寡克隆带检测在小儿中枢神经系统感染疾病的应用价值

肖持坚,李小敏,黎 敏,郭柳微,李颖莉

(梧州市工人医院,广西 梧州 543000)

在小儿常见的几种神经系统疾病中,如中枢系统炎性疾病[尤其是多发性硬化(MS)],检测脑脊液寡克隆带(OCBs)是其诊断的一项重要指标。国内外研究表明诊断 MS的 90%-95%患者其 CSF可以检测到 OCBs[1],而在其他一些神经系统炎性疾病,包括大脑的病毒感染、神经梅毒、狼疮性脑病等,脑脊液 OCBs的检测阳性率亦有 24%-50%,故其可能对这些疾病的诊断有帮助[1-4,10]。在病毒性脑炎症中,常常出现脑脊液蛋白质浓度的升高,其中部分是由于血脑屏障的受损,而另一部分是由于内源性合成增加,而后者,即内源性的合成增加,并伴有免疫球蛋白的异质性,可以在高分辨率的电泳过程中出现单克隆带,具有特征性。目前中枢神经系统感染疾病的发生机制不明,为此,本研究对 46例患者的 OCBs进行分析,报道如下:

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取 2005-2007年期间在我院儿科住院的总共 46例确诊为中枢神经系统感染性脑病的患儿,其中病毒性脑炎 33例,其他颅内感染 13例(结核性脑膜炎 5例,化脓性脑膜炎 5例,新型隐球菌脑膜炎 3例);男性 31例,女性 15例,年龄最大 13岁,最小 6个月,平均 4.5岁。

1.2 方法

1.2.1 基本方法 所有患儿入院后均做腰穿取 3 ml脑脊液,并同日抽外周血血清 2 ml,根据病情需要或脑脊液异常,则重复腰穿留置标本,所有标本都置于 -20℃保存待测。

1.2.2 脑脊液常规检测 所有脑脊液标本都检测并记录白细胞数目、细胞分类、蛋白定量、葡萄糖水平,做病原学筛查。

1.2.3 寡克隆带检测 采用琼脂糖凝胶免疫固定电泳(IFE)的方法对采集的脑脊液和血清标本予以检测,经琼脂糖凝胶电泳将蛋白质分离后,再采用免疫固定技术,抗 IgG酶标抗血清加入凝胶片上,利用高度特异抗体标记的酶,在固相酶免疫反应中进行显色后使样本呈现寡克隆区带,并对此寡克隆区带的免疫球蛋白的性质予以确定。对在脑脊液标本出现异常区带(OCBs)而血清标本无相应区带出现,或脑脊液和血清标本均出现异常区带,而脑脊液出现不同于血清≥2个以上的异常区带视为阳性。所有 CSF和血清的标本 OCBs检测都通过法国西比亚全自动电泳分析仪(HYDRASYS.SEBIA.PN1211)完成,并且由两个通过培训的实验室人员分别执行,以同样的阳性结果为准[5-6]。

1.2.4 记录 记录每个患者的临床表现、脑电活动和影像学异常发现,OCBs阳性患者出院后随访1-24个月。对病毒性脑炎组 OCBs阳性、非阳性病人的临床严重程度、脑脊液数据进行比较。

1.3 统计学方法 计数资料比较采用 x2检验,定量资料两样本均数比较应用 t检验。

2 结 果

46例患者中,CSF-OCBs阳性者有 10例,阳性率为 21.7%,其中病毒性脑炎组 7例,非病毒性脑炎组 3例。两组比较其 OCBs阳性率差异无统计学意义(P＞0.05)。见表 1。

表1 两组 OCBs阳性与阴性比较(例)

病毒性脑炎组 29人次脑电图描记异常,占87.8%,主要异常表现为弥漫或局部慢波发放,检查头颅 CT,异常率占 17%,头颅核磁共振检查 12人次,异常率 41%,OCBs阳性组均检查头颅核磁共振,异常 2例,均为局部脑实质炎症改变。病毒性脑炎组根据 OCBs阳性与否分两组,比较它们之间临床轻重程度,脑脊液细胞数、蛋白定量差异无统计学意义 ,见表 2。

10例 OCBs阳性病例中重复腰穿脑脊液持续阳性 2例,1例是腮腺炎和病毒性脑炎,1例是隐球菌脑膜炎,病程时间均 ＞4周,后者多次行腰穿涂片查隐球菌阳性。

9例 OCBs阳性患者经治疗好转,随访 24个月,无再次神经系统损伤的临床表现。另外 1例隐球菌脑膜炎多次腰穿脑脊液 OCBs持续阳性,出现多条异常区带,该患儿住院 10周,因经济困难自动出院,失去随访。

表2 病毒性脑炎组临床数据比较结果[例(%),x±s,n=33]

