护肝宁片中大黄素含量测定方法的研究

梁伟

(哈药集团世一堂制药厂，黑龙江 哈尔滨 150088)

护肝宁片是由垂盆草、虎杖、丹参和灵芝等四味中药材经提取而制成的复方中药制剂，具有清热利湿，益肝化瘀，舒肝止痛，退黄，降低谷丙转氨酶的作用。用于急性肝炎及慢性肝炎。为了更好地控制该制剂的质量，保证药品疗效，本研究建立了高效液相色谱法测定护肝宁片的虎杖中大黄素的含量，此方法专属性强，重现性好，可作为控制其质量的一项重要指标。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC－2010高效液相色谱仪

1.2 试剂 甲醇(天津科密欧化学试剂开发中心，色谱纯，批号20080105);乙腈(天津科密欧化学试剂开发中心，色谱纯，批号20081112);大黄素对照品(0756－200702供含量测定用，中国药品生物制品检定所);供试品(天津飞鹰制药有限公司，批号0909014)。

2 色谱条件的确定与系统适用性试验

2.1 色谱条件 色谱柱 C18柱(5μm，250mm×4.6mm);流速:1.0mL·min－1;检测波长:254μm;柱温:室温;进样体积:10μL。

2.2 检测波长的选择 通过紫外－可见分光光度计在200～400nm对供试品溶液、对照品溶液及阴性对照样品溶液的扫描可以看出，大黄素对照品溶液在254nm波长处有最大吸收，供试品溶液在254nm也有吸收，阴性对照样品(缺虎杖)溶液无明显吸收，基本可排除干扰。所以确定本品检测波长为254nm。

2.3 流动相的选择 以甲醇－乙腈(85∶15)为流动相，所测供试品中大黄素与其他组分能够实现基线分离。

2.4 线性范围的考察

2.4.1 对照品溶液的制备 精密称取大黄素对照品10mg，置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，制成每1mL含大黄素0.2mg的对照品溶液，精密量取大黄素对照液1.0、2.0、4.0、8.0、12.0、16.0mL，分别置 25mL 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4.2 标准曲线的制备

精密吸取各对照品溶液10μL注入液相色谱仪，测定，以溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，绘制标准曲线如下图所示，其回归方程为y=308163.18x+41397.66，相关系数 r=0.9998。

上述试验结果表明，大黄素对照品溶液浓度在8～128μg·mL－1的范围内，峰面积与溶液浓度之间具有良好的线性关系。

2.5 仪器精密度试验

样品除去包衣，研细，制备成供试品溶液。精密吸取供试品溶液10μL，重复进样6次，测定。测得峰面积平均值RSD为0.60%。表明，本法仪器精密度符合检测要求。

2.6 供试品溶液的稳定性试验

样品除去包衣，研细，制备成供试品溶液;精密吸取供试品溶液 10μL，在 0、2、4、8、16、24h 分别进样 1次，测定，测得峰面积平均值RSD为0.99%。表明，供试品溶液在24h内稳定，可以满足含量测定的时间要求。

2.7 重复性试验

取同一批样品，除去包衣，研细，分取细粉约1.0g，共6份，精密称定，制备成供试品溶液。精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定。测得本品的大黄素平均含量为20.08mg·g－1，本批被测样品的平均片重为 0.3158g·片－1，则每片含虎杖以大黄素计为6.3mg·片－1;RSD为3.90%。上述试验结果表明，本法的重复性良好。

2.8 回收率试验

取上述批次样品(大黄素含量为20.08mg·g－1)，除去包衣，研细，取细粉9份，各约1.0g，精密称定，分别置于100mL量瓶中;在1号、2号、3号量瓶中加入大黄素对照品约3.5mg、在4号、5号、6号量瓶中加入大黄素对照品约4.0mg、在7号、8号、9号量瓶中加入大黄素对照品约4.5mg。

精密吸取对照品溶液及各供试品加对照品溶液10μL，注入液相色谱仪，测定。测得平均回收率为99.2%，RSD为0.92%。试验结果表明，高效液相色谱法用于测定本品的大黄素含量，具有良好的准确性和可靠性。