HPLC法测定复方苦木消炎颗粒中脱水穿心莲内脂含量

赵宏荣 王立英

（成都永康制药有限公司，四川 成都 611130）

HPLC法测定复方苦木消炎颗粒中脱水穿心莲内脂含量

赵宏荣 王立英

（成都永康制药有限公司，四川 成都 611130）

目的：建立复方苦木消炎颗粒中脱水穿心莲内脂的含量测定方法。方法：采用HPLC法对处方中穿心莲的有效成分穿心莲内脂和脱水穿心莲内脂进行含量测定。结果：本品穿心莲内脂测定有强烈干扰；脱水穿心莲内酯含量测定线性范围为0.041 5～0.207 5μg(r=0.999 8)，平均回收率为99.60%(RSD=0.69%，n=6)。结论：HPLC测定复方苦木消炎颗粒脱水穿心莲内脂含量方法准确可行，重复性好，可有效地控制复方苦木消炎颗粒的质量。

复方苦木消炎颗粒；穿心莲内脂；脱水穿心莲内脂；HPLC

复方苦木消炎颗粒由原卫生部药品标准中药成方制剂复方苦木消炎片改剂型制成，处方为穿心莲和苦木，具有清热解毒，燥湿止痢之功效，用于细菌性痢疾，急性肠炎及各种急性感染性疾患。由于儿童在急性胃肠感染病方面发病率较高，而颗粒剂型适于儿童及部分不宜吞咽患者。原复方苦木消炎片质量标准中无专属的定量检测方法，为了提高复方苦木消炎颗粒质量的可控性，本实验研究建立了脱水穿心莲内酯的HPLC含量测定方法。

1 实验材料与仪器

1.1 仪器

Waters WAT01110高效液相色谱仪；进样器：25μL注射器（HAM ILTON）。超声波清洗器：AS10200A型 250W 50KHz。

1.2 试剂试药

流动相用试剂：水（超纯水）；乙腈（色谱纯）；甲醇（色谱纯）；其他试剂皆为分析纯。

1.3 材料

阴性对照品（取苦木267 g粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用65%乙醇浸渍36 h，渗漉流速4m L/m in，收集渗漉液为药材总量的12倍，过滤，滤液回收乙醇，浓缩成相对密度为1.04/80℃的清膏；加入淀粉至总量为1 000 g，制颗粒，混合均匀）；穿心莲内酯对照品（中国药品生物制品检定所提供，含量测定用，批号110797-200307）；脱水穿心莲内酯对照品（中国药品生物制品检定所提供，含量测定用，批号110854-200305）；复方苦木 消 炎 颗 粒 （本公司自制050501、050601、050602、050603）。

2 实验方法与结果

2.1 含量测定

2.1.1 穿心莲内酯 本研究参考《中国药典》2005年版一部中清火栀麦片[1]的含量测定方法，对其色谱条件进行了摸索，选用色谱柱：C18柱（Dikma Technologies 5μm 150×4.6mm）；流速：1m L/m in；检测波长：225 nm；柱温：30℃。以甲醇 -水（55∶45）和乙腈 -0.1%氨溶液（35∶65）为流动相进行试验，结果阴性对照有强烈干扰。

2.1.2 脱水穿心莲内酯

2.1.2.1 色谱条件的建立 色谱柱：C18柱（Dikma Technologies 5μm 150×4.6mm）；流动相：乙腈-0.1%氨溶液（35∶65）；流速：1m L/min；检测波长：250 nm；柱温：30℃。

2.1.2.2 对照品溶液的制备 精密称取脱水穿心莲内酯对照品适量，加甲醇制成每1mL含脱水穿心莲内酯对照品10μg的溶液，即得。

2.1.2.3 供试品溶液的制备 取供试品研细，取约0.3 g，精密称定。置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50m L，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得。

2.1.2.4 阴性对照品溶液的制备 照2.1.2.3项下方法确定的供试品制备方法制备。

2.1.2.5 系统适用性试验 分别取上述对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图（图1），从供试品色谱图可以看出，脱水穿心莲内酯峰要与杂质峰达到基线分离，色谱柱理论板数应不低于2 000。脱水穿心莲内酯的含量测定按（中国药典2005年版一部附录ⅥD）外标法进行计算。阴性对照在脱水穿心莲内酯峰相同保留时间处，基本无干扰峰。

