两种粘结系统处理牙本质后的磨片观察

李秋红,王 如

(大连医科大学 附属第一医院 口腔科，辽宁 大连 116011)

牙本质粘结是牙体粘结非常重要的环节。牙本质结构中，牙本质小管和管间牙本质这种不均质结构使得牙本质粘结较牙釉质复杂得多。牙本质是牙体硬组织，对其粘结处理后，观察其粘结面，若在不脱钙的情况下进行切片观察是很困难的。作者对牙本质粘结处理后在不脱钙的情况下，在光镜下观察经自酸蚀及全酸蚀两种粘结系统处理牙本质获得的混合层情况，为临床提供参考。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选择2008年1月～2008年3月在大连医科大学附属第一医院口腔颌面外科因牙周病须拔除患牙6例患者的后磨牙6颗，颌面具有典型硬化性牙本质，视觉分级三级以上(根据North Carolina dentine sclerotic scale[1])。因正畸减数须拔除前磨牙3例患者的6颗前磨牙，根尖孔已形成。使用超声洁治器去除所有样本牙的菌斑和牙石；离体牙在4%氯胺溶液中4 ℃存放，拔除后1个月内使用。将前磨牙颌面釉质用金刚砂车针磨除，暴露牙本质，高速金刚砂车针平行于牙长轴将牙分成两部分，即A组和B组；后磨牙颌面均为硬化性牙本质，直接用高速金刚砂车针平行于牙长轴将牙分成两部分，即C组和D组。每一部分均有牙本质小管平行于牙长轴和垂直于牙长轴的粘结面，且供粘结的牙本质均用细砂金刚砂车针打磨。A组和C组用于全酸蚀粘结观察，B组和D组用于自酸蚀粘结观察。

1.2 方 法

1.2.1 全酸蚀粘结观察样本：粘结面35 %磷酸(3 M ESPE，美国)酸蚀粘结面20 s后，蒸馏水冲洗20 s，干海绵球吸干多余水分，Single Bond粘结剂(3M公司，美国)均匀涂布在粘结面上，停留10 s后，用气枪将残留水分吹干，再次涂布粘结剂，将过多粘结剂用小毛刷吸出，光固化灯固化20 s，复合树脂Z350(3 M ESPE，美国)覆盖粘结面，光固化灯固化树脂。自酸蚀粘结观察样本：粘结面SE BOND自酸蚀粘结系统(可乐丽菲露，日本)涂布粘结面20 s后，气枪轻轻吹干再涂布Bond粘结剂10 s，光固化机固化20 s，树脂覆盖粘结面，光固化灯固化树脂。

1.2.2 非脱钙牙磨片制作方法：样本于70 %酒精中固定72 h后，梯度脱水(80%、90%、95%、100%酒精)，各72 h(每24 h换1次酒精)。甲基丙烯酸甲酯和邻苯二甲酸二丁酯按4∶1(体积比)混合配制浸透液1，将样本放入其中，室温下浸透2周。甲基丙烯酸甲酯和邻苯二甲酸二丁酯按4∶1(体积比)混合，每100 mL混合液加入过氧化苯甲酰2.5 g，磁力搅拌器充分搅拌4 h，配置浸透液2。将样本放入其中，室温下浸透1周。甲基丙烯酸甲酯和邻苯二甲酸二丁酯按4∶1(体积比)混合，每100 mL混合液加入过氧化苯甲酰6.25克，磁力搅拌器充分搅拌4 h，配置包埋液，将样本放入其中，室温下包埋1周。使用Leica 1600型锯割切片机(EXAKT公司，德国)将样本切薄，并磨薄切片至20～25 μm，磨片制作由解放军总医院口腔研究所完成。10 %甲苯胺蓝溶液浸泡5 min，水洗，干燥，封片。光镜下观察。

2 结 果

C组硬化性牙本质经全酸蚀粘结处理后，可见粘结混合层与牙本质粘结紧密，大部分混合层厚度均匀，部分区域不均匀，有些较薄，有些较厚，部分区域可见混合层牙本质面呈锯齿形似树脂突(图1a，黑色箭头示)。D组硬化性牙本质经SE BOND自酸蚀粘结处理，可见粘结混合层清晰明显，与牙本质粘结紧密，有些区域可见混合层牙本质面呈锯齿形似树脂突(图1b，黑色箭头示)。

图1 硬化性牙本质Fig 1 Sclerotic dentin(×400)a:3M全酸蚀粘结(3M total-etching bonding); b:SE BOND自酸蚀粘结(SE BOND self-etching bonding)黑色箭头示混合层牙本质侧凸凹不平似树脂突(black arrow shows resin tags look like waved line in hybrid layer)

A组正常牙本质经全酸蚀粘结处理，可见混合层与牙本质粘结紧密，但不及与树脂粘结紧密，混合层厚度大部分区域均匀，有些区域较薄，有些区域较厚(图2a)。B组正常牙本质经SE BOND自酸蚀粘结处理，可见粘结混合层清晰明显，与牙本质粘结紧密(图2b)。

图2 硬化性牙本质Fig 2 Sclerotic dentin(×400)a:3M全酸蚀粘结(3M total-etching bonding); b:SE BOND自酸蚀粘结(SE BOND self-etching bonding)

牙齿磨片光镜下观察混合层：全酸蚀系统正常牙本质获得的混合层与硬化性牙本质获得的混合层无明显差别。SE BOND自酸蚀粘结系统正常牙本质获得的混合层与硬化性牙本质获得的混合层无明显差别。

