力产生差异。

3.4 红果龙葵果水提液对受试细菌的抑制作用比乙醇提取液的抑制作用更敏感。这可能是水提液中的水溶性化合物发挥作用，将红果龙葵果实中有效抑菌物质提取出来。

3.5 从红果龙葵果水提液和乙醇提取液的MIC和MBC结果来看，乙醇提取液除了对短小芽孢杆菌无杀菌作用以外，对其他的菌种都有最低抑菌和最低杀菌浓度；水提液对5个菌种都有最低抑菌和最低杀菌浓度。实验证明红果龙葵(Solanum alatum Moench.)果实各提取液对食品常见污染微生物有抗性，在以后的工作中可以考虑对提取物进行分离并对起抑菌作用的物质进行分析与鉴定。红果龙葵具有食品天然防腐、医用等开发潜力，值得进一步研究与探讨。

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Antibacterial Activity of Water and Ethanol Extracts from Solanum alatum Moench. Fruits

Gulzar ABDUKEYUM，Abdulla ABB.A.S..*
(College of Life Science and Technology, Xinjiang University, Urumqi 830046, China)

To assess the antibacterial potency of Solanum alatum Moench. fruits, the water and ethanol extracts from Solanum alatum Moench. fruits were examined for their antibacterial activity against five common bacteria. It was found that both extracts had a notable inhibitory effect against the growth of all the bacteria tested. The minimum inhibitory concentrations of the water extract against Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Bacillus pumilus and Enterobacter aerogenes were 2, 1, 0.5, 3 mg/mL and 0.5 mg/mL, and those of the ethanol extract were 2, 2, 1, 5 mg/mL and 1 mg/mL, respectively.

Solanum alatum Moench.；water and ethanol extracts；antimicrobial activity

TS255.1

A

1002-6630(2010)17-0133-03

2010-03-01

古丽扎尔·阿布都克依木(1985—)，女，硕士研究生，研究方向为资源植物成分分析。E-mail：gulzargul@sina.com

*通信作者：阿不都拉·阿巴斯(1951—)，男，教授，研究方向为资源植物成分分析。E-mail：abs_abdl@163.com