胆固醇结石与肝脏SRBI基因表达关系的探讨

陈玉杰 张明威 陈国斌

胆结石是结石病中的常见疾病，大多指胆囊结石，主要成分为胆固醇，属于胆固醇类结石。结石形成机制受遗传因素和环境因素多方面影响，其中遗传因素已经受到越来越多的重视。有研究表明，SRBI基因在结石形成过程中扮演重要角色[1]。为初步探讨SRBI基因过表达与胆囊结石形成关系，我们对20例胆囊结石患者各项结石指标展开检测，现将结果报告如下。

1 临床资料与方法

1.1 一般资料

选取2008年入住我院接受治疗的胆囊结石患者30例。其中，男18例，女12例；年龄47～54岁；病程1.3～3.1年。另选取30例健康志愿者作为对照组。两组在年龄、性别、病程等方面均无显著统计学差异。

1.2 方法

1.2.1 胆固醇各指标测定

将结石用生理盐水冲洗干净，于37℃温箱干燥过夜，然后用二甲亚砜（1m g／m l）溶解。总胆固醇试剂盒方法（中山生物试剂开发有限公司）测定结石中胆固醇含量；血脂试剂盒方法（上海科华试剂有限公司）测定血脂含量、血清总胆固醇、HDL胆固醇；总胆汁酸试剂盒方法（英国Randox公司）测定总胆汁酸；2：l比例的甲醇、氯仿抽提胆汁，测定磷脂和胆固醇含量；胆汁胆固醇饱和指数根据Carry表计算。

1.2.2 基因表达量测定

（1）总m RNA抽提：肝脏组织总RNA采用TRIZOL试剂（美国Invitrogen公司）抽提，紫外分光光度仪比色，测定280nm和260nm光密度比值，取lg总RNA于l％琼脂糖凝胶中电泳测定其完整性。

（2）cDNA合成：用DEPC-H2O将RNA稀释至1：5，采用反转录系统试剂盒（Promega公司Cat．No．3500）合成cDNA，反应体系中包括AMV逆转录酶20U和总RNA 1μg。

（3）3RNA含量测定：采用实时定量荧光PCR扩增方法，引物采用Primer Prem ier 5软件设计。反应体系：上清液2μL、Tag酶1μL、反应液2μL，初始温度设为94℃，荧光信号设为Fam荧光素。加入引物后启动反应，93℃热变性10m in，cDNA解链，然后94℃30s，53℃30s退火，72℃5m inDNA链延伸。共做40轮循环扩增反应。反应结束后将产物电泳观察产物条带，应用熔解曲线确定PCR产物特异性，采用亲环蛋白A作为内参照，计算基因相对表达量。1996年，Acton等人首次分离到B1型清道夫受体（SRBI），后证实人类

2 结果

表1 胆固醇各项指标测定结果

胆固醇各指标值见表1，试验组患者血清H DL和胆汁总脂显著低于对照组（P＜0.0 5），其它各项测量指标值则均显著高于对照组（P＜0.05），从分子层面说明胆结石患者和健康者胆固醇指标有差异；总DNA含量测定结果如图1所示，试验组总m RNA含量显著高于对照组（P＜0.05），从基因层面提示胆结石致病因素与遗传有关系。

图1 总mRNA含量测定结果

3 讨论

胆汁的主要成分由肝脏代谢产生，其胆固醇主要来源于肝脏从血浆中摄取的脂蛋白胆固醇，尤其是高密度脂蛋白（HDL）-胆固醇，已经有动物实验证实，血浆中HDL来源的胆固醇优先分泌到胆汁中。胆汁胆固醇过饱和是胆石病生理病理早期过程中出现的异常，是胆石病发生的必要条件。1995年小鼠致石基因—Lith 1基因被发现，从此胆结石的遗传因素探索开始进入更多学者的研究范围。也存在类似受体，其主要分布在肝脏、肾上腺、睾丸等组织[2]。

肝脏过度表达SRBI时，血浆HDL胆固醇含量降低，胆囊中胆固醇含量会增加，增大结石概率；反之，如果SRBI表达不足或者不表达，肝脏摄取HDL能力降低，血浆中HDL含量就会相应增加[3]。我们基于上述理论，对胆囊结石患者展开研究，试验结果很好地证实了上述理论。

虽然其详细的病理生理机制还有待于进一步研究，但目前的研究至少可以说明，SRBI基因在胆囊结石过程中扮演着重要角色。虽然现阶段开展基因治疗还不太现实，但开展结石和相关基因的研究，对于结石病的早期预防以及遗传的分析，还是很有临床意义的。

参考资料

[1]韩天权.胆石病人肠肝循环途径脂质代谢异常的分子生物学研究进展[J].中华肝胆外科杂志,2008,14（4）：219-220．

[2]Wittenburg H,Lyons MA,et a1.FXR and ABCG5／ABCG8 as determinants of cholesterol gallstone formation from quantitative trait locus mapping in mice[J].Gastroenterology,2003,125（3）：868-881．

[3]王蕾.肝脏肝X受体α和雌激素受体α表达与女性胆石病关系的研究[J].诊断学理论与实践,2006,5（4）：308-311.