甜瓜枯萎病接种方法比较试验初报

王登明　张学军　冯炯鑫　王叶筠　伊鸿平

摘要：分别采用灌根法、米饭粒接种法、蘸根法及胚根接种法对甜瓜枯萎病进行接种试验，拟为甜瓜抗病育种提供依据。结果表明：米饭粒接种法发病率最高，达到99％；胚根接种法最低，为10％；灌根法发病率为66.7％；蘸根法发病率为91％，且操作简单、精确，最适合进行甜瓜枯萎病抗病鉴定研究。

关键词：甜瓜；枯萎病；接种；蘸根法

甜瓜枯萎病是甜瓜生产中的主要病害之一，近年来随着温室、大棚等设施瓜菜生产的发展。该病的发生日益严重。并有蔓延趋势，严重影响了甜瓜产量和品质，使瓜农遭受巨大经济损失。因该病为土传病害，药剂防治相对困难，并且由于长期用药，病原菌逐渐产生抗药性，防治效果日益降低，所以选育抗病品种被认为是最经济、最有效的措施。为此，国内外相继开展了甜瓜抗枯萎病育种研究。本文初步研究了甜瓜枯萎病苗期抗性鉴定接种的几种方法，选出了最佳的接种方法。拟为甜瓜抗枯萎病育种奠定基础。

1材料与方法

试验于2008年12月在海南三亚新疆农业科学院哈密瓜研究中心科技示范园进行。

1.1供试材料

1.1.1供试菌种甜瓜枯萎病病原菌为尖孢镰刀菌甜瓜专化型(Fusarium oxysporurrt f.sp.melonis)，在海南三亚新疆农业科学院科技示范园分离获得。供试甜瓜品种：金凤凰，新疆农业科学院哈密瓜研究中心提供。

1.1.2培养基(1)PDA培养基：200g马铃薯，20g葡萄糖，20g琼脂，1000mL水；(2)米饭培养基：取大米10g，倒入50mL三角瓶中，加20～30mL水于121℃下灭菌25min；(3)PD培养液：200g马铃薯，20g葡萄糖，1000mL水；(4)玉米粒培养基：取干玉米粒若干。倒入100mL三角瓶中，加30mL水于121℃下灭菌25min。

1.2接种方法

1.2.1供试材料准备将种子放置在电恒温烘箱中，38～68℃干热消毒2～5d。再将消毒后的干种子直接播于已消毒以椰糠和黄砂(8:1)混合物为基质的12孔育苗盘，每孔10粒。放在28℃左右温室大棚内正常管理备用。

1.2.2接种体准备将病原菌分别接种于盛有100mL PDA培养液的三角瓶、PDA平板、装有米饭粒和玉米粒的三角瓶中，25℃下培养7～10d备用。

1.2.3接种方法本试验共设3个处理，3次重复，每个重复30株。

1.2.3.1灌根接种法病原菌于PD培养液中振荡培养7～10d，培养温度25℃，培养液经4层纱布过滤配成稀释液，用血球记数板镜检记数孢子浓度，制备成浓度为1×10⁶个/mL孢子悬浮液用于接种。该稀释液含有病原菌产生的毒素，在幼苗子叶期轻轻拔起植株并用清水冲洗根部，栽种于盛有营养土的育苗钵内，每钵注入10mL稀释液，架拱22～25℃的温室中保湿48 h。然后在温室内正常管理，观察幼苗发病情况，接种后自发病之日起，每天观察幼苗的发病情况，共调查7d，统计总发病株数。

1.2.3.2米饭粒接种法在三角瓶中加少许大米粒，加水浸泡1～2min，将水倒出，121℃灭菌25min，接菌培养7～10d后，以1％的剂量拌入椰糠基质中。在幼苗子叶期，轻轻拔起植株并用清水冲洗根部，栽种于盛有接菌营养土的育苗钵内。架拱22～25℃的温室中保湿48 h，然后在温室内正常管理，观察病情同上。

1.2.3.3蘸根接种法用2L无菌蒸馏水洗培养皿上的孢子，血球记数板镜检记数，达到5×10⁶个/mL，幼苗子叶期轻轻拔起植株用清水冲洗根部，轻轻微伤根后在菌悬液中蘸根15min，然后定植在营养杯内。架拱22～25℃的温室中保湿48 h，然后在温室内正常管理，观察病情同上。

1.2.3.4胚根接种法在三角瓶中加少许玉米粒，加水浸泡1～2min，将水倒出，121℃灭菌25min，接菌培养7-10d后，用无菌蒸馏水冲洗玉米粒，用血球记数板镜检记数孢子浓度，制备成浓度为5×10⁶个/mL孢子悬浮液，再将催好芽的种子浸泡在菌液中30min后立即播种。然后在温室内正常管理，观察病情同上。

2结果与分析

试验结果表明：4种接种方法中，采用米饭粒接种法接种发病率最高，达到99％；蘸根法接种发病率次之，为91％；灌根法接种发病率低，仅66.7％，与米饭粒接种法发病率相差32.3个百分点：而胚根接种法发病率仅为10％。4种接种方法中，米饭粒接种法潜育期最短，为3.3d，但其发病率最高；蘸根法为6.3d；灌根法为8d；胚根接种法潜育期最长，为13.7d，且发病率最低。从操作上看，胚根接种法最简单，蘸根法也比较方便。方差分析表明，4种不同接种方法的发病率差异显著，且米饭粒接种法、蘸根接种法与灌根接种法和胚根接种法间的差异达到极显著水平。见表1。

3结论

研究者对甜瓜枯萎病接种方法已经做了很多工作，本试验第1次对甜瓜枯萎病4种接种方法进行了比较。结果表明：(1)灌根法操作简单，病原菌剂量最易把握，但是发病率太低、发病慢。(2)米饭粒接种法发病太快。几乎百分之百发病，病原菌剂量不易把握，操作较复杂，且不易搅拌均匀。(3)胚根接种法基本不发病，可能是病原菌孢子浓度达不到发病的理想浓度，笔者认为应进一步进行浓度梯度试验，从而验证此方法是否适宜接种甜瓜枯萎病。(4)从试验结果的准确性、试验操作的简便性及接种方法的效果方面综合考虑，试验的初步结论为采用蘸根法接种进行甜瓜枯萎病抗病鉴定最合适。