Survivin 和 bFGF在子宫内膜样腺癌中的表达及其意义

王长林 吴 彬 段承志 李 毅

(泰山医学院附属泰山医院妇科，山东 泰安 271000)

子宫内膜癌是女性生殖器官三大恶性肿瘤之一，发病率近年来呈持续上升趋势。在子宫内膜癌的病理类型中，子宫内膜样腺癌发生率最高，占80%～90%。近代肿瘤分子生物学研究表明，恶性肿瘤的发生、发展是由于致癌因子通过不同机制使癌基因激活，抑癌基因失活，从而使细胞增殖和凋亡失调所致。Survivin是作用很强的细胞凋亡抑制剂，与肿瘤的浸润转移有密切关系[1]。 血管新生在恶性肿瘤的浸润、转移过程中起重要作用，bFGF 是重要的促血管生成的多肽生长因子之一。本研究采用免疫组化方法(S-P法)，检测正常子宫内膜及子宫内膜样腺癌组织中Survivin和bFGF的表达，探讨二者与子宫内膜样腺癌的发生、发展的关系。

1 材料与方法

1.1 标本来源及分类

50例标本均是子宫内膜样腺癌，取自本院2000年～2008 年间手术切除的子宫内膜样腺癌石蜡包埋组织。全部患者术前均无放疗、化疗及激素治疗史。患者平均年龄51.6岁(38 ～ 72 岁)。病理分级G1(高分化)30 例、G2(中分化)13 例、G3(低分化)7 例。手术-病理分期采用国际妇产科联盟(FIGO)2000年修订的标准Ⅰ期22 例，Ⅱ期19 例，Ⅲ期9 例，其中6 例伴有盆腔淋巴结转移。术后随访至2008 年6 月，死亡3例。随访3 年以上者25 例，5 年以上者6 例。另取因其他疾病而手术切除或刮宫的子宫内膜标本75例作为对照组。其中正常子宫内膜35例，非典型增生子宫内膜40 例。

1.2 试剂

Survivin兔抗人多克隆抗体(RAB-0536) 、bFGF 兔抗人多克隆抗体( 产品编号:RAB-0305) 、S-P 试剂盒(产品编号：KIT-9710/9720/9730)、DAB 显色试剂盒(产品编号:DAB-0031/1031)和多聚赖氨酸粘胶片均为福州迈新生物技术开发有限公司产品。

1.3 方法

每例标本均经10%甲醛固定，石蜡包埋，将收集的石蜡包埋组织采用5 μm切片，连续切片5张。1份做HE染色，另4份分别做bFGF和Survivin免疫组织化学染色观察。进行Survivin检测的组织切片经高压处理修复暴露抗原。免疫组织化学S-P法严格按试剂盒要求操作。以已知bFGF 阳性的结肠癌组织和Survivin表达阳性的乳腺癌标本作为阳性对照。PBS代替一抗作阴性对照。

1．4 染色特征及结果判定

1.4.1Survivin染色特征 免疫反应阳性产物主要定位于子宫内膜腺上皮细胞浆。阳性物质呈棕黄色颗粒，染色强时可呈棕褐色。

1.4.2bFGF染色特征 bFGF蛋白也主要定位于子宫内膜腺上皮细胞浆，部分可定位于细胞膜，出现棕黄色颗粒为阳性。

1.4.3染色结果判定 结果判定标准：阳性细胞胞浆内有棕黄色颗粒沉着，染色明显高于背景。阳性表达：(+)阳性细胞10%；(++)阳性细胞10%～60%；(+++)阳性细胞>60%。

1．5 统计学分析

样本阳性百分率的比较采用χ2检验，指标相关性采用Spearman相关分析。用SPSS13.0软件完成。

2 结 果

2.1 Survivin和bFGF在各组子宫内膜组织中的阳性表达

Survivin蛋白阳性产物定位于腺上皮胞浆(图1)，结果显示，在内膜样腺癌组和非典型增生组，Survivin的阳性表达明显高于正常内膜组(P<0.01)，前两组之间无显著差异。bFGF 亦定位于腺上皮胞浆，部分细胞存在胞膜染色(图2)。内膜样腺癌组和非典型增生组bFGF的阳性表达明显高于正常内膜组(P<0.05)，前两组之间无显著差异。见表1。

2.2 子宫内膜癌Survivin、bFGF表达与临床病理因素之间的关系

随着临床分期增高、组织分化程度降低和淋巴结转移，Survivin和bFGF表达均增强，在临床Ⅱ～Ⅲ期表达明显高于I期(P<0.05)，G3组中阳性率明显高于G1组和G2组(P<0.05)。有淋巴结转移的6例组织中Survivin和bFGF阳性率为100%，且均为强阳性表达，明显高于无淋巴结转移组(P<0.05)。见表2。

