乳腺癌中雄激素受体的表达及临床意义

李靖华 柳克晔 王晓春 杨季红

乳腺癌是一种激素依赖性肿瘤，多数研究认为其发病率的增加与雌激素有关［1］，而关于雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的研究也显示，ER、PR是乳腺癌的独立预后因子［2］，针对它们的治疗也已经成为乳腺癌的一线内分泌治疗方案［3］。然而女性乳腺癌的发病率显示绝经后女性亦是高发年龄段，而此时女性体内雌激素大量减少，因此除了雌激素，还可能有其他因素导致乳腺癌的发生。雄激素在一些研究中显示是绝经后女性乳腺癌发病的高发因素，且雄激素大多通过雄激素受体(AR)发挥作用［4］，但目前研究结果不尽一致［5，6］。因此我们应用流式细胞术(FCM)对乳腺癌组织进行AR检测，了解AR与乳腺癌临床特点、病理指标的关系，为乳腺癌的预后判断及内分泌治疗积累资料、提供依据。

1 资料与方法

1．1 一般资料 收集河北大学附属医院普外科、肿瘤外科2009年6月至2010年3月乳腺癌确诊但，术前未行任何治疗的病例60例，年龄33～75岁，平均年龄(51±9)岁。乳腺癌手术切除标本，70%乙醇固定。其中组织学分级Ⅰ级8例，Ⅱ级36例，Ⅲ级16例。26例乳腺癌伴腋下淋巴结转移。

1．2 方法 将固定于70%乙醇中的肿瘤组织标本经0．9氯化钠溶液冲洗后，放在150目的铜网上，下置一平皿，用眼科剪刀将组织剪碎，用眼科镊子轻搓组织，边搓边用0．9氯化钠溶液冲洗，经300目尼龙网滤除细胞团块，收集滤下的细胞悬液。1 000 r/min，离心5 min，弃上清;加入1 ml PBS将细胞悬浮计数并调整细胞浓度为1×107/ml时，此悬浮液为单分散细胞悬液。将单细胞悬液分装3管(阴性、阳性对照组及实验组)，实验组加入雄激素受体抗体100μl，充分振摇，36℃避光反应30 min;实验组及阳性对照组各加入二抗100μl，避光反应，然后进行FCM检测。兔抗多克隆雄激素受体抗体购自北京博奥森生物技术有限公司。

1．3 结果判定 AR经流式细胞仪检测后所得结果为具体数值，无需判定。对标本组织同时行免疫组化检测结果判定标准为:ER、PR阳性表达为细胞胞核呈棕黄色颗粒，Her-2阳性染色位于胞膜，阳性标准为胞膜染色或胞膜、胞浆同时染色。每张切片中阳性细胞＜25%或无阳性细胞为阴性，阳性细胞＞25%为阳性。

1．4 统计学分析应用SPSS 11．5统计软件，计量资料以¯x±s表示多组间比较用方差分析，两组间比较采用t检验，相关分析采用直线相关和等级相关，P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 AR在乳腺癌中的表达 AR值最小值为291．79，最大值为512．49，平均为(361 ±58)。

2．2 乳腺癌组织中的AR表达与临床特点、病理参数的相关性60例乳腺癌组织中AR的不同表达与肿瘤大小、组织学分级、TNM分期、淋巴结转移情况、月经情况、ER、PR、HER-2比较情况见表1。我们得到以下结果:AR的表达与肿瘤大小有关联，肿瘤≤2 cm者，雄激素受体表达较高(427±42)，与2～5 cm肿瘤及＞5 cm肿瘤(343±32，314±29)相比差别有统计学意义(P=0．000);其表达与组织学分级有关联，组织学分级

Ⅰ级者雄激素受体表达值较高(447±50)，与Ⅱ、Ⅲ级者(357±31，322±38)相比差异有统计学意义(P=0．000)。与ER蛋白表达呈正相关(r=0．347，P=0．000)。与 TNM分期、绝经与否，PR、Her-2及淋巴结转移情况不相关(P＞0．05)。

表1 AR表达与乳腺癌临床特点、病理指标的关系±s

表1 AR表达与乳腺癌临床特点、病理指标的关系±s

项目 AR t或F值 P值314±29绝经是(n=36) 370 ±52 0．650 0．521否(n=24) 356±48组织学分级Ⅰ(n=8) 447±50Ⅱ(n=36) 357 ±31 15．075 0．000Ⅲ(n=16) 322±38 ER阳性(n=36) 389 ±46 3．975 0．000阴性(n=24) 320±27 PR阳性(n=40) 352 ±54 －1．252 0．221阴性(n=20) 380±64 Her-2阳性(n=30) 373 ±63 1．093 0．284阴性(n=30) 350±51淋巴转移有(n=26) 349 ±52 －1．403 0．171无(n=34) 378±62Ⅰ期(n=6) 357±27 TNMⅡ期(n=46) 367 ±53 0．554 0．581Ⅲ期(n=8) 334±39≤2(n=18) 427±42肿瘤大小(cm)＞2且≤5(n=28) 343 ±32 21．849 0．000＞5(n=14)