2.1.2.6 标准曲线的绘制 精密称取脱水穿心莲内酯对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号：110854-200305)约20 mg，用甲醇溶解定容为50 m L，作为贮备液（0.415 mg/m L），分别精取此贮备液，加甲醇稀释配制成浓度为2.075、4.15、8.30、12.45、16.60、20.75 μg/m L 的溶液。分别精密吸取配制的对照品溶液各10μL注入液相色谱仪测定（表1）。以峰面积积分值对进样量进行回归，得回归方程Y=17 232x+41.759 R2=0.999 7（n=6），见图 2。

表1 脱水穿心莲内酯线形关系

结果表明，进样量在0.020 75～0.207 5μg范围内线性关系良好，故可以采用标准曲线法进行计算；且由于标准截距小，则可用单点校正法（不考虑截距）进行计算。

2.1.2.7 进样精密度考察 分别精密吸取同一份对照品溶液10μL，连续进样6次，RSD为1.72%，说明仪器精密度良好，可满足含量测定要求。因此在进行样品测定时，可以采用外标法进行计算。

2.1.2.8 供试品溶液与对照品溶液稳定性考察 按含量测定项下方法操作，将对照品溶液和供试品溶液室温放置，分别于0，1，2，5，10 h测定供试品与对照品溶液的峰面积积分值，试验表明，对照品溶液在室温条件下放置10小时，脱水穿心莲内酯的峰面积积分值基本没有改变（RSD=1.14%）；供试品溶液同样条件放置10小时，脱水穿心莲内酯的峰面积积分值基本没有改变（RSD=0.87%），供试品与对照品溶液在测试条件下稳定，能满足含量测定要求。

2.1.2.9 重现性考察 取同一批样品5份，分别按脱水穿心莲内酯含量测定方法测定，按外标法计算脱水穿心莲内酯含量。结果脱水穿心莲内酯平均含量为0.357mg/g，RSD为1.12%。结果表明，本方法重现性良好，结果稳定。

2.1.2.10 系统耐用性实验 对同一批次样品分别用不同Dikma和天津琛航的色谱柱进行试验，试验结果表明，同一批次样品使用不同厂牌的色谱柱进行含量测定，其相对偏差为0.67%，能通过本系统适用性试验，方法有效。

2.1.2.11 加样回收试验 取供试品(0.357mg/g)约0.3g，精密称定，分6个水平加入脱水穿心莲内酯对照品适量，按脱水穿心莲内酯含量测定方法制备供试品溶液，分别进样，记录色谱图，计算回收率。结果见表2，可见样品加样回收良好。

表2 脱水穿心莲内酯加样回收试验结果（n=6）

2.1.2.12 供试品含量测定结果 取研制的3批中试产品，分别进行测定，结果见表3。

表3 脱水穿心莲内酯含量测定数据（n=3）

通过对3个批次样品含量的测定，平均含量为0.367mg/g。

3 讨论

3.1 穿心莲主要含有脱水穿心莲内酯、穿心莲内酯、新穿心莲内酯、穿心莲内酯苷等二萜内酯类化合物。在含量测定研究中，对穿心莲含量测定方法进行研究，选用穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品，分别进行试验。经试验发现由于苦木药材成分复杂可能对穿心莲内酯的含量测定造成干扰，因此在供试品的处理和流动相的选择上再次进行了试验，穿心莲阴性对照在保留时间内仍有强烈干扰；采用HPLC法对样品中脱水穿心莲内酯进行测定，结果方法较为简便，且重现性好。

3.2 在供试品溶液制备时，参照《中国药典》2005年版一部中穿心莲片[2]含量测定方法，在相同条件下，甲醇提取含量高于乙醇，回流提取与超声处理含量相近；提取时间30分钟优于20分钟，40分钟与30分钟差异不大。最终确定供试品溶液制备选用甲醇作提取溶剂，超声处理30分钟。

[1]中国药典2005年版一部 [S].北京:化学工业出版社.2005:612.

[2]中国药典2005年版一部[S].北京:化学工业出版社.2005:549-550.

赵宏荣，男，执业药师。研究方向：中药新药。E-mail：cdykzy@163.com