表1 Survivin和bFGF在子宫内膜组织中的阳性表达

注：与正常组比较，*P<0.01，**P<0.05 。

表2 Survivin、bFGF与临床病理因素之间的关系

注：与I期比较，*P<0.05；与G1和G2比较，**P<0.05；与无淋巴结转移组比较，***P<0.01。

2.3 子宫内膜癌Survivin与bFGF表达强度之间相互关系

在50例子宫内膜样腺癌组织中，bFGF蛋白的阳性表达与survivin蛋白的阳性表达呈正相关(r=0.327，P=0.010)。随着Survivin表达增强，bFGF表达水平升高(表3)。

表3 子宫内膜样腺癌中bFGF及Survivin表达的关系

图1 子宫内膜样腺癌中Survivin的表达(SP×400)

图2 子宫内膜样腺癌中bFGF的表达(SP×400)

3 讨 论

Survivin基因定位于17q25，可直接作用于细胞凋亡途径的终末效应酶，抑制细胞凋亡，是目前发现的作用最强的凋亡抑制因子[2]。Survivin蛋白只是在胚胎中表达，在成人已分化组织中呈低表达或不表达[3]。Saitoh等[4]用Northern blotting方法发现在大多数标本中，Survivin mRNA在宫颈癌中的表达水平是正常宫颈组织的2倍。

Survivin与子宫内膜癌的关系的研究报道不多，结论不一。Takai等[5]用荧光免疫组化法对31例内膜腺癌及20例正常内膜中Survivin的表达情况进行研究发现，Survivin在正常增殖期、分泌期内膜弱表达，而在内膜癌细胞核、细胞浆强表达，且Survivin表达分别与增殖细胞核抗原标记指数、临床分期、组织学分级、肌层浸润深度、临床结局及生存率显著相关，并认为Survivin是内膜癌的一个特异性诊断标志物，并在一定程度上反映预后。

本研究发现在正常子宫内膜、非典型增生内膜和子宫内膜癌组织中Survivin的表达率逐渐升高，差异有显著性。组织分化程度越低，Survivin的阳性表达率越高，且淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组，差异有显著性(P<0.01), Survivin的表达与子宫内膜癌的发生发展密切相关。提示Survivin可能通过抑制细胞凋亡、促进细胞增殖而在子宫内膜癌发生发展中发挥作用。

bFGF基因定位于4q26-27，是由146个氨基酸组成的多功能调节性多肽。它的基本生物学作用是促进细胞分裂增殖[6]，增加肿瘤血管的血液供应，从而为肿瘤细胞快速、无限制的增殖提供营养物质。最近研究证实bFGF 还是一种血管生长因子, 是一种内皮细胞分裂原， 它能刺激血管内皮细胞增殖、迁移和促进血管生成,参与调控体内血管新生整个过程[7-8]。杨树林等[9]的研究证实，结肠腺癌组织中bFGF的阳性表达率明显高于癌旁正常组织中的阳性表达率；在不同的浸润深度、不同的分化程度、有无淋巴结转移及不同的DUKES间(A期与C期、B期与C期)差异存在显著性；提示bFGF的过度表达可能促进肿瘤血管新生，从而促进肿瘤的侵袭、转移。有报道[10]表明,bFGF还能增强内皮细胞的抗凋亡能力,保护癌细胞免遭药物引起的程序性死亡,从而增加肿瘤细胞的抗药性。这也说明bFGF能延长肿瘤细胞的生存时间和增强肿瘤细胞的生命活力,促进肿瘤细胞的增殖、浸润和转移。因此由肿瘤细胞产生的bFGF，除了主要引起血管生成增加以外，还对肿瘤自身的发展起到一定的促进作用。白晓红等[11]研究证实子宫内膜样腺癌组织中bFGF表达与病理分级有明显的相关性，bFGF强阳性表达的患者预后差。本组研究结果显示子宫内膜癌组织bFGF阳性率和表达强度均高于正常和非典型增生子宫内膜，且与病理分级、临床分期及淋巴结转移密切相关，表明由正常到恶性肿瘤的发展过程中癌细胞过度表达bFGF，使细胞的增殖活性增强，加速了癌细胞的转移，影响了子宫内膜癌的预后。

本研究还发现在子宫内膜样腺癌组织中Survivin的阳性率与bFGF的阳性率呈正相关，结合各自的生物学功能，我们推测二者之间可能存在一定的作用机制。子宫内膜癌的发生发展与癌基因激活、抑癌基因的突变和抗凋亡基因过表达等有关。Survivin在子宫内膜癌组织中的再激活和异常表达导致细胞凋亡的减少或逃避，同时上调了bFGF的表达，进而以自分泌或旁分泌形式促进了子宫内膜样腺癌细胞的分裂增殖，二者的协同作用又刺激和促进了肿瘤新生血管的形成，最终导致了子宫内膜样腺癌向周围组织浸润及发生淋巴结转移。

Survivin和bFGF在子宫内膜样腺癌组织中的联合检测，为子宫内膜样腺癌的发展及预后判断提供了一种新的参考指标。

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