祖师麻注射液中紫丁香苷和祖师麻甲素的含量测定

周 颖，庞兴寿

（广西壮族自治区玉林食品药品检验所，广西 玉林 537000）

祖师麻注射液中紫丁香苷和祖师麻甲素的含量测定

周 颖，庞兴寿

（广西壮族自治区玉林食品药品检验所，广西 玉林 537000）

目的建立测定祖师麻注射液中紫丁香苷和祖师麻甲素含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法色谱柱为Agilent Zorbax SB－C18柱（250 mm×4.6 mm，5!m），流动相为乙腈－0.05%磷酸溶液（梯度洗脱），梯度变化检测波长为223 nm和327 nm，流速为1.00 mL/min，柱温为30℃。结果祖师麻甲素、紫丁香苷进样量分别在0.103 5～6.210 0!g和0.019 79～0.593 76!g范围内与其峰面积线性关系良好，平均回收率分别为93.14%和92.07%，RSD分别为2.16%和1.70%（n=6）。结论HPLC法简便准确、重现性好，可用于产品的质量控制。

祖师麻甲素；紫丁香苷；祖师麻注射液；高效液相色谱法

祖师麻注射液系由瑞香科植物黄瑞香的根皮和茎皮制成的灭菌水溶液，功能祛风除湿、活血止痛。为确保临床用药安全有效，本试验采用高效液相色谱（HPLC）法测定祖师麻注射液中紫丁香苷、祖师麻甲素的含量，报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪，包括DAD检测器、低压四元泵、在线脱气装置、自动进样器，ChemStation工作站（美国Agilent科技有限公司）；Metters电子分析天平（瑞士）；超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。紫丁香苷对照品、祖师麻甲素对照品（中国药品生物制品检定所，批号分别为 111574－200207，0900－200102）；乙腈（色谱纯），水（娃哈哈纯净水），其他试剂（分析纯）；祖师麻注射液（市售品）；祖师麻药材经玉林食品药品检验所中药室鉴定为正品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent Zorbax SB－C18柱（250 mm×4.6 mm，5!m），流动相：乙腈（A）和0.05%磷酸溶液（B）梯度洗脱（见表 1）[1]；流速：1.00 mL/min；柱温：30 ℃[2]；检测波长：0 min 为223 nm，40.00 min为 223 nm，45.01min为 327 nm，125.00 min 为 327 nm[3]；进样量：20!L。理论塔板数按紫丁香苷、祖师麻甲素峰计为8 000，各主要特征峰分离度均大于1.5。在此条件下，色谱图见图1。

表1 流动相梯度洗脱表

图1 祖师麻甲素对照品与供试品高效液相色谱图

2.2 溶液制备

精密称取祖师麻甲素对照品0.012 94 g，置25 mL量瓶中，用适量甲醇稀释至刻度，精密量取2 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀得祖师麻甲素对照品溶液；精密称取紫丁香苷对照品0.012 37 g，置50 mL量瓶中，用适量甲醇溶解并稀释至刻度，精密量取2 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得紫丁香甘对照品溶液。精密量取样品5 mL，置10 mL量瓶中，加水适量，超声处理（功率 160 W，频率 50 kHz）1 h，放冷，加水至刻度，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。

2.3 方法学考察

专属性考察：精密称取祖师麻药材粉末1.03 g，置10 mL量瓶中，加水适量，超声处理（功率 160 W，频率 50 kHz）1 h，放冷，加水至刻度，摇匀，滤过，滤液作为祖师麻药材提取溶液。按上述色谱条件进样，得祖师麻药材色谱（图2）。

线性关系考察：精密吸取紫丁香苷对照品溶液（0.01979mg/mL）1，4，8，16，30!L，祖师麻甲素对照品溶液（0.103 5 mg/mL）1，4，8，16，30!L，注入液相色谱仪，记录峰面积，以进样量为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线。紫丁香苷对照品回归方程为 Y=2 969.5 X －42.259，r=0.999 7（n=5），线性范围为 0.019 79 ～0.593 76!g；祖师麻甲素对照品回归方程为 Y=2 910.2 X－861.21，r=0.999 8（n=5），线性范围为 0.103 5 ～6.210 0!g。

