酒石酸亚铁比色法和高锰酸钾滴定法测定茶多酚的比较

王烨军，徐奕鼎，黄建琴，王文杰，方吴云

（1.安徽省农业科学院茶叶研究所，祁门 245600；2.国家茶树育种安徽分中心，祁门 245600）

酒石酸亚铁比色法和高锰酸钾滴定法测定茶多酚的比较

王烨军1,2，徐奕鼎1,2，黄建琴1,2，王文杰1,2，方吴云1,2

（1.安徽省农业科学院茶叶研究所，祁门 245600；2.国家茶树育种安徽分中心，祁门 245600）

采用酒石酸亚铁比色法和高锰酸钾滴定法对26个茶样进行测试，比较两种方法所得数据的差异，结果表明：酒石酸亚铁比色法虽然快速、简便、重现性好，但与高锰酸钾滴定法相比结果要高5.48～37.88%不等，高锰酸钾滴定法相对而言数据更接近真实值。

茶多酚；茶水浸出物；酒石酸亚铁比色法；高锰酸钾滴定法

茶多酚（tea polyphenol,TP）是茶叶的主要有效成分之一，具有抗衰老、抗癌、清除人体自由基、抗辐射、降血糖血脂等多种生物学活性。茶多酚测定方法较多，酒石酸亚铁比色法为国家标准测定方法（GB8313-87～GB8313-2003），具有快速、简便、重现性好的特点。但酒石酸亚铁比色法做出的数据往往偏高[1，2]。因此，为了探讨测定数据偏高的原因，于2009年6月2日至4日，分别对26个茶样采用酒石酸亚铁比色法和高锰酸钾滴定法进行测试，比较两种方法所得数据的差异，为茶叶多酚检测推荐相对准确、简便、通用的方法。

1 材料与方法

1.1 材料共测试样品26个，其中1～17号样为“国家级茶树良种凫早2号高效繁育推广”送检样品；18～26号由国家科技支撑项目“主要经济作物减灾避灾关键技术集成与示范”支项目“茶树减灾避灾关键技术集成与示范”提供。茶叶样品采制参照《茶树种质资源描述规范和数据标准》[3]。2009年6月2日至6月4日进行茶多酚测定。

1.2 仪器与试剂UV-2550紫外-可见分光光度计（日本岛津公司生产），751、721分光光度计，所用试剂均为AR级。

1.3 测定方法茶多酚含量检测采用酒石酸亚铁比色法[4]和高锰酸钾滴定法[5]。

2 结果与分析

2.1不同日期酒石酸亚铁比色法测定结果比较

表1 不同日期酒石酸亚铁比色法测定结果

表1为不同日期、由不同检测人员采用酒石酸亚铁比色法和UV-2550测定4个茶叶样品所得结果。由表1知：6月2日和4日采用酒石酸亚铁比色法所得结果差距不大，都在允许误差范围之内，尤其是11、12和25号样变异系数≤0.28。可见酒石酸亚铁比色法和测定仪器的稳定性都很好，茶叶样品多酚含量在两日内也没因储放问题而发生变化。2.2不同仪器酒石酸亚铁比色法测定结果比较

表2 不同仪器酒石酸亚铁比色法测定结果

表2为6月4日，采用酒石酸亚铁比色法并利用UV-2550、751、721分光光度计三种仪器进行比色所得结果。结果表明：采用三种仪器测定的数据变异系数以11号样最大，12号样最小，分别为2.43%和1.33%。可见酒石酸亚铁比色法所得数据偏高也不是因为仪器精度原因所造成的。

2.3 不同批次试剂酒石酸亚铁比色法测定结果比较

表3为原有试剂和新购试剂，采用UV-2550于6月4测试所得结果，试剂1为6月2日测试所配试剂，试剂2为新购药品于6月4日所配试剂。由于原配试剂开瓶时间较长，考虑到试剂纯度问题，故而新购一批试剂用于测试。结果表明：试剂1测试结果普遍高于试剂2的测试结果，变异系数以26号样最高，达到了2.72%，以25号样最低，为1.97%，整体比较稳定。可见试剂1由于存放时间影响，纯度有所下降，但两批试剂测试结果的变异系数在1.97～2.72%之间，属于正常波动。