3 讨 论

检测脑脊液和血清寡克隆带广泛应用于神经系统炎症性疾病的临床诊断上,它证明神经中枢本身参与活跃的免疫应答。OCBs是一项灵敏的定性指标,其阳性存在表明中枢神经系统有其本身合成的免疫球蛋白。在国内外的临床研究中,OCBs阳性可出现在多发性硬化和中枢神经系统感染疾病,前者大多血清检测阴性而 CSF阳性,后者可有血清、脑脊液阳性,脑脊液阳性区带异于血清的表现形式,提示其 OCBs阳性区带可能与多发性硬化的意义不同[7-8]。

本研究应用琼脂糖凝胶免疫固定电泳方法检测中枢神经系统感染疾病 CSF-OCBs,其阳性率为21.7%,与国内、国外相关研究结果接近或偏低,考虑为由于本组研究的患儿在治疗上大多应用皮质激素,可能造成 OCBs阳性率偏低。病毒性脑炎组阳性率为 21.2%(7/33),与非病毒性组比较差异无统计学意义,提示 CSF-OCBs与感染病原无关,OCBs可作为脑脊液异质性免疫球蛋白出现的定性指标,但对病因诊断为非特异性指标。

病毒性脑炎组中根据寡克隆带阳性与否分组,比较其临床表现的轻重、脑脊液细胞计数、蛋白定量分析,其差异无统计学意义,随访的 OCBs阳性病儿临床无新的神经系统损伤症状和体征,显示在中枢神经系统感染疾病中,OCBs出现的机制不明,往往显示一过性,常见的一些神经系统疾病临床特征如脑脊液的白细胞数目、蛋白总量不能反映 OCBs的出现意义;一例腮腺炎和病毒性脑炎、一例隐球菌脑膜炎重复腰穿 OCBs持续阳性,后者多次涂片均找到隐球菌,OCB异常带显示多条阳性。2个病例病程均 ＞4周,支持“持续活动的感染、血脑屏障功能受损或病毒诱导颅内免疫紊乱可能与 OCBs阳性有关”的推测[9-11]。

小儿中枢神经系统感染可引起体液和颅内免疫紊乱,应用琼脂糖凝胶免疫固定电泳方法检测OCBs,敏感性可达 70%-85%,而检验要求和价格比等电聚焦加免疫印迹等技术更简单、省时和便宜,值得在普通儿科神经内科推广[6]。

CSF-OCBs检测阳性可反映颅内自身免疫球蛋白鞘内合成,不单单是应用于某个病人考虑脱髓鞘病变的诊断,如多发性硬化,它具有更多的临床意义。综合分析其在神经系统炎性疾病,如对小儿中枢神经系统感染疾病的诊断和发病机制甚至治疗上有重要的参考价值。

[1] BN Mc Lean,RWLuxton,EJThomoson.Astudy of immunoglobulin G in the cerebrospinal fluid of 1007 patients with suspected neurological disease using isoelectric focusing and the log IgG-index[J].A comparison and diagnostic applications Brain,1990,113∶1 269-1 289.

[2] 邱 伟,胡学强.脑脊液寡克隆区带检测在神经系统疾病诊断中的意义[J].新医学,2006,37(10)∶638-640.

[3] Reiber H.Cerebrospinal fluid-physiology.analysis and interpretation of protein patterns for diagnosis of neurological diseases[J].Mult Scler,1998,4∶99-107.

[4] Marcel M,Verbeek,Herman PM.Comparison of Methods for the Detection of Oligoclonal IgG Bands in cerebrospinal fluid and serum:Results of the Dutch Quality Control Survey[J].Clinical Chemistry,2002,48(9)∶1 578-1 580.

[5] Cavuoti D,Baskin L,Jialali.Detection of oligoclonal bands in cerebrospinal fluid by immunofixation electrophoresis[J].Am J Clin Pathol,1998,109∶585-588.

[6] Richard S,Miossec V,Moreau JF,et al.Detection of oligoclonal immunoglobulins in cerebrospinal fluid by an immunofixation-peroxidase method[J].Clin Chem,2002,48∶167-173.

[7] Bourahoui A,De Seze J,Grttierezc R,et al.CSF isoelectrofocusing in a large cohort of MS and other neurological diseases[J].Eru J Neurol,2004,11(8)∶525-529.

[8] Luisa M,Villar.Early Differential Diagnosis of Multiple Sclerosis U-sing a New Oligoclonal Band Test[J].Arch Neurol,2005,62∶574-577.

[9] SM Gregoire,V Van Pesch,S Goffette.Polymerase chain reaction analysis and oligoclonal antibody in the cerebrospinal fluid from 34 patients with varicella-zoster virus infection of the nervous system[J].J Neurol Neurosurg Psychiatry,2006,77∶938-942.

[10]BN McLean,D Miller,EJ Thompson.Oligoclonal banding of IgG in CSF,blood-brain barrier function,and MRI findings in patients with sarcoidosis,systemic lupus erythematosus and behcet's disease involving the nervous system[J].J Neurol Neurosurg Psychiatry,1995,58∶548-554.

[11]Michael Clarke,Richard W Newton,paul E Klapper,et al.Childhood encephalopathy:virus,immune response,and outcome[J].Developmental Medicine and Child Neurology,2006,48∶294-300.