冰冻切片的技巧

张丽芳

冰冻切片是目前临床病理检查中最常用的快速制片方法。是在低温条件下使组织快速冷冻到一定的硬度然后进行切片的一种方法，具有速度快、方便的特点。冰冻切片与常规石蜡切片相比局限性和难度较大。如果出现切片不完整、厚薄不均、刀痕、冰晶等情况常导致细胞肿胀变形使诊断困难甚至误诊。而冰冻切片病理诊断的重要性是不言而喻的，制作1张优良的冰冻切片包含着许多细节，为此对技术人员的要求很高。通过积极探索和工作实践本文就冰冻切片的一些技巧进行介绍。

1 取 材

取材须由经验丰富的病理医师负责这样才能保证取到合适的病变。取材时尽量保持刀具与台面的干燥避免组织与水接触。如送检组织内含水或血性液，应用干燥的纱布或者滤纸把水吸干，可提高切片质量，防止空洞、冰晶等现象出现。取材应尽量小些一般可切取1.5cm×1.5cm×0.3cm，组织厚度勿超过4mm[1]，这样有利于组织的速冻及形态结构保存[2]。因脂肪组织不易切片取材中应尽量剔除[3]。

2 速 冻

速冻是冰冻切片的关键，冷冻的速度可有效的减少冰晶的出现。因此冰冻时间的控制对切片影响尤为重要。一般较硬组织如子宫肌瘤1～2min，软组织以及细胞丰富的组织如肝、脾、淋巴结等2～4min，脂肪组织5～6min、同时脂肪组织切片厚度要增加到8～20μm。

3 温 度

冰冻切片的温度要适宜，温度过低、过高会导致组织过硬或硬度不够，从而影响切片质量，产生搓板状、梯田状、厚薄不均、破碎或粉末状现象。根据器官组织形态结构和组成成分的不同，冰冻组织切片的温度亦不同推荐未固定的组织：乳腺、卵巢、子宫等：-20～-25℃；胃、肠：-18～- 20℃；甲状腺、肝、肾、脾等：-15℃左右；脂肪组织一般在-35℃以下。已固定的组织最好选择-12℃～-17℃[4]。

4 切 片

可提前将锋利的切片刀调节合适的角度安在刀架上，可使切片刀的温度适宜，防止出现切片粘连。切片时需注意抗卷板与刀锋的距离，用力需均匀、柔和，防止污染及切片皱折，先将组织轻修后再观察切面，尽量修至最大切面，带包膜的组织一定要切完整小的结节或重点病变部位要切到位，必要时多个切面贴片。附贴切片时动作需轻巧、快速，用力需均匀，防止切好的组织卷曲出现皱褶。

5 固 定

附贴好的组织切片应立刻放入AAF液（95%酒精85mL+甲醇10mL+冰醋酸5mL）中固定。若固定液浓度过低或组织内含过多的坏死组织易导致切片脱落。一些含脂肪较多的组织为防止掉片可将切片先用电吹风吹干、再经切片固定时间长些（或经95%酒精双重固定），后再行染色，同时保持载玻片干净，应定期更换固定液。

6 染色、封固

为提高冰冻诊断的准确率，对冰冻切片染色要求较高，要求着色佳，细胞染色要求核质分明、对比度好。固定好的组织切片经水洗后直接入苏木素1～2min（冬季苏木素着色较慢，可将苏木素预放入37℃温箱30～60min，或直接将切片置于酒精灯上加热，由于酒精灯加热温度过高，故应将切片左右前后移动）→充分水洗→盐酸酒精分化（有一些可省略如纤维较多的组织） →PBS或氨水蓝化→水洗→75%酒精→0.5%伊红→80%乙醇→95%乙醇→无水乙醇→无水乙醇（或正丁醇易使乙醇与二甲苯的相融性） →二甲苯浸泡两次→吹干（先用热风吹后用冷风吹）→中性树胶封固。在天气潮湿时须及时更换无水乙醇及二甲苯，否则会影响脱水易出现切片不透明出现云雾现象，从而影响阅片。封片时要做到无气泡、无溢液、标签清楚端正，保证切片的整洁。这样做出来的组织切片可使切片完整、平坦、厚薄均匀、染色分明、结构清晰，明显减少细胞肿胀、收缩，有利于提高诊断的正确率。

总之，冰冻切片是较难掌握的病理实验技术之一，只有掌握好技巧才能不断提高切片质量，提高冰冻诊断水平、减少误差率。

[1]陈洁.制作冰冻切片的几点体会[J].现代实用医学,2001,13(12):614.

[2]田玉旺,丁华野.一种减少冷冻切片组织内冰晶的处理方法[J].临床与实验病理学杂志,2002,18(5):568.

[3]李梅.提高病理冰冻切片质量的体会[J].医学信息,2009,22(12):2801-2802.

[4]吴艳霞.冰冻切片的制作方法分析[J].吉林医学,2009,30(6):493-494.