3 讨论

AR属于核受体超家族成员，主要存在于靶细胞的核内。人AR基因定位于X染色体长臂(Xq11～12)，含有8个外显子和7个内含子，全长约90 kb，编码918个氨基酸。AR有4个功能结构域，分别是低保守的氨基端结构域、高保守的DNA结合结构域、铰链区与高保守的羧基端配体结合结构域，不同的结构域有不同的功能［7］。AR调节转录活化主要是通过氨基端和羧基端两个结构域来完成的。

本研究发现，AR表达与肿瘤大小、组织学分级呈负相关。即肿瘤越小、组织学分级越低，AR的表达越高，我们的研究结果与 Ogawa 等［8，9］的研究一致。Ogawa 等［8］应用免疫组化法检测227例原发性乳腺癌中AR的表达，发现越小的肿瘤AR阳性率越高(P=0．045)，Monifar等［9］应用抗 AR 单克隆抗体对乳腺癌标本进行检测发现AR在Ⅰ级的肿瘤表达为88%，在Ⅱ级和Ⅲ级的肿瘤中分别为71%和47%。表明AR的高表达可能预示肿瘤恶性程度较低。

我们的研究还发现，AR的表达与ER的阳性表达率呈正相关，即ER阳性者AR的表达高，与文献报道相似［8，9］。Ogawa等［8］研究发现 AR 与 ER 表达相关(P=0．027)。Monifar等［9］的研究表明:90%分化Ⅰ级的侵袭性癌与55%分化Ⅱ级的侵袭性癌表现为ER+/AR+，而绝大多数分化Ⅲ级的侵袭性癌表现为ER-/AR-。因为目前一般认为ER的表达是预后良好与否的指标，即ER阳性者预后较好，而AR的表达又与ER呈正相关，所以AR的高表达也可能预示着预后良好。国外文献已有相关报道［4，10］。Agrawal等［10］研究表明 AR 阳性者 5 年内的局部复发率为22．6%(48/212)，阴性者的局部复发率为52．2%(144/276)。在所有局部复发患者中，AR阳性者所占比率为25%，明显低于AR阴性者(占75%)，差异有统计学意义(P=0．023)。Shippinger等［4］的研究也有相似发现，即 AR 阳性患者复发后的平均生存时间(21．89个月)高于AR阴性患者(11．99月)。我们的研究还需进行长期随访，才能得出预后结论。我们的研究没有发现AR与Her-2、PR、TNM分期、淋巴结转移情况和绝经与否有关。

1 Chlebowski RT，Kuller LH，Prentice RL，et al．Breast cancer after use of estrogen plus progestin in postmenopausal women．N Engl JMed，2009，360:573-587．

2 Chevallier B，Heintzmann F，Mosseri V，et al．Prognostic value of estrogen and progesterone receptors in operable breast cancer．Results of a univariate and multivariate analysis．Cancer，1988，62:2517-2524．

3 Gnant M，Mlineritsch B，Schippinger W，et al．Endocrine therapy plus zoledronic acid in premenopausal breast cancer．N Engl JMed，2009，360:679-691．

4 ShippingerW，Regitnig P，Dandachi N，et al．Evaluation of the prognostic significance of androgen receptor expression in metastatic breast cancer．Virchows Arch，2006，449:24-30．

5 Carreno G，Del Casar JM，Corte MD，et al．Local recurrence after mastectomy for breast cancer:analysis of clinicopathological，biological and prognostic charactersitics．Breast Cancer Res Treat，2006，6:43-48．

6 Allegra JC，Woodcock T，Woolf S，et al．A randomized trial comparing mitoxantrone with doxorubicin in patients with stage Ⅳ breast cancer．Invest New Drugs，1985，3:153-161．

7 Kumar R，Johnson BH，Thampson EB．Overview of the structural basis for transcription regulation by nuclear hormone receptors．Essays Biochem，2004，40:27-39．

8 Ogawa Y，Hai E，Matsumoto K，et al．Androgen receptor expression in breast cancer:relationship with clinicopathological factors and biomarkers．Int JClin Oncol，2008，13:431-435．

9 Moinfar F，Okcu M，Tsybrovskyy O，et al．Androgen receptors frequently are expressed in breast carcinomas potential relevance to new therapeutic strategies．Cancer，2003，98:703-711．

10 Agrawal A K，Jilen M，Grzebieniak Z，et al．Androgen receptors as a prognostic and predictive factor in breast cancer．Folia Histochem Cytobiol，2008，46:269-276．