精密度试验：分别吸取紫丁香苷及祖师麻甲素对照品溶液，连续进样6次。结果紫丁香苷及祖师麻甲素含量的 RSD为0.31%和0.18%（n=6），表明方法精密度良好。

图2 祖师麻药材高效液相色谱图

重现性试验：取同一批（批号为0701142）样品，按供试品溶液制备方法制备溶液并依法进样。结果紫丁香苷及祖师麻甲素含量的 RSD为0.54%和0.31%(n=6)，表明方法重现性良好。

稳定性试验：取同一批（批号为0701142）样品，按供试品溶液制备方法制备溶液，分别于 1，3，6，12，24 h 时进样测定。结果紫丁香苷及祖师麻甲素含量的 RSD为0.69%和0.44%（n=5），表明在常温下溶液24 h内稳定性良好。

加样回收试验：精密量取同一批（批号为0701142）样品2.0，2.5，3.0 mL各2份，分别精密加入质量浓度为0.517 6 mg/mL的祖师麻甲素对照品溶液2.0，2.5，3.0 mL，加入质量浓度为0.247 4 mg/mL的紫丁香苷对照品溶液0.3，0.4，0.5 mL。按供试品溶液制备方法制备溶液，进样测定。结果见表2。

表2 加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取样品6批，按供试品溶液制备方法制备溶液并进样测定含量。结果见表3。

表3 样品含量测定结果（n=2）

3 讨论

分别考察了不同的提取溶剂、提取时间、流动相和检测波长对结果的影响。结果各溶剂提取结果相近，50%乙醇毒性比较小，作为溶剂最好；用乙睛－0.05%磷酸水溶液梯度洗脱所得分离度最好；同时选定329 nm作为检测波长，在此波长下色谱峰间分离度、稳定性较好。比较了不同型号的色谱柱（Hypersil ODS2及Eclipse XDBC18），结果在不同型号色谱柱上的保留时间差异比较大，但都相对稳定。用Agilent 1100色谱仪试验，结果重现性良好。

[1]任燕冬,杨武亮,李越峰，等.祖师麻药材HPLC指纹图谱的建立[J].中成药,2007,29(5)：727－730.

[2]陈 博，王 万,原红果.高效液相色谱法测定祖师麻胶囊中祖师麻甲素的含量[J].时珍国医国药,2006,17(3)：366－367.

[3]位海强,袁才英,杨金风，等.祖师麻质量标准研究[J].广东药学,2004,14(3)：1 － 3.

Determination of Daphnetin and Syringin in Zushima Injection by HPLC

Zhou Ying,Pang Xingshou
(Yulin Institute for Food and Drug Control,Yulin,Guangxi,China 537000)

ObjectiveTo study and establish a HPLC method for the content determination of daphnetin and syringin in Zushima Injection.MethodsThe Agilent Zorbax SB－C18column(250 mm×4.6 mm,5!m)was used at the temperature of 30℃.The mobile phase consisted of acetonitile－0.05% phosphoric acid with gradient elution and the detection wavelength at 223 nm and 327 nm,the flow rates was 1.00 mL/min.ResultsThe calibration curve of daphnetin and syringin were in linear over the range of 0.103 5－6.210 0!g and 0.019 79－0.593 76!g,respectively.The average recovery rates were 93.14% and 92.07%,RSD was 2.16% and 1.70%,respectively.ConclusionThe method is simple and accurate with good reproducibility,which can be used for the quality control of Zushima Injection.

daphnetin;syringin;Zushima Injection;HPLC

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2010)04－0025－02

周颖（1983－），女，中药师，从事药品检验工作，（电子信箱）yingjoy.zy@163.com。

2008－10－31；二次

2009－07－07)