表3 试剂对酒石酸亚铁比色法结果的影响

2.4高锰酸钾滴定法与酒石酸亚铁比色法测定结果比较

表5为6月2日采用酒石酸亚铁比色法（比色仪器为UV-2550）和6月4日采用高锰酸钾滴定法所得结果。由表1知，茶叶样品多酚含量在两日内没有因储放问题而发生变化，故2组数据可以进行比较。由表5可知，酒石酸亚铁比色法测得结果普遍要比高锰酸钾滴定法测的结果要高5.48～37.88%不等。尤其是18号样酒石酸亚铁比色法的结果高达39.93%，接近42.55%的水浸出物含量。此外，18～26号样酒石酸亚铁比色法测得结果比高锰酸钾滴定法测的结果高5.48～12.99%，可能对于蒸青样2种方法的差异度要小。

表4 水浸出物含量

表5 高锰酸钾滴定法与酒石酸亚铁比色法测定结果

3 讨论

酒石酸亚铁比色法是利用多酚类在一定pH值条件下与酒石酸亚铁形成蓝紫色络合物[6]，用分光光度法定量，该法重复性好。而高锰酸钾滴定法则除了能氧化茶叶中的多酚类物质外，还能氧化部分非多酚类物质，如维生素C（其含量不及1%）[7]。理论上讲高锰酸钾滴定法测定的茶多酚含量应该比茶多酚的实际含量要稍高，然而通过测定26个茶样的茶多酚含量发现：酒石酸亚铁比色法测定的多酚含量却远高于高锰酸钾滴定法测定茶多酚的含量，幅度在5.48～37.88%不等。究其原因可能是：①茶叶中不同多酚的组分对酒石酸亚铁的呈色能力有差异。如儿茶素组分中具有连位羟基的呈色能力比具有邻位羟基的呈色强3倍，导致含连位羟基儿茶素含量高的绿茶或茶叶提取物的多酚测定结果偏高，尤其是儿茶素含量超过70%，用此方法测定的结果超过100%[6]。②酒石酸亚铁比色法的换算系数是否准确。目前酒石酸亚铁比色法的换算系数采用3.913，用此系数测定某些品种茶叶样品时，有的数值明显偏高，因此换算系数采用3.913是否可取，值得研究。③酒石酸亚铁比色法测得的结果偏高可能是因为酒石酸亚铁比色法是测定茶叶中酚类物质总量[2]。由表4、表5发现有的多酚的百分含量几乎接近水浸出物含量，这与实际含量不相符，因为茶叶水浸出物中除了含有多酚类物质外，还有蛋白质、咖啡碱、氨基酸等多种组分。

通过以上分析可知：酒石酸亚铁比色法虽然重复性较好，数据稳定，但所得结果差异较大，而高锰酸钾滴定法所得数据相对而言更接近真实含量，至于滴定终点难以把握的问题，如果利用自动电位滴定仪能较好地解决。

[1] 陈惠衡，施玲，刘芳，等．酒石酸比色法和Folin-Denis 法测定茶多酚的比较[J]．中华预防医学杂志，2008，42（4）：272～274.

[2] 黄皓，毛志方，涂云飞，等．两种方法测定茶叶中茶多酚含量的比较[J].中国茶叶加工，2009，（2）：43～44.

[3] 陈亮，杨亚军，虞富莲，等．茶树种质资源描述规范和数据标准，中国农业出版社，2005年10月第一版：70～72.

[4] GB/T8313-2002 茶 茶多酚的测定[S].

[5] 商业部茶叶畜产局,商业部杭州茶叶加工研究所.茶叶品质理化分析[M].上海：上海科学技术出版社，1989：256～257.

[6] 商业部茶叶畜产局,商业部杭州茶叶加工研究所.茶叶品质理化分析[M].上海：上海科学技术出版社，1989：256～258.

[7] 刘仲华，黄建安，王增盛，等．儿茶素提取工艺技术研究[J].湖南农业大学学报，1997，23：537～542

TS207.3

B

1006-5768（2010）02-0061-03

2009-12-03

国家科技支撑项目“主要经济作物减灾避灾关键技术集成与示范”支项目“茶树减灾避灾关键技术集成与示范”（2008BADC0B03）