3 讨 论

3.1 研究方法

本实验是对牙本质粘结面的形态学观察。对于牙本质粘结的观察，应用扫描电镜和激光扫描共聚焦显微镜是常用的研究方法[2-5]。本研究选择硬组织磨片观察牙本质粘结是考虑牙体硬组织在不脱钙的情况下制作切片观察更符合硬组织的实际原貌。且为切片能观察硬组织内部情况。应用扫描电镜观察牙本质粘结混合层情况，样本也不需要脱钙，但只能观察样本的表面，若想观察硬组织内部，需将硬组织处理后劈裂观察粘结界面。扫描电镜观察样本的倍数可以达到2000倍以上，操作简便且经济。牙体硬组织切片观察最终厚度为20～25 μm，因切片过厚只能在光镜下观察，最大放大倍数为400，由于切片厚度限制，在更高的放大倍数下，图像就会模糊不清。从此点考虑扫描电镜具有优势。硬组织切片观察在光镜下获得的图像与扫描电镜相比质感不同；牙齿磨片可长期保存重复观察，而扫描电镜的样本必须干燥保存，而且对于形态不规则的样本，观察重复性差、重复观察成本高。所以两种方法各有优势。本实验应用硬组织磨片观察牙本质粘结情况获得的结果和结论与作者应用扫描电镜观察[6]的情况一致，这是一种牙本质观察方法的探索和尝试。

3.2 正常牙本质与硬化性牙本质

无论使用何种粘结系统，硬化性牙本质和正常牙本质均可获得厚度均匀的混合层，但所有样本混合层都存在某些较薄或较厚的区域，这与粘结面的平滑程度有关，较厚的地方是由于龋坏或牙本质粘结面自然形成的凹陷造成粘结剂的堆积。临床上粘结面若想获得均匀一致的混合层，需用风速微弱的气枪将粘结剂吹薄，或用小毛刷将粘结剂涂匀，特别在粘结剂易于堆积的转角或凹陷处去除多余的粘结剂，以免粘结剂过多影响粘结强度。

牙本质的粘结面经过酸蚀，水冲洗，将玷污层完全去除，使管间牙本质脱矿，胶原纤维微孔支架暴露，同时牙本质小管开放，底胶润湿并渗入胶原纤维间的微孔及牙本质小管，以有利于粘结剂的随后渗入，底胶和粘结剂在原位固化后，即与牙本质胶原纤维形成相互扣锁的混合层，内含有许多树脂突[7]。硬化性牙本质是指牙本质小管大部分堵塞，牙本质小管中沉积了钙化盐结晶体，其折光率与管间牙本质相似，表面呈半透明状。多数研究者认为硬化牙本质的粘接较正常牙本质困难得多。硬化性牙本质管周牙本质，管间牙本质和牙本质小管内矿化结晶脱矿较正常牙本质困难，牙本质粘结形成的混合层

更薄，树脂突短，很少甚至没有[4]。牙本质脱矿与酸蚀剂的种类浓度和作用时间均有关，谭建国[2]实验证明硬化性牙本质的大部分牙本质小管内可见柱状矿化物结晶体。15%磷酸或35%磷酸处理30秒和自酸蚀处理剂Adper Prompt-Pop(3M 公司ESPE，美国)处理15 s均不能去除牙本质小管内硬化结晶体。硬化牙本质表面结构与正常牙本质存在差异，其牙本质小管内堵塞的矿化结晶体可能对粘结产生影响。自酸蚀处理剂Adper Prompt-Pop的脱矿能力低于15%和35%磷酸。本实验在镜下观察无论硬化性牙本质还是正常牙本质获得的混合层树脂突并不是每个视野均可见得，在有些区域可见混合层与牙本质粘结面呈锯齿形似树脂突，因放大倍数有限，无法进一步放大证实。硬化性牙本质与正常牙本质用全酸蚀或自酸蚀两种方法处理获得的混合层厚度，形态质量均在本实验中无差别。硬化性牙本质同样可获得良好的粘结。从粘结获得的形态上看两者无差别，粘结后获得的粘结力两者有何差别需进一步实验探索。

[1] Kusunoki M,Itoh K,Hisamitsu H,et al.The efficacy of dentine adhesive system sclerotic dentine[J].J Dent,2002,30:91-97.

[2] 谭建国，周丽晶，冯海兰．三种酸蚀方法处理硬化性牙本质表面的超微形态研究[J]．口腔医学，2005，25(3):140-145.

[3] 周丽晶，谭建国，胡白河．牙齿非龋性硬化牙本质经自酸蚀粘结剂处理后超微形态[J]．实用口腔医学杂志，2005,21(6):823-825.

[4] 李 潇，施长溪，赵信义．牙本质表面状态对粘结界面影响的激光扫描共聚焦显微镜研究[J]．实用口腔医学杂志，2005，21(1)：71-74.

[5] Kwong SM,Tay FR,Yip HK,et al.An ultrastructural study of the application of dentine adhesive to acid-conditioned sclerotic dentine[J].Dent,2000,28:515-528.

[6] 李秋红，万君.两种粘结系统对硬化性牙本质处理后超微形态观察[J]．中国实用口腔科杂志，2008，1(5):601-602.

[7] 樊明文.牙体牙髓病学[M]．北京：人民卫生出版社，